（甘肃省妇幼保健院 病理科 730050 ）
摘要: 目的 研究不同程度宫颈病变者感染人乳头瘤病毒（HPV）的基因亚型，以探讨不同基因型HPV感染在宫颈鳞状上皮内病变的表达。方法 采用医用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术（Hybrimax），对372例甘肃省境内妇女进行宫颈21种HPV亚型感染筛查，同期进行宫颈活检病理检查。按病理学诊断结果分成2组：高度鳞状上皮内病变（HSIL）组135例：包括CINⅡ81例、CINⅢ54例，低度鳞状上皮内病变（LSIL）组237例：包括CINⅠ208例、宫颈湿疣29例。HSIL组HPV感染阳性率90.9%，检测出18种基因型，主要感染基因型依次为16、18、31、58、52；LSIL组HPV感染阳性率67.6%，检测出18种基因型，主要感染基因型依次为16、52、58、18、31；此外，LSIL组中宫颈湿疣24例，HPV感染率为100%，主要感染基因型依次为16、6、11、52、68，以HPV低危亚型为主。对HPV基因亚型分布及HPV感染型别数在各组疾病中的分布数据采用SPSS11.5统计学分析，研究人乳头瘤病毒感染亚型与宫颈病变的相关性。结果 所有病例标本中共检测到18种HPV亚型，未检测到35、43、44型。LSIL组及HSIL组前五位HPV基因亚型相同，单一感染在所有病例组中均占明显优势，单一感染率随宫颈上皮内病变的严重程度增加而递增。结论 宫颈病变中主要感染的HPV基因亚型符合东亚及中国人群研究结果,同时也存在地理差异。HPV16、18、31、58、52致宫颈病变较强，HPV基因亚型检测对患者转诊阴道镜活检，及时分流、诊治有重要临床意义。
关键词:宫颈病变；人乳头瘤病毒；基因亚型
子宫颈癌是严重威胁女性生命和健康的恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌，在全球妇女癌症死亡率中居第二，在一些发展中国家甚至居首位。目前已经明确高危型人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染是宫颈癌的病因[1]。大量研究表明：对于两次以上检测HPV阳性，只有检测出属于同一基因型才能确认是HPV持续感染。因此HPV分型检测已成为宫颈癌筛查中必不可少的内容。HPV是一种小分子双链DNA病毒，按其基因序列的多态性可分为100多型，根据不同基因型与癌发生的危险性高低又可分为：低危型HPV,如6、11、42、43、44等，常引起外生殖器湿疣、宫颈上皮内低度病变（CIN1）等良性病变；高危型HPV，如16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、及CP8304等，与宫颈癌及宫颈上皮内高度病变（HSIL）的发生相关[2]。本研究通过检测372例不同程度宫颈病变者感染人乳头瘤病毒（HPV）的基因亚型，以探讨不同基因型HPV感染的致病性，为本地区妇女宫颈病变的筛查、诊治及HPV疫苗的研发提供依据。
1.对象与方法
1.1研究对象
2015年1月-2016年5月在甘肃省妇幼保健院门诊及住院就诊妇女行宫颈液基细胞学检查及HPV-DNA分型检测，具有同期宫颈病理切片结果共计372例。年龄19-80岁，平均年龄（42.76±8.93）岁。根据组织病理学诊断，按病变程度分为2组：高度鳞状上皮内病变（HSIL）组135例：包括CINⅡ81例、CINⅢ54例，低度鳞状上皮内病变（LSIL）组237例：包括CINⅠ208例、宫颈湿疣29例；。
1.2仪器与试剂
HPV-DNA提取试剂盒，PCR扩增仪，Hybrimax医用核酸分子快速杂交仪，人乳头瘤病毒基因微阵列分型检测试剂盒（均由香港凯普公司提供）。
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1.3标本采集和处理
用凯普公司配套专用宫颈刷置于宫颈口沿顺时针旋转5周获得足够的移行区上皮细胞样本取出，放入3ml专用细胞保存液中，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，旋紧管盖，做好样本标记，立即送检或放置4℃冰箱中，三天内检验。
1.4检测方法
HPV分型基因检测步骤：样本DNA提取，PCR扩增，核酸分子快速导流杂交，结果判断，根据膜条HPV分型分布图相应着色位点判断为何种HPV病毒亚型。本检测将HPV分为21种亚型，其中16种高危亚型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304，5种低危亚型：6、11、42、43、44。
1.5统计学方法
采用SPSS11.5统计软件进行统计学分析，以百分率作HPV感染的评价指标，HPV检出率差异用X2检验，P检验为双向，P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1不同病变程度患者HPV感染率及感染基因亚型分布
