（湖南医药学院第一附属医院（原怀化市第三人民医院） 418000）
摘要：目的 探讨荧光定量聚合酶链式反应联合检测性传播疾病病原微生物的临床价值。方法 选取来我院妇科、皮肤科和泌尿外科等就诊的疑有性传播疾病患者100例作为研究对象，用实时定量PCR（FQ -PCR）方法，对淋球菌（NG）、解脲支原体（UU）、人乳头瘤病毒（HPV）6/11型以及16/18型四种性传播疾病病原微生物进行定量检测，并与定性PCR结果比较。结果 100例标本均对四种性传播疾病病原微生物进行FQ - PCR检测，结果按感染率从高到低依次排列为UU（36.00%）、HPV6/11（23.00%）、HPV16/18（13.00%）和TP（10.00%）；随机抽取50例标本，并对其分别进行FQ-PCR与PCR检测，结果显示两种检测方法之间对于四种性传播疾病病原微生物的阳性率并无明显差异（P>0.05）。结论 临床上利用荧光定量聚合酶链式反应联合检测性传播疾病病原微生物具有快速便捷以及高效的优点，对监测、预防和控制以及预后评估等方面都具有较高的临床价值，值得广泛推广应用。
关键词：荧光定量；聚合酶链式反应；性传播疾病病原微生物；临床价值
[Abstract] objective to investigate the clinical value of the microorganism of pathogenicity of pathogenicity of the disease by fluorescence quantitative polymerase chain reaction. Methods select to hospital department of gynaecology，dermatology and urology clinic，100 cases of patients with suspected sexually transmitted disease as the research object，using real-time quantitative PCR （FQ - PCR）method，to neisseria gonorrhoeae （NG），solution urea mycoplasma （UU）and human papilloma virus （HPV）type 6/11 and 16/18 four kinds of sexually transmitted diseases quantitative detection of pathogenic microorganisms，and compare with the qualitative PCR results. Results all 100 cases of specimens of four kinds of sexually transmitted diseases （FQ - PCR detection of pathogenic microorganisms，the results according to the from high to low in order to arrange for UU infection rates （36.00%），HPV6/11 （23.00%），HPV16，18 （13.00%）and TP （10.00%）. Randomly 50 cases of specimens，and its FQ - PCR and PCR tests respectively，according to the results between the two detection methods for four kinds of the positive rate of sexually transmitted diseases pathogenic microorganisms and no significant difference （P > 0.05）. Conclusions the clinical use of fluorescent quantitative polymerase chain reaction detection of sexually transmitted diseases pathogenic microorganisms has the advantages of quick and easy and efficient for monitoring，prevention and control and prognosis assessment has high clinical value in such aspects as，is worth popularization and application widely.
[Keywords] fluorescent quantitative；Polymerase chain reaction Sexually transmitted disease pathogenic microorganisms；Clinical value
近年来在泊来文化的快速传播、流动人口的增加和观念意识的转变等多重因素影响下，导致临床上性传播疾病的患者的数量呈现逐年上升和年轻化趋势[1]，由于此类疾病具有较强的传染性，因此临床亟需快速、准确并特异性高的检测手段来进行积极的预防和控制。笔者利用荧光定量聚合酶链式反应联合检测性传播疾病病原微生物取得了令人满意的结果，现具体报告如下。
