高中生物实验中常用试剂的配制及作用原理，本文主要内容关键词为：试剂论文,原理论文,作用论文,常用论文,高中生物论文，此文献不代表本站观点，内容供学术参考，文章仅供参考阅读下载。
生物学是一门以实验为基础的科学，实验是生物学教学不可分割的一部分。随着新课程理念进入课堂教学，教师的角色发生了改变，教师从讲台上走了下来，原来的一言堂变成了群言堂，学生的学习方式变了，课堂上思维方式活了起来，问题多了起来，学生在实验时不再满足于过去单纯地按实验指导进行“按方抓药”出现结果即可的方式，好奇心驱使他们更愿对实验原理加以探索，这就要求教师对实验原理及实验中药品的特性要有更多的了解，才能更好地指导生物实验教学。下面就高中生物实验中常用试剂的配制、作用原理及使用注意事项做一简介，供同仁参考。
一、斐林试剂
1.配制
上述两种溶液应分别保存。在检测还原糖时，临时配制，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中，立即使用。
2.原理
甲液与乙液混合后，反应立即生成淡蓝色的
沉淀。
分子结构中含有还原性基团的糖，叫做还原糖，如葡萄糖、麦芽糖、果糖的分子内部均有游离的具有还原性的半缩醛羟基，当与斐林试剂混合加热时，还原性的半缩醛羟基与试剂中的反应生成砖红色的
沉淀，还原糖本身则氧化成有机酸。葡萄糖与斐林试剂的反应式如下：
因此，可利用斐林试剂鉴定可溶性还原糖的存在。溶液的颜色变化过程是：
浅蓝色→棕色→砖红色
3.注意事项
斐林试剂的甲液和乙液一定要在使用时临时配制。
二、双缩脲试剂
1.配制
上述两种溶液应分别保存。在检测蛋白质时，先在被测定的样液中加入2mLA液摇匀，再加3～4滴B液摇匀，如果有蛋白质，即可看到红紫色的颜色。
2.原理
双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物
。将尿素加热到180℃，则两分子尿素缩合成一分子双缩脲，并放出一分子氨。
双缩脲在碱性溶液中能与
反应，产生红紫色络合物，称双缩脲反应。
蛋白质分子中有很多与双缩脲结构相似的肽键(-NH-CO-)，故蛋白质在强碱条件下也可与双缩脲试剂中的
发生反应，生成红紫色络合物。
3.注意事项
①不可将A液和B液混合后再使用。
三、苏丹Ⅲ溶液和苏丹Ⅳ溶液
1.配制
①苏丹Ⅲ溶液配制：
取1g苏丹Ⅲ的干粉，溶解于1000mL95%酒精中，待全部溶解后，即可。
②苏丹Ⅳ溶液配制：
先将1g苏丹Ⅳ干粉溶解于500mL丙酮中，再加入70%酒精500mL，充分混合后，即可。
2.原理
苏丹Ⅲ是弱酸性染料，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%）。苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。
苏丹Ⅲ与脂肪反应呈橘黄色。
苏丹Ⅳ与脂肪反应呈红色，且对脂肪的亲和力较强，染色所需时间较苏丹Ⅲ短，1min即可。
3.注意事项
实验时需用少许50%的酒精洗去装片上的浮色，适当加热可促进反应。
四、碘液（碘化钾—碘配方）
1.配制
取2g碘化钾，溶于5mL蒸馏水中，再加1g碘溶解后加蒸馏水稀释至300mL，置于棕色玻璃瓶中保存。
碘不易溶于水，当加入少量碘化钾溶液可大大增加碘的溶解度，所以碘液配制常用磺化钾—碘配方。
医用碘酒是2%碘和碘化钾的酒精溶液，必要时鉴定淀粉可将医用碘酒稀释5～10倍后使用。
2.原理
淀粉为白色粉末状，由10%～30%直链淀粉和70%～90%的支链淀粉组成。
直链淀粉可溶于热水而不成糊状，支链淀粉不溶于水，与热水作用膨胀而成糊状。直链淀粉由分子内的氢键使链卷曲成螺旋状，加入碘液，碘分子嵌入到螺旋结构的空隙中，碘分子与淀粉之间借助范得华力联系在一起，形成一种络合物，这种络合物能够比较均匀吸收除蓝光以外的其他可见光（波长范围为400～750nm），而使淀粉溶液呈现蓝色。
3.注意事项
在检测淀粉酶对淀粉的分解实验时，由于碘具有氧化性，不能在淀粉液中先加碘液再加淀粉酶，以免影响酶作用的效果。
五、二苯胺试剂
1.配制
A液：取15g二苯胺溶于1000mL冰醋酸中，再加15mL浓硫酸，置于棕色瓶中保存。
B液：配制体积分数为0.2%的乙醛溶液。
上述两种溶液应分别保存。在检测DNA时，将0.1mLB液加入到10mLA液中现配现用。
2.原理
DNA中的嘌呤脱氧核苷酸在酸性条件下加热，嘌呤碱基与脱氧核糖间的糖苷键断裂，释出脱氧核糖，脱氧核糖进一步脱水生成δ—羟基—γ酮基戊醛，δ—羟基—γ酮基戊醛再和二苯胺共热发生缩合反应，生成蓝色物质，而使溶液呈蓝色（冷却后颜色加深）。
3.注意事项
二苯胺检测DNA时，不加热无蓝色反应。实验时可直接在烧杯中加入事先准备好的沸水进行水浴，以减少实验所用时间。
鉴定时溶液蓝色的深浅，与溶液中DNA含量的多少有关，冷却后观察，颜色更明显。
六、龙胆紫染液和醋酸洋红液
1.配制
①配制浓度为
的龙胆紫染液：
取1g龙胆紫溶解在100mL的质量分数为2%的醋酸溶液中，即可配制成的龙胆紫染液，保存在棕色瓶内备用。
医用紫药水是粗制的1%龙胆紫，必要时可将医用紫药水稀释5倍后使用。
②配制浓度为醋酸洋红溶液：
将1g洋红溶解在100mL质量浓度为45%醋酸溶液中，加锈铁钉一枚煮沸5～10min，冷却后过滤使用。略具铁质的醋酸洋红染液颜色更红，能增强染色效果。
2.原理：
①龙胆紫是混合的碱性染料，主要是结晶紫和甲基紫的混合物。
其中结晶紫能溶于水（溶解度9%）和酒精（溶解度8.75%）。
②洋红又叫胭脂红或卡红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。醋酸洋红液染色的标本不易褪色。醋酸洋红溶液出现浑浊时需过滤后再用。
龙胆紫（或洋红）是与染色体结合的碱性染料。碱性染料是指有色离子是阳离子的染料，而不是染液的pH呈碱性。配制时所用醋酸是染料的溶剂，在染色时还可增加细胞的通透性，而不引起细胞膨胀，利于染液的离子进入细胞而使细胞核内的染色体着色。
龙胆紫染液和醋酸洋红液可用于染细胞核和染色体，从而增大细胞核与周围部分的反差，便于观察。
3.注意事项
实验时，染液的浓度和染色时间要掌握好，不宜染色过深，以免无法进行观察。