（仁寿县妇幼保健院儿保科 四川 眉山 620020）
【摘要】目的：研究仁寿县新生儿人群常见耳聋基因突变位点的分布情况。方法：纳入958例2016年1月至2016年12月期间在我院行常规耳聋基因检测的新生儿作为研究对象。采集研究对象足跟血进行DNA提取，采用遗传性耳聋基因芯片对研究对象进行检测，观察耳聋基因突变位点的分布情况。结果：SLC26 A4基因以IVS 7-2 A＞G位点突变最为常见，均高于其他基因位点的突变率，P＜0.05。结论：仁寿县新生儿人群中GJB2、SLC26 A4基因突变率较高，GJB2基因以235 del C位点突变率最高，SLC26 A4基因以IVS 7-2 A＞G位点突变率最高。
【关键词】新生儿；耳聋；基因位点；分布
【中图分类号】R722 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）02-0371-02
先天性耳聋是目前我国新生儿最常见的先天性缺陷之一，发病率约为0.1～0.3%，且部分地区呈明显上升趋势，引起人们的关注和重视[1]。目前研究认为[2]，先天性耳聋可由环境因素、基因突变等原因导致，其中50%的儿童期耳聋认为和遗传等因素有关。因此对新生儿进行耳聋筛查尤为重要。本文对我院新生儿采用耳聋基因芯片法进行筛查，分析仁寿县新生儿常见耳聋基因突变的位点分布情况，现报道如下。
1.资料与方法
1.1 一般资料
本次选取958例2016年1月至2012年12月期间在我院行常规耳聋基因检测的新生儿作为研究对象，采取新生儿足跟血提取DNA。所有研究对象均经家属同意并签字入组研究。被检测DNA组符合100～200ng/ul，纯度D（260）/D（280）=1.7～2.0。
1.2 方法
1.2.1主要试剂 由深圳华大基因有限公司提供的遗传性耳聋基因检测试剂盒。洗液配置：洗涤液I（0.3×SSC，0.1%SSD）；洗涤液II（0.06×SSC）。杂交缓冲液，杂交芯片。
1.2.2 PCR扩增 PCR反应体系为20ul，每个DNA分别配置A、B反应体系。A：12.5ul引物混合物A1，4.5ul引物混合物A2，3.0ul模板DNA。B：12.5ul引物混合物B1，4.5ul引物混合物B2，3.0ul模板DNA。
1.2.3 PCR扩增步骤 在37℃下预变10min，95℃下预变15min，96℃下预变1min。之后94℃下30s，55℃下30s，72℃下45s为一个循环，共进行32个循环。72℃下45s，60℃下10min。94℃到55℃速率为0.4℃/s，55℃至70℃速率为0.2℃/s。
1.2.4杂交 PCR产物95℃下变性5min，放入冰水混合物冰浴3min。将杂交缓冲液加入融化（50℃），分为10ul每份，相同样品模板A、B体系各取2.5ul产物，加入各个杂交缓冲液中，混匀后加入芯片微阵列区域，封闭后放置于50℃水浴中1h。
1.2.5洗片 分别将洗涤剂I和II在42℃下进行混匀，80r/min。取出芯片后分别加入洗涤剂I和II，每加入一种均在80r/min下震荡摇匀，洗涤2次。甩干后采用微阵列芯片法进行检测，以晶芯LuxScanTM 10K-B微阵列芯片进行扫描。
1.3 统计学处理
采用SPSS 18.0统计软件，计量资料用（x-±s）表示，采用t检验，计数资料用百分比表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 检出率
所有研究对象中检测GJB2基因突变频率为2.8%，SLC26 A4基因突变频率为2.1%。12S rRNA基因突变频率为0.1%。
2.2 耳聋基因突变在新生儿人群中的分布情况
其中GJB2基因以235 del C位点最为常见，SLC26 A4基因以IVS 7-2 A＞G位点突变最为常见，均高于其他基因位点的突变率，P＜0.05。见表1。
3.讨论
听力是人体五大感官之一，与语言能力息息相关。据研究显示[3]，通过早期诊断和干预听力障碍儿童可有效提高患儿的语言水平。流行病学显示不同地区的耳聋突变基因不同，多数是有GJB2基因突变导致，占耳聋基因突变患儿的20%以上，另一部分是由线粒体DNA 12S rRNA 1555 A＞G突变引起，占耳聋患儿的10%左右。还有部分地区主要由SLC26 A4基因突变引起，占到耳聋患儿的9%左右。因此针对部分地区耳聋患儿基因突变的研究，可有效制定筛查方式，从而提高耳聋的早期诊断率。
GJB2是常见的耳聋突变基因之一，在本文研究中显示，仁寿县儿童通过筛查，其中GJB2基因突变频率高达2.8%，其中以235 del C位点突变为主，占2.0%，可见GJB2基因突变是仁寿县患儿最常见的基因突变之一，其中以235 del C位点突变为主。SLC26 A4属于离子转运体家族，认为在耳聋中是仅次于GJB2突变的基因。
综上所述，仁寿县新生儿人群中GJB2、SLC26 A4基因突变率较高，GJB2基因以235 del C位点突变率最高，SLC26 A4基因以IVS 7-2 A＞G位点突变率最高。
【参考文献】
[1]吕康模,熊业华,俞皓等.17000名新生儿遗传性耳聋基因突变筛查[J].中华医学遗传学杂志,2014,31(5):547-552.
[2]唐军,胡敏,苏艳等.518例新生儿听力及耳聋基因联合筛查结果分析[J].听力学及言语疾病杂志,2017,25(2):197-200.
[3]相丽丽,林倩,聂文英等.济南市部分新生儿听力和耳聋基因联合筛查结果分析[J].中华耳鼻咽喉头颈外科杂志,2015,50(5):401-405.
论文作者:杨旭,韩峰,向英,王菊容,陈雪梅,白玉芹（通讯作者
论文发表刊物:《医药前沿》2018年1月第2期
论文发表时间:2018/3/1
标签：仁寿县论文; 基因论文; 新生儿论文; 突变论文; 基因突变论文; 位点论文; 引物论文; 《医药前沿》2018年1月第2期论文;