甄广怀 李磊邦 甄美婵 梅秀云 周玉萍
（广东省台山市人民医院 广东 台山 529200）
【摘要】目的：探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因677C/T多态性及血清同型半胱氨酸(HCY)浓度水平与妊娠高血压综合征(妊高征)的关系。方法：采用免疫荧光技术对37例妊高征患者(妊高征组)及40例正常孕妇(对照组)进行MTHFR 基因677C/T等位基因检测,并同时用生化酶法测量两组孕妇血清中的同型半胱氨酸（HCY)浓度。结果：妊高征组677TT突变型频率24％明显高于正常组10％（P＜0.05），妊高征组677T等位基因频率47％也明显高于正常组的28％（P＜0.05）；同时，妊高征组同型半胱氨酸（HCY)水平为14.1±2.3μmol/L, 明显高于对照组的8.3±1.6μmol/L(P<0.01)。结论：MTHFR基因677C/T多态是妊高征发病的遗传危险因素之一,它可以导致孕妇血液中同型半胱氨(HCY)水平升高而引发妊高征。应普及推广MTHFR基因677C/T多态性及HCY在孕前、孕期的检测，确保孕妇和胎儿的安全。
【关键词】亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因；多态性；同型半胱氨酸(HCY)；妊娠高血压综合征(妊高征)
【中图分类号】R714.246 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）20-0125-02
妊娠高血压综合征（简称妊高征），是孕妇妊娠期常见的高发病，主要出现在妊娠20周到产后两周，发病率大约占孕妇总数的5%，该病严重威胁母婴健康，是导致孕产妇和围生儿病率和死亡的常见疾病之一。妊娠高血压发生的原因很多，具体还不是太明确。但最近研究发现，亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因677C/T多态性与妊高征发病关系密切[1]，而高同型半胱氨酸（HCY）血症可导致血管内皮细胞损伤并可能是妊高征的发病原因之一[2-3]。为此，本研究旨在探讨亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性、同型半胱氨酸与妊娠高血压综合征的相关性，为进一步寻找妊高征的病因及防治提供依据，从而利于优生优育。
1.资料与方法
1.1 研究对象
选择2016年6月至2017年12月期间在本院登记进行产前检查的妊娠高血压综合症孕妇37例作为妊高征组，年龄24～44岁，平均19.0±4岁，孕周21～39周，平均16±2周，诊断标准参见乐杰主编的《妇产科学》第7版。另对照组40例，均为随机选取的与妊高征组同期的正常健康孕妇，平均年龄26±3岁，孕周24±2周。
1.2 方法
1.2.1亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因677C/T检测：（1）DNA提取：抽取孕妇外周静脉血2～3ml EDTA-K2抗凝全血，按DNA提取试剂盒（TIANGEN公司）说明书要求操作。采用可以特异性结合DNA离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取血液中的基因组DNA。（2）MTHFR基因PCR扩增，使用达安基因公司DA7600Ⅱ型荧光分析仪，试剂盒由江西诺德医疗器械有限公司提供。按操作程序进行，将配置好的反应管放入仪器通道内，仪器运行加热程序如下：步骤一，95℃10分钟，激活荧光基团；步骤二，95℃15秒，使样本变性；步骤三，60℃40秒，使荧光基团与样本充分结合；重复二、三步骤四十次；步骤四，室温冷却1分钟，完成反应。信号收集：60℃收集FAM和VIC信号。不同的荧光基因与相对应位置的氨基酸特异结合后，会发出不同颜色的荧光信号，通过检测反应最终的荧光信号曲线，确定检测样本中亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因对应位置的氨基酸情况，反映MTHFR基因的活性。
1.2.2血清同型半胱氨酸（HCY）测定：抽取研究对象空腹静脉全血3ml，放入干燥试管内送检。标本于室温下离心10分钟，分离血清后上机测定HCY浓度。检测试剂盒为北京九强公司的双液体试剂，利用酶法进行测定，配套校准品和质控品；检测仪器为西门子ADVIA 2400全自动生化分析仪。按相应说明书设置参数和操作，质控在控之下测定标本。
1.3 统计学处理
用SPSS13.0统计软件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 MTHFR基因677C/T分布情况：
