邹超世1 谢钰玲2 梁建华1 吴鹏3（ 1 广西玉林市第一人民医院检验科 537000）（ 2 广西玉林市妇幼保健院检验科 537000）（ 3 广西玉林市第一人民医院心内科 537000）
【摘要】目的 分析评价三联合一胶体金法心功酶检测卡临床检测性能。方法 以化学发光法为相对标准，从灵敏度、特异度、重复性、检出限等方面评价某国产三联合一胶体金法检测卡测定血清肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶同工酶(CK-MB) 和肌钙蛋白I(cTnI) 的临床检测性能。结果 与化学发光法比较，胶体金法所测CK-MB，Mb 和cTnI 的相对敏感度分别为45.7%，37% 和65.7%。相对特异度分别为88.8%，95.2% 和90.7%，相对准确度分别为88.7%，83% 和94.1%。检测卡最适标本量为120ul，观察结果最佳时间为10m in，检测结果在20m i n 之内稳定。该方法重复性良好，实验不受溶血、脂血的干扰。结论 心肌标志物三合一胶体金法的特异度和准确度相对较好，但敏感度偏低。作为心肌标志物的急诊检测方法，国产试剂有必要进一步提高其临床检测性能。
【关键词】 胶体金法 心肌梗死 性能评价【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）36-0030-03目前，心血管疾病严重威胁着人类的健康，是造成人类死亡的主要原因之一[1-2]。目前用于心肌梗死诊断的主要心肌标志物包括肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶同工酶(CK-MB) 和肌钙蛋白I(cTnI)[3-4]，检测方法主要为免疫分析法、化学发光法，胶体金免疫层析法等[5]。化学发光法是较新而优秀的实验室检验技术[6]，具有极高的特异性、正确度和稳定性，成为实验室的主要检验手段，但其成本较高，成为推广应用的障碍[7]。
胶体金免疫层析法能更早期、方便地对心肌梗死进行筛查和诊断，及时干预治疗因而便于在临床推广，特别是基层医院。目前有多种国产的三联合一胶体金法心功酶检测试剂卡，但其临床检测性能少有评价。本文以全自动化学发光法为参照，对比分析了某国产胶体金免疫层析法试剂的检测性能。
1 材料与方法1.1 一般材料 标本186 例本医院住院患者, 其中女65 例，男121 例，年龄35-75 岁，根据WHO 推荐的临床诊断标准，心梗患者35 例，不典型心绞痛患者30 例，其余为高血压，冠心病等患者。血清均无明显溶血，黄疸、脂血等。
1.2 试剂与仪器 MB,CK-MB, cTnI 三联胶体金免疫层析试剂盒来自厦门英科新创生物技术有限公司。批号：123163，有效期至2014年12 月。参照试剂为罗氏原装配套试剂，检测原理为化学发光免疫分析法，检测仪器为Cobas E601 全自动化学发光仪，正常参考水平分别为：MB<75ng/ml, CK-MB<1.35 ng/ml, cTnI<1.5ug/L。
1.3 方法1.3.1 比对试验 室温下严格按照说明书，由同一检验师操作，吸取血清标本120u l 加入检测孔中，均在10m i n 后读取结果，根据目测试剂板条测试区紫色条带的有无、显色程度是否低于、等于或高于质控区紫色条带而确定为阴性、弱阳性、阳性和强阳性。以化学发光法所测值为真值,CK-MB ≤ 1.35 ng/ml 为阴性，大于1.35 ng/ml 为阳性;MB ≤ 75ng/ml 为阴性, 大于75ng/ml 为阳性; cTnI ≤ 1.5ug/L 为阴性, 大于1.5ug/L 为阳性，将试纸条测定结果和化学发光测定结果比较，评价2 种方法的相关性及试纸条法的相对灵敏度、相对特异性、相对准确度等。
1.3.2 最佳检测条件的选择 将已由化学发光法检测CK-MB 浓度为4.6、22、90ng/ml,MB 浓度为35、85、325 ng/ml 和cTnI 浓度为0.35、1.6、9.3 n g /ml 共9 个样本分别进行相关试验。①最适标本量实验：分别吸取血清标本30,60,90,12,150u l 加入检测孔中，均在10min 后读取结果。②最佳观察时间实验：吸取血清标本120ul，在3、5、10、15、20、30、60、90min 时读取结果。
1.3.3 灵敏度试验 将已由化学发光法检测C K -MB 浓度为120.1ng/ml、MB 为1300ng/ml、cTnI 为23.8ng/ml 的标本稀释，CK-MB 相应浓度为100、50、20、5.3、2.5ng/ml，MB 为610、200、100、50、40ng/ml 和cTnI 为8.5、1.5、1.0、0.6、0.3 ng/ml 共15个样本。按照说明书每个标本重复测定3 次。
1.3.4 干扰试验 准备高、中、低浓度干扰实验各一组，每组设实验管一个，对照管一个。①溶血干扰实验：实验管均加入心功三项阴性溶血血清0.9mL，对照管均加入心功三项阴性无溶血血清0.9mL，向实验管和对照管依次加入心功三项高、中、低浓度样本0.1m L，混匀后检测。②脂血干扰实验：实验管均加入心功三项阴性脂血血清0.9m L，对照管均加入心功三项阴性无脂血血清0.9m L，向实验管和对照管依次加入心功三项高、中、低浓度样本0.1mL，混匀后检测。