HSIL组共135例，HPV感染者123例，阳性率90.9%，检测出16种基因型，主要感染基因型依次为16（56/123，45.9%）、18（24/123，19.3%）、31（17/123，13.8%）、58（16/123，12.8%）、52（15/123，11.9%）；LSIL组共237例，HPV感染者160例，阳性率67.6%，检测出18种基因型，主要感染基因型依次为16（51/160，32.0%）、52（28/160，17.3%）、58（26/160，16%）、18（14/160，8.7%）、31（13/160，8.0%）；此外，LSIL组中宫颈湿疣29例，HPV感染率为100%，主要感染基因型依次为16（7/29，25.0%）、6（7/29，25.0%）、11（5/29，16.7%）、52（4/29，12.5%）、68（4/29，12.5%），以HPV低危亚型为主。
2.2HPV感染率随宫颈病变严重程度增加而明显递增
HPV16感染在所有病例组中均居首位，HSIL组的感染率显著高于LSIL组（X2=234.340,P=0.000）。
2.3HPV单一感染和多重感染与宫颈病变程度的关系
本研究HPV阳性患者共283例，单一感染220例，占总数的77.7%，在多重感染的63例（22.3%）中，二重感染47例，占多重感染的74.7%，随感染型别数增加，比例逐渐下降，感染型别数最多的为四重感染，共4例。单一感染率随病变级别增加逐渐上升，在LSIL组、HSIL组的感染率分别为71.3%、78.0%，宫颈不同程度病变组相比差异有统计学意义（X2=9.57,P=0.008）。
3．讨论
大量流行病学和分子生物学研究资料表明，HPV与子宫颈癌及癌前病变密切相关[3]。 HPV可分为高危型和低危型两种，长期持续感染高危型可以致癌，危害生命。在本研究中LSIL组、HSIL组，随病变严重程度加重HPV感染率明显递增（P<0.05）。并且低危型HPV6、HPV11在宫颈湿疣中为主要感染亚型，与文献报道[2]的湿疣与低危型HPV感染相关结果相一致。
HPV的多重感染是否会促进宫颈癌的发生目前研究观点不一致。有学者认为多重感染并不增加宫颈癌的发生率[4]；但也有学者认为多重感染促进宫颈癌的发生，并使治疗棘手。本研究中单一感染率随病变级别增加逐渐上升，由LSIL组的71.3%升高到HSIL组的78.0 %，宫颈不同程度病变组相比差异有统计学意义结果（P<0.05），与第一种观点一致。在一定程度上说明单一感染对宫颈病变的发展起促进作用，但其具体的作用机制，乃需要进一步研究。
本研究表明，宫颈病变的严重程度与感染HPV的具体亚型相关，而与感染的型别数无关，在单一感染型别中HPV16占居首位并随病变级别增加而阳性率逐步增高。 研究资料表明HPV16的感染由于清除率降低可能更易导致持续性感染，发生CIN2、3，甚至SCC。因此对于HPV感染患者不仅要重视其是否已经导致宫颈病变，积极进行临床治疗，还要重视其所感染的具体亚型，HPV16、18、31、58、52致宫颈病变较强，特别是对HPV16感染患者应积极转诊阴道镜活检，及时诊治，以便及早发现异常及早干预，有效降低宫颈癌的发生。
参考文献
[1]McLachlin CM．Hunlall Papillomavirus in cervical nemplasia. Role. risk factors and implications. Clin Lab Med. 2000. 20:257-270
[2]Munoz N,Bosch FX,de-Sanjose S,et al.Epidemiologic calssification of human papillomavirus types associated with cervical cancer[J]. N EnglJ Med,2003, 348(6):518-527.
[3]Bosch FX, Lorincz A, et al.The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer[J].J Clin Pathol,2002,55(4):244-265.
[4]Mu noz N ,Bosch FX , Castellsague X ,et al .Against which human papillomavirus types shall we vaccinate and screen ? the international perspectve . Int J Cancer ,2004 ,111 :278-285 .
论文作者:周庆云 王梓欣 景军宁
论文发表刊物:《医师在线》2017年1月第1期
论文发表时间:2017/3/20
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