【摘 要】目的：探讨大肠肿瘤病人p53基因检测的应用及价值。方法：采集89例大肠肿瘤患者的肿瘤组织标本，对p53外显子5-8的突变情况进行检测，分析大肠肿瘤临床类型、组织类型与p53基因突变的关系。结果：p53发生突变的89例大肠肿瘤患者中，24例腺瘤中p53基因突变率为20.8%，I级不典型增生17例，II-III级不典型增生7例；二者p53基因突变率的对比具有统计学意义（P＜0.05）；65例腺癌中p53基因突变率为33.8%，高分化12例，中、低分化46例，粘液腺癌7例；三者p53基因突变率的对比无统计学意义（P＞0.05）。结论：p53基因检测对大肠癌的癌前监控及诊断具有重要意义。
【关键词】大肠肿瘤；病理检查；p53基因
近年来，大肠癌发病率不断升高，如何加强大肠肿瘤癌前病变的监控、提升大肠癌早期诊断的效果，成为当前临床医师关注的重点问题[1]。目前，基因诊断技术得到迅速发展，采用基因检测补充大肠癌的常规诊断，可为大肠癌的癌前监控、早期诊断提供重要依据。本研究以我司2017年1月至2018年6月收治的大肠肿瘤患者为对象，通过肿瘤组织标本的p53基因检测，探讨了p53基因突变在大肠肿瘤病理改变及病情发展中的作用。现报告如下。
1资料和方法
1.1一般资料
本组89例患者均经病理检查证实为大肠肿瘤，男52例，女37例；年龄40-78岁，平均（52.5±6.8）岁。其中，大肠癌患者65例（73.0%），大肠腺瘤患者24例（27.0%）。另选取8例良性肠病的正常肠黏膜组织作为对照。
1.2方法
1.2.1标本处理
在1ml生理盐水中清洗肿瘤组织，匀浆后，将液体吸出，离心、弃上清液，添加100μl DNA提取液，煮沸，再次离心、取上清液，稀释5倍后取2μl 进行PCR反应。
1.2.2PCR反应
取PCR反应液26.5μl Taq酶1.5μl混匀，分装至0.5ml离心管中，每管28μl，添加提取好的2μl DNA标本进行离心处理；扩增条件：94℃预变性（180s），94℃（45s）→60℃（45s）→72℃（60s），35个循环，放置5min（温度72℃）。
1.2.3电泳检测
扩增后，取下层液5μl，加入电泳指示剂（1μl）混匀，电泳20-30min，利用紫外检测仪进行观察，参照正常对照组，同一位置显现橙黄色条带即进行SSCP分析。
1.2.4单链构象多态性（SSCP）分析
经灌胶、变性、电泳、银染处理后，进行结果判定，每次电泳均同时做1例对照，以此作为参照，对其他样本的单链泳动有无异常进行判断。
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1.3统计学方法
软件SPSS 16.0处理数据，计数数据进行x2检验，P＜0.05为对比差异具有统计学意义。
2结果
89例受检者中，腺瘤24例，p53基因突变5例，突变率为20.8%；腺癌65例，p53基因突变22例，突变率为33.8%；二者对比无统计学意义（x2=1.4044，P＞0.05）。
24例腺瘤患者中，I级不典型增生17例，p53基因突变1例（5.9%）；II-III级不典型增生7例，p53基因突变4例（57.1%）；二者对比具有统计学意义（x2=7.8995，P＜0.05）。65例腺癌患者中，高分化12例，p53基因突变3例（25.0%）；中、低分化46例，p53基因突变16例（34.8%）；粘液腺癌7例，p53基因突变3例（42.9%）；粘液腺癌与高分化及中、低分化两两对比无统计学差异（x2=0.6525和0.1722，P＞0.05）。
3讨论
大肠癌是临床常见的消化道恶性肿瘤，可对人类生命健康造成严重危害。临床中，大多数患者就诊时已错过手术最佳时机。所以，对大肠癌的发生及发展进行研究，提升疾病早期诊断的准确性，成为亟待解决的重要问题。研究认为[2]，大肠癌的发生与DNA复制过程中各种修复基因缺陷密切相关，通过DNA检测可为大肠癌的诊断提供依据。p53基因是人类肿瘤相关性最强的抑癌基因，p53基因突变会使正常细胞失去抑癌作用，所以p53基因在腺瘤进展至腺癌的过程中起着至关重要的作用。目前，p53基因改变与大肠癌的发生、进展之间的关系已成共识[3]。本研究中，腺癌p53基因突变率高于腺瘤，但二者无统计学意义（P＞0.05），说明单一的细胞基因突变不足以致使癌症发生，而大肠癌的发生是多基因突变共同作用导致的结果，故还需联合MCC、DCC等基因对肿瘤恶变的潜能进行预测[4]。大肠癌的进展过程相对比较漫长，腺瘤至癌肿的进展过程呈阶段性发展。腺瘤表现为不典型增生，而这是癌前黏膜的特征性改变，故腺瘤这一癌前病变是大肠癌疾病的防治重点。本研究腺瘤II-III级不典型增生的p53基因突变率高于I级不典型增生（P＜0.05），提示腺瘤的癌基因表达与不典型增生程度有一定关联。腺癌的高分化、中低分化、粘液腺癌之间p53基因突变率的对比无统计学差异（P＞0.05），说明大肠癌的病理类型、分化程度与p53基因突变无相关性。
总之，p53基因检测可以预测腺瘤的癌变倾向，同时与病理检查相结合，对大肠癌进行癌前监控和早期诊断，可以取得满意结果。
参考文献：
[1]钟选芳，张晓慧，甘爱华，等.c-Myc、p53和Ki-67在不同形态的大肠侧向发育型肿瘤中的意义[J].江苏医药，2017，43（03）：171-173.
[2]苏晓路，李晓鸣，田卫华，等.Aurora-A mt-P53和c-myc在大肠癌中的表达及意义[J].中国肿瘤临床，2014，41（03）：170-174.
[3]黄志伟，蔡雪彦.P53、PCNA、ki-67在大肠癌中的表达与临床意义[J].中国组织化学与细胞化学杂志，2013，22（06）：508-512.
[4]侯睿哲，侯睿智，彭云香，等.大肠肿瘤p53和ki-ras基因协同突变的研究[J].中国实验诊断学，2010，14（06）：917-919.
论文作者:邹秋艳
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2018年5月上第9期
论文发表时间:2018/11/22
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