1 资料与方法
1.1一般资料
选取来我院就诊的疑有性传播疾病或近期有不洁性生活接触的100例患者作为研究对象，其中男42例，年龄16-54岁，平均（33.7±4.2）岁，女58例，年龄18-52岁，平均（31.2±3.8）岁，患者就诊均自述有尿急、尿频、尿痛、尿道刺痒等症状，已排除就诊前自行服用抗生素治疗患者。两组一般资料对比差异不明显，无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法[2]
用FQ -PCR方法，对淋球菌（NG）、解脲支原体（UU）、人乳头瘤病毒（HPV）6/11型及16/18型四种性传播疾病病原微生物进行定量检测，并与定性PCR结果比较。
1.2.1标本采集
采用棉拭子在无菌条件下伸入女性宫颈和男性尿道口，旋转并停留片刻后取出。采集的标本2~5℃密封保存备用。
1.2.2仪器与试剂
1.2.3检测方法
模板制备：将装有采集标本的无菌试剂管中加入生理盐水并充分震荡使之混合均匀，将形成的混合液倒入无菌的EP管，倒出上清液并沉淀，加50μL的DNA提取液，混合均匀后沸水中热浴10min，再次10000r/min离心5min，取二次提取液上清5μL置入荧光定量扩增管进行扩增。
FＱ-PCR扩增：包含引物、荧光探针、底物ｄNTP、Ｔaq聚合酶、离子buffer和模板的 反应体系50μＬ，94℃预变性2min，然后按94℃25s、55℃25s、、72℃30s，36个循环，72℃延伸过程中比对荧光条带结果，扩增结束导入标准曲线，定量结果以超过5×102copy/μl为阳性。
定性PCR扩增：包含引物、底物ｄNTP、Ｔaq聚合酶、离子buffer的40μＬPCR扩增体系内加入５μL模板DNA，预变性98℃3min，加入2UTaq聚合酶，94℃0.5min，54℃46s，72℃1min，45个循环，72℃5min。取扩增产物10μＬ进行1.5％琼脂糖电泳，溴化乙锭做指示剂，6Ｖ/cm电泳120min，凝胶置紫外透照仪下比对荧光条带结果。
实时定量PCR仪采用中山大学达安基因股份有限公司生产的DA7600型荧光定量PCR，试剂购自湖南圣湘生物科技有限公司。
1.3统计学处理
应用SPSSl9. 0版软件对本次研究数据进行统计分析，计数资料采用X2检验，均数±标准差（士S）表示计量数据，采用t检验，以P<0.05为具有统计学意义。
2结果
2.1 四种性传播疾病病原体FQ-PCR检测结果
100例标本均对四种性传播疾病病原微生物进行FQ - PCR检测，结果按感染率从高到低依次排列为UU（36.00%）、HPV6/11（23.00%）、HPV6/18（13.00%）和TP（10.00%）。具体见表1。
3讨论
FQ-PCR技术是在传统PCR技术上进行核酸扩增以及探针杂交技术的新型检测方法，由于该技术较传统的PCR技术不仅具有高敏感度、高精量度等优点，而且满足定量和定性的双重需求，故在病原微生物的现代检测中得到广泛使用[3]。
本研究主要检测四种较为常见的性传播疾病病原微生物，其中UU主要集中在泌尿生殖管道的黏膜表面，一旦当黏膜受到损伤或患者自身机体的免疫力下降时，UU就会趁机开始大量增殖，并因此而导致患者出现明显的临床症状和体征；HPV目前在临床检验中较为多见的主要是低危的6/11型和高危的16/18型，但是需要警惕的是持续高危型HPV感染是导致宫颈癌的重要危险因素；NG是临床上最为常见、也是最为主要的淋病病原体，患者一旦感染后则会主要表现出明显的泌尿系统或生殖系统的急性炎症，严重者出现化脓性感染[4]。而本研究中100例标本均对四种性传播疾病病原微生物进行FQ - PCR检测按感染率从高到低依次排列为UU（36.00%）、HPV6/11（23.00%）、NG（16.00%）和HPV16/18（13.00%）；其次FQ-PCR的每项微生物的检测阳性率均高于传统PCR，虽然差异不显著，但这可能与本次研究的样本数过少有关，这也和王晓东等[5]的研究结果相一致。
总而言之，临床上利用荧光定量聚合酶链式反应联合检测性传播疾病病原微生物具有快速便捷以及高效的优点，对监测、预防和控制以及预后评估等方面都具有较高的临床价值，值得广泛推广应用。
参考文献
[1]王玉倩，薛秀花. 实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 生物学通报，2016，51（2）：1-6.
[2]张翠英，李菊平，杜志强. 实时荧光定量PCR法与培养法同时检测淋病奈瑟菌的临床应用[J]. 中国艾滋病性传播疾病，2015，21（4）：338-338.
[3]王林. 在医学检验中应用实时荧光定量PCR技术的研究进展[J]. 当代医药论丛，2015，13（3）：8-9.
[4]尚慧锋，王小艳. 荧光定量聚合酶链反应检测多种泌尿生殖道病原体感染分析[J]. 中国药物与临床，2014，14（5）：653-655.
[5]王晓东，王然，李凤焕，等. 实时荧光定量聚合酶链反应联合检测6种性传播疾病病原微生物的研究[J]. 国际检验医学杂志，2016，37（20）：2919-2921.
论文作者:彭兰
论文发表刊物:《航空军医》2017年第8期
论文发表时间:2017/6/21
标签：定量论文; 病原论文; 微生物论文; 荧光论文; 疾病论文; 性传播论文; 链式反应论文; 《航空军医》2017年第8期论文;