魏娉 路三军通信作者 桂红武 姜琳娜 安欣 郭俊萍 邯郸市第一医院病理科 河北 邯郸 ０５６００２
【摘要】 目的 观察食管鳞癌组织中Slug蛋白表达变化,并分析其与微血管密度(microvasculardensity,MVD)的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测食管鳞癌(７０例)及其癌旁组织(２０例)中的Slug蛋白,采用抗CD３４多克隆抗体标记血管内皮细胞以检测MVD,分析二者的关系.结果 食管鳞癌组织中,Slug蛋白表达率高于癌旁组织(P＜０．０５),且与分化程度、浸润深度、淋巴结转移及pTNM 分期相关(P＜０．０５);食管鳞癌组织中,MVD高于癌旁组织,且与分化程度、浸润深度、淋巴结转移及pTNM 分期相关(P＜０．０５);食管鳞癌组织中,Slug与MVD表达均增加.结论 食管鳞癌组织中Slug与MVD可能存在协同作用,共同促进肿瘤的血管生成并协调食管癌的浸润转移. 【关键词】 食管鳞癌; Slug; CD３４; MVD; 免疫组织化学【中图分类号】R７３５【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１０－０４３０－０２
１ 资料与方法
１．１ 临床资料选取邯郸市第一医院２０１２年５月~２０１４年５月手术切除并经病理诊断为食管鳞状细胞癌的标本７０例,其中男４０例、女３０例,年龄６４．６±６．０７(４５－７７)岁.食管癌pTNM 分期(UICC,２００９);Ⅰ、Ⅱ期４４例,Ⅲ、Ⅳ期２６ 例;病例术前均未行放、化疗.另在７０例食管癌标本中随机选取２０例癌旁组织(肿瘤浸润边缘以外＞５cm)作为对照.
１．２ 主要试剂及方法１．２．１ 主要试剂 兔抗人Slug多克隆抗体浓缩液(１:１００),购自北京博奥森生物有限公司. 兔抗人CD３４多克隆抗体工作液、DAB 显色试剂及SP试剂盒购自福州迈新试剂有限公司
１．２．２ Slug检测方法 采用免疫组织化学SP法.组织标本经１０％中性甲醛固定,石蜡包埋,４μm 连续切片.SP法操作步骤严格按照试剂盒说明书进行.用已知阳性切片作为阳性对照,以PBS代替一抗作为阴性对照.Slug以细胞核和(或)细胞质出现棕黄色或黄色颗粒为阳性细胞.每张切片观察１０ 个高倍视野(×４００),每个视野计数１００个肿瘤细胞,根据阳性细胞染色强度:０ 分未着色、１分浅黄色、２分棕黄色、３分棕褐色;按阳性细胞百分比:１分１０≤％、２分１１％－２５％、３分２６％－７５％、４分７６％－１００％,将细胞染色程度计分与阳性百分数计分相乘即为综合评分,１－２分阴性(－)、３－４分弱阳性(＋)、６－８分阳性(＋＋)、９－１２分强阳性(＋＋＋),分值大于等于３即可定为阳性.
１．２．３ MVD计数方法 按Weidner等[２]的方法.在低倍视野(×４０)下观察切片,选取肿瘤微血管分布密度最高区,再在中倍视野(×２００)下计数５个视野的微血管数目,取平均值,即为MVD.在肿瘤浸润区域任何被抗体染色的单个细胞或细胞团,不管有没有形成食管鳞状细胞癌管腔,只要它与周围的微血管、肿瘤细胞和其他连接组织成分有一个清楚的分离,都认为是１个可计数的微血管.１．２．４ 统计学方法 采用SPSS１３．０软件包进行统计学分析.计量资料以X±s表示,组间比较采用t检验及方差分析;计数资料以百分比表示,样本率的比较采用χ２检验. ２ 结果２．１ 食管癌及正常组织中Slug表达及MVD值Slug在正常对照组中的表达较低,阳性率为５％(图１),在食管癌中的表达显著升高,阳性率为７４．３％(图２),差异有统计学意义(P＜０．０５).CD３４阳性着色位于血管内皮细胞,在间质及癌巢中均有分布,正常食管组织中MVD值:３５．１３±４．７３(图３),食管鳞状细胞癌组织中MVD值４７．８９±６．２３(图４),食管癌组MVD值明显高于正常对照组,两组比较差异有统计学意义(P＜０．０５). ２．２ 食管鳞状细胞癌组织中Slug蛋白表达及MVD 值与临床病理参数的关系Slug阳性表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及pTNM 分期有关(P＜０．０５),与性别、年龄及肿瘤大小无关(P＞０．０５).MVD 值与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、pTNM 分期有关,(P＜０．０５,见表１),与性别、年龄及肿瘤大小无关(P＞０．０５).见表１.
