（浙江嘉兴盛康医药公司 浙江嘉兴 314001）
【摘要】建立测定三黄片中盐酸小檗碱和黄芩苷含量的高效液相色谱方法。采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm, 5μm)；流动相为0.1%磷酸(A)-乙腈(B)；梯度洗脱；流速为1.0mL?min-1；检测波长为333nm。小檗碱在0.0061～0.0243mg?mL-1范围内，黄芩苷在0.038～0.152mg?mL-1范围内线性关系良好。本文中所建立的色谱方法可以简便、准确同时测定三黄片中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量。
【关键词】三黄片；盐酸小檗碱；黄芩苷；高效液相色谱法
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）07-0219-02
Determinationof the Contents ofBerberine Hydrochloride and Baicalinin Sanhuang Tablet byHPLC
Zhang Linzhu. Zhe Jiang Jiaxing Sheng Kang Medicines Co, Jiaxing Zhejiang,314001,China
【Abstract】To establish a HPLC method for the simultaneously determination of berberine hydrochloride and baicalin in Sanhuang tablet.The determination was performed on a Agilent Eclipse XDB-C18 (4.6 mm ×150 mm, 5 μm) with mobile phase(using gradient) consisted acetonitrile-0.1%H3PO4 at flowing rate 1.0 mL?min–1. The detection wavelength was at333 nm.Themethodhadgoodlinearrelationshipwithintherangeof 0.0061~ 0.0243 mg?mL-1 forberberine hydrochlorideandwithintherangeof 0.038 ~ 0.152 mg?mL-1forbaicalin.The chromatographic method established can be used simply and accurately to simultaneously determine berberine hydrochloride and baicalin in Sanhuang tablet.
【Key words】Sanhuang tablet; Berberine hydrochloride; Baicalin; HPLC
三黄片由大黄、黄芩浸膏和盐酸小檗碱组成，具有清热燥湿、泻火解毒等功效，主治热毒内盛、高热烦躁、湿热黄疸、下痢。《中国药典》2015年版一部规定对三黄片中的盐酸小檗碱和黄芩苷进行定量测定应用的是不同的流动相分别测定[1]。HPLC是测定三黄片中黄芩苷和小檗碱的主要测定方法，本文建立了同时测定三黄片中盐酸小檗碱和黄芩苷含量的高效液相色谱方法，为进一步控制中药制剂的质量提供参考[2-6]。
1.仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪(美国Agilent 公司)；盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号110713-200208，含量大于98%)；黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110715-200815，含量99.99%)；三黄片；乙腈为色谱级；其他试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18 (4.6mm×150mm,5μm)；柱温30℃；流动相为0.1%磷酸(A)-乙腈(B)；流速为1.0mL?min-1；梯度洗脱，0～10min，24%B线性增加至31%B；在10～20min，B相线性改变至65%B；在20～35min，B相线性改变至70%B，检测波长为333nm。
2.2 对照品溶液制备
分别精密称取1.214mg盐酸小檗碱、7.6mg黄芩苷对照品，各自用甲醇溶解，制成每1mL中分别含0.1214mg盐酸小檗碱和0.76mg黄芩苷的对照品储备溶液，即得备用。
2.3 供试品溶液的制备
取三黄片样品，去包衣，研细，精密称取相当于平均片重的样品，置于100mL锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL溶解，称定重量，超声提取30min，放冷，摇匀，滤过，用溶剂定容于100mL容量瓶，作为供试品溶液。
2.4 专属性试验
分别精密吸取盐酸小檗碱、黄芩苷混合对照品溶液、二个厂家的供试品溶液各10μL注入色谱仪，记录色谱图。同时在阴性对照溶液中，未检出盐酸小檗碱和黄芩苷对照品色谱峰，表明处方中其它成分对盐酸小檗碱和黄芩苷的测定无干扰。HPLC详见图1。
A-对照品；B-河南三黄片供试品；C-山西三黄片供试品（1-黄芩苷；2-盐酸小檗碱）
2.5 线性关系考察
分别精密量取上述二种对照品储备液0.5、0.8、1.0、1.5、2.0mL置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得混合对照品系列浓度溶液。照上述色谱条件分别进样10μL，测定峰面积(A)，并以A对进样浓度(C)进行线性回归，得黄芩苷回归方程为A=9742.3C+208.92，（r=0.9997），小檗碱回归方程为A= 10514C+134.54，（r=0.9996），结果表明小檗碱在0.0061～0.0243mg?mL-1范围内，黄芩苷在0.038～0.152mg?mL-1范围内与其峰面积有良好的线性关系。
2.6 重复性实验
精密称取5份同一批号三黄片样品，按上述方法制备供试品溶液，精密吸取各溶液10μL按上述色谱条件注入液相色谱仪，测定盐酸小檗碱和黄芩苷的含量，计算含量的RSD分别为1.03%和0.92%，说明本方法重现性好。
2.7 精密度实验
精密吸取对照品溶液的混合液10μL进样，重复进样5次，记录盐酸小檗碱、黄芩苷的峰面积，其RSD 分别为0.65%，1.23%，表明精密度良好。
2.8 加样回收率实验
在已知含量的三黄片中，分别加入一定量的盐酸小檗碱和黄芩苷对照品适量，按样品测定方法计算回收率，结果见表1。
3.讨论
2015年版药典对盐酸小檗碱和黄芩苷的测定采用不同的系统色谱条件，盐酸小檗碱采用的是乙腈-水-磷酸二氢钾和十二烷基硫酸钠为流动相，相对比较复杂。本实验通过洗脱溶剂筛选后，改进了流动相系统，最后确定为0.1%磷酸-乙腈溶液。同时本实验高效液相色谱法对三黄片中的主要二种成分同时测定，方法简单易行，采用梯度洗脱分析时间相对较短，可有效的对三黄片进行质量控制。
【参考文献】
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论文作者:张玲珠
论文发表刊物:《心理医生》2016年7期
论文发表时间:2016/8/10
标签：黄芩论文; 盐酸论文; 小檗论文; 黄片论文; 色谱论文; 溶液论文; 含量论文; 《心理医生》2016年7期论文;