妊高征组中，MTHFR基因677位点三种基因型分布如下：CC野生型11例，占比30%，CT杂合型17例，占比46%，TT突变型9例，占比24%。而在对照组中，上述三种基因型分别为22例、14例、4例，占比分别为55%、35%和10%。妊高征组的TT突变基因型频率24%明显高于正常组的10%（P＜0.05）；同时，妊高征组T等位基因频率47%也明显高于正常组的28%（P＜0.05），结果见表1。
3.讨论
3.1 MTHFR基因与妊高征
亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是叶酸及同型半胱氨酸代谢过程中的关键酶。其主要作用是催化5，10，-亚甲基四氢叶酸形成5-甲基四氢叶酸，5-甲基四氢叶酸为HCY转化为蛋氨酸提供受体。蛋氨酸是体内各种代谢中甲基反应的直接供体-S-腺苷蛋氨酸（SAM）的前体，SAM经脱腺苷生成HCY，HCY可通过N-5-甲基四氢叶酸转甲基酶及其辅酶维生素B12的催化作用，重新生成蛋氨酸，此过程又是已知体内能利用N-5-甲基四氢叶酸的唯一反应。MTHFR基因位于染色体的1P36.3[4]，具有多态性，特别是当677位C→T突变后，此位点的氨基酸由丙氨酸转化为缬氨酸，导致MTHFR酶活性下降，5-甲基四氢叶酸生成不足，血浆HCY浓度增高，是妊娠高血压综合征、习惯性流产、胎盘血管疾病等妊娠相关疾病的高危因素[5]。
本研究表明，妊高征组TT突变基因型频率及等位基因T的频率均明显高于对照组，提示MTHFR基因677C/T多态性可能是妊高征发病的一个独立危险遗传因素，并作为遗传因素通过影响HCY的代谢从而引起妊高征。
3.2 高HCY与妊高征
HCY是一种含硫的氨基酸，由蛋氨酸通过蛋氨酸循环脱甲基作用产生。HCY浓度水平升高与遗传和营养因素有关，遗传因素包括胱硫醚β合成酶缺乏和MTHFR酶活性降低。研究表明[6]，MTHFR基因677C/T多态性可致MTHFR酶活性降低，从而影响HCY代谢，导致血中HCY浓度升高。饮食原因主要是叶酸和维生素B12缺乏，两者是HCY代谢的主要辅助因子。所以HCY代谢过程中任何关键酶或辅助因子的缺乏，均可导致HCY的代谢障碍，从而引起高HCY血症。
本研究结果表明，妊高征组血清HCY浓度平均值显著高于对照组。目前认为[7]，内皮细胞损伤是妊高征发生病理变化的基础，而高HCY可导致血管内皮损伤，是多因素综合作用的结果，其主要机理包括HCY可在金属离子介导下自身氧化生成过氧化物及氧自由基，损伤内皮细胞的结构和功能[8]，血管内皮细胞损伤后，可使内皮素Ⅰ分泌增加，血管内皮衍生松驰因子及前列环素分泌减少，导致患者血管舒缩因子平衡紊乱，从而引发妊高征。
3.3 MTHFR基因多态性、高HCY与妊高征相关性分析
综上所述，在MTHFR基因多态性、高HCY及妊高征三者中，MTHFR基因677C/T多态性导致MTHFR酶活性下降，影响了HCY的正常代谢，HCY代谢障碍导致高HCY血症，而高HCY血症是引起血管内皮细胞损伤的重要原因，从而容易诱发妊高征。可见，高HCY是三者中的中心和关键环节，当血液中HCY浓度升高，可以造成人体血管堵塞，甚至血压增高[9]。本研究显示，携带MTHFR基因TT突变基因型的孕妇容易导致高HCY血症发生，进而易引起妊高征，而妊高征组的HCY平均水平也明显高于对照组，所有研究对象中，TT突变基因型均明显高于对照组。具体到每个基因组，虽然妊高征组均高于对照组，但差别无显著性（P＞0.05），可能和观察例数偏少及分布有关，同时也说明，MTHFR基因多态性对高HCY水平的影响较大和直接，而高HCY水平只是引起妊高征的其中一个原因。另外，HCY代谢过程中存在着基因与营养因素的相互作用，孕妇在妊娠前后大都已服用叶酸，增加叶酸补充在一定程序上弥补MTHFR基因多态性所引起的影响[10]，有利于降低HCY浓度，从而对本研究的结论造成一定的影响。
总之，本研究表明，MTHFR基因677C/T多态性及高HCY与妊高征存在着相互关系。从优生优育的角度出发，应普及推广MTHFR基因677C/T多态性及HCY在孕前、孕期的检测，根据检测结果个体化叶酸的补充，确保孕妇和胎儿的安全。
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江门市科技计划项目：项目编号：江科[2016]105号-7.
论文作者:甄广怀,李磊邦,甄美婵,梅秀云,周玉萍
论文发表刊物:《医药前沿》2018年7月第20期
论文发表时间:2018/7/27
标签：叶酸论文; 基因论文; 半胱氨酸论文; 甲基论文; 多态性论文; 高血压论文; 孕妇论文; 《医药前沿》2018年7月第20期论文;