３ 讨论
Slug又称为Snail２,是主要的EMT转录因子.研究表明Slug可促使上皮间质转化,在胃癌、结肠癌、肝癌、宫颈癌、卵巢癌、头颈部鳞状细胞癌等许多肿瘤组织中呈中高表达,被视为肿瘤转移的促进因素,作为EMT 过程中的关键调控因子,在肿瘤细胞增殖分化、侵袭、转移、抗调亡以及血管生成等过程中起了重要作用[１].本实验研究表明:Slug在食管鳞状细胞癌中的表达显著高于正常,且与肿瘤的浸润深度、分化程度、PTNM 分期、以及淋巴结的转移相关,Slug表达增加提示不良预后.这与文献报道研宄结果基本一致[２,３]. 血管生成是肿瘤侵袭性生长和转移的必备条件之一,CD３４易在新形成的内皮细胞上表达,是目前已知血管内皮细胞的最佳标志之一,其标记的MVD 可以较好地反映肿瘤组织中的新生血管密度.新生血管不仅为肿瘤细胞的增殖提供养分,而且是肿瘤细胞进一步侵袭的重要途径.本组实验中食管癌组织MVD值明显高于癌旁组织组织,且与浸润深度、淋巴结转移及pTNM 分期均相关,证实MVD能够反映食管癌的生长、浸润及转移能力.由于MVD 能够反映肿瘤组织内部局部微循环情况,也可反映肿瘤血管生成的程度,而后者是肿瘤演进及转移的基础[４].Ueda等认为MVD计数可作为判断癌复发和预后的可靠指标[５]. 本组病例中食管癌组织中Slug蛋白过表达病例MVD显著高于未过表达者,提示Slug蛋白过表达可能促进食管癌内的血管生成,并由此促进了食管癌的演进.本组实验证实在食道癌组织中MVD 值随Slug表达强度增强而增高,二者存在协同作用,共同促进肿瘤浸润、转移,但具体机制尚不十分清楚, 可能是以下途径:通过CXCR２配体而促进肿瘤的血管生成[６];在EMT 中作为转录因子可能参与多种血管生成的因子生成,如血管内皮生长因子等促进肿瘤微血管生成[７];Slug作用MMP－２通过降解ECM 中的成分、促进肿瘤新生血管形成[８].综上所述,在食管癌中Slug和MVD均表达上调,二者相互促进并协调食管癌的侵袭转移,联合检测两者将有助于判断食管癌预后及为临床治疗提供有意义的理论依据.
参考文献[１] XieF,LiK,OuyangX．Twist,anindependentprognosticmarkerforpredictingdistantmetastasisandsurvivalratesofesophagealsquamouscellcarcinomapatients[２] TakkunenM,GrenmanR,HukkanenM,etal．Snail－dependentandindependentEpithelial－MesenchymalTransitionin OralSquamousCarcinomaCells [J]．Journalof Histochemistry & Cytochemistry,[ ２００６,５４(１１):１２６３－１２７５． ３] UsamiY,SatakeS,NakayamaF,etal．Snail－associatedepithelialmesenchymaltransitionpromotesoesophagealsquamouscellcarcinoma[ motilityandprogression[J]．JPathol,２００８,２１５(３):３３０－３３９． ４] FolkmanJ．Roleofangiogenesisintumorgrowthandmetastasis[J]．SeＧ[ minOncol,２００２,２９(６Suppl６):１５－１８． ５] UedaM,TeraiY,KumagaiK,etal．CorrelationbetweentumorangioＧgenesisandexperssionofthymidinephosphorylase,andpatientoutcome[ inuterinecervicalcarcinoma[J]．HumPathol,１９９９,３０(１１):１３８９．２． ６] YanagawaJ,WalserTC,ZhuLX,etal．SnailpromotesCXCR２ligand－dependenttumorprogressioninnon－smallcelllungcarcinoma[J]．[ ClinCancerRes,２００９,１５:６８２０－６８２９． ７] ZhangJ,OhKH,XuH,etal．VascularendothelialgrowthfactorexＧp[ressioninperitonealmesothelialcellsundergoingtransdifferentiation [ J]．PeritDialInt,２００８,２８:４９７－５０４． ８] Quaranta M,DanieleA,Coviello M,etal．MMP－２and MMP－９、V(EGFandCA１５３inbreastcancer[J]．Anti－cancerRes,２００７,２７ ５B):３５９３．
论文作者:魏娉 路三军通信作者 桂红武 姜琳娜 安欣 郭俊萍
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年9月供稿
论文发表时间:2016/2/24
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