1.3.5 重复试验 将已由化学发光法检测CK-MB 浓度为92.6n g / m l、MB 为700n g / m l、c T n I 为12n g / m l 的标本稀释，CK-MB 相应浓度为92.6、46.3、23.1、11.6、4.8ng/ml；MB 相应浓度为700、350、175、87、43ng/ml 和cTnI 相应浓度为12、6、3、1.5、0.4 ng/ml 共15 个样本。按照说明书操作，每个样本重复测定10 次。
1.4 统计学分析胶体金免疫层析半定量结果的阴性、弱阳性、阳性和强阳性分别用0，1，2 和3 表示，与化学发光法的结果进行秩相关分析。以化学发光法为标准，计算胶体金免疫层析各项目的相对敏感度、相对特异度及相对准确度，评价其临床诊断性能，统计软件为S P S S13.0。
表1 心肌标志物三合一胶体金法相对检测性能.jpg)
2 结果2.1 胶体金免疫层析法和化学发光法检测结果相关性分析将胶体金免疫层析法目测结果阴性、弱阳性、阳性和强阳性分别转换为0，1，2 和3 之后，与定量化学发光法结果进行秩相关分析：低浓度时肌红蛋白，肌钙蛋白I 和肌酸激酶同工酶相关系数分别为r =0.311，r =0.24，r =0.235；高浓度时分别为r =0.91，r =0.90，r=0.89。
2.2 比对试验 根据化学发光法三个定量指标的正常参考值上限，确定各自阳性和阴性标本，将胶体金免疫层析法检测结果中的弱阳性、阳性及强阳性视为阳性，计算胶体金免疫层析法三个指标相对敏感度、相对特异度和相对准确度，见表1。由实验结果可知MB,CK-MB,cTnI 都有较高的相对特异度、准确度，但是相对敏感度偏低。
2.3 最佳检测条件的选择2.3.1 最适标本量实验 当检测卡加入标本量为60u l 时，各组各检测指标均因为没有出现对照线而无法判读，当检测卡加入标本量为90u l 时，部分组部分指标出现无法判读的现象，当检测卡加入标本量为120ul 及120ul 以上时，各组结果均能正常判读，呈色均一。检测卡加入最适标本量为120ul。
2.3.2 最佳观察时间实验 当检测卡加入标本3min 后观察结果，除对照组外其余各浓度组结果均因为尚未出现对照线而无法判读，在10-20m i n 这段时间，各组均出现对照线，可以判读结果，且测试线颜色稳定，20m i n 之后，测试线有颜色加深和变黑的趋势，不再适合作为检测结果。综合准确性和实用性考虑，最佳观察时间为10m i n，检测结果在20min 之内稳定。
2.4 灵敏度试验 CK-MB ≤ 5.3ng/ml 时，试纸条检测为阴性；CK-MB 浓度为5.3-20 n g /ml，试纸条检测为弱阳性；CK-MB ≥ 20 n g /ml 时，试纸条检测为阳性；试纸条CK-MB 最低检测限为5.3 ng/ml。MB ≤ 50 ng/ml 时，试纸条检测为阴性；MB 浓度为50-100n g /ml 时，试纸条检测为弱阳性；MB ≥ 100 n g /ml 时，试纸条检测为阳性，试纸条MB 最低检测限为50ng/ml。cTnI ≤ 0.6ng/ml 时，试纸条检测为阴性；cTnI 浓度为0.6-1.0ng/ml 时，试纸条检测为弱阳性；cTnI 浓度≥ 1.5ng/ml 时，试纸条检测为阳性，试纸条cTnI 最低检测限为0.6ng/ml。
2.5 重复试验 CK-MB 浓度在4.8-92.6ng/ml 范围内结果呈色均一，其中浓度为4.8ng/ml 时，1 次结果显示阳性，另9 次显示为阴性。
MB 浓度在43-700ng/ml 范围内结果呈色均一，各浓度梯度结果一致。
cTnI 浓度在0.4-12ng/ml 范围内结果呈色均一，其中浓度为1.5ng/ml时，1 次结果显示阴性，另9 次显示为阳性。
表2 溶血干扰试验
2.6.2 脂血干扰实验 脂血组和对照组结果比较，没有任何差异，脂血不会影响CK-MB、MB、cTnI 的检测, 两组实验结果见表3。
3 讨论3.1 胶体金标记是一种常用的标记技术，方便快捷的同时，提高了临床检测能力，其作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用[8]。
3.2 本文利用当前公认的全自动化学发光检测方法作为参照，对MB,CK-MB, cTnI 三联检测卡的检测性能进行相对分析。结果表明，MB,CK-MB, cTnI 三联检测胶体金法与化学发光法所测三项指标有相关性，但是相关程度较低。估计原因主要在于胶体金定性检测法的局限性，也与检测卡本身检测灵敏度有关。检测卡最适标本量为120u l；CK-MB,MB, cTnI 最低检测限分别为5.3ng/ml，50ng/ml 和 0.6ng/ml。最佳观察时间为10min，检测结果在20min 之内稳定。实验重复性好，特异性高，不受脂血溶血影响。另外，胶体金免疫层析法心功三项和化学发光法相比，其相对准确度和相对特异度都超过了80％，可以作为急查心功能的初筛手段，具备了一定的临床应用价值。但是，对事关病人生命的临床急症，其检测性能远未达到临床要求，相对于化学发光法检测MB,CKMB,cTnI，相对灵敏度偏低，难以满足AMI 早期诊断要求。鉴于此，应当提高心肌标志物胶体金免疫层析法检测低浓度的心肌标志物的检测灵敏度，同时兼顾较高的特异度，为临床提高诊断水平。
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论文作者:邹超世1 谢钰玲2 梁建华1 吴鹏
论文发表刊物:《中外健康文摘》2013年36期
论文发表时间:2014-4-2