王哲[1]2000年在《用cDNA消减杂交法克隆白血病细胞K562分化相关基因》文中研究表明细胞分化是人类和多细胞生物生长发育中的一种重要方式，它通常并不是异常的和有害的。细胞分化调节的异常与许多疾病有密切的关系，如白血病通常由于造血干细胞定向分化的过程中出现异常而发生，导致细胞不能终末分化并无限增殖。研究细胞分化的机制可以阐明生命的本质规律和肿瘤发生的机制，为实现生物学过程的人为控制创造条件。克隆细胞分化相关基因可以进一步深化我们对这一生命现象的认识，并可指导肿瘤的治疗。因而克隆细胞分化相关基因具有深远的意义。 本研究利用cDNA消减杂交的方法，以Hexamethylene Bisacetamide(HMBA)诱导慢性髓系白血病细胞系K562细胞向巨噬细胞样分化这一以往研究得较少的模型，来研究细胞分化相关基因。通过cDNA消减杂交的方法，对K562细胞分化前后差异表达的基因进行了克隆，共得到64个克隆，其中53个有插入片段。利用Reverse Northern杂交的方法，证实其中39个克隆中有13个在分化前后表达有差异。对部分克隆测序和同源性比较后，发现8个为已知基因，6个为新基因。在已知基因中，有4个已有报道证实在白血病细胞分化前后有差异表达。其余4个已知基因中有3个功能本身并不确定，另一个EWS基因与细胞分化的关系未见报道。6个新基因克隆中有2个完成全长cDNA的测序，其中13号包含一个完整
王哲, 黄高昇[2]2001年在《用cDNA消减杂交法克隆白血病K562细胞分化相关基因》文中研究指明细胞分化是人类和多细胞生物生长发育中的一种重要方式。细胞分化调节的异常与许多疾病有密切的关系,如白血病通常由于造血干细胞定向分化的过程中出现异常而发生,导致细胞不能终末分化并无限增殖。研究细胞分化的机制可以阐明生命的本质规律和肿瘤发生的机制,为实
王璐[3]2007年在《分化相关基因dif14在白血病细胞K562分化中的表达及其不同异位剪接mRNA的克隆》文中进行了进一步梳理白血病是人类常见的血液系统恶性肿瘤,它一般发生于造血细胞分化的某个阶段,表现为细胞分化障碍。使用诱导剂诱导白血病细胞分化已作为一种有效的治疗手段应用于临床,这也成为研究白血病细胞分化机制的主要方法。但是,不同类型的白血病需要不同的诱导剂诱导其细胞分化,其机制也各不相同。到目前为止,诱导剂诱导白血病细胞分化的机制还不十分清楚,对于细胞分化机制的研究仍有待于进一步深入。dif14基因是本实验室于2000年克隆并命名的新基因。我们利用化合物HMBA(hexamethylene bisacetamide)诱导白血病细胞K562向巨噬细胞样分化的模型,克隆了dif14基因,该基因GenBank accession number为AF402318,这一研究提示dif14基因与细胞分化相关。目前,国内外尚未见dif14基因在白血病细胞分化过程中作用以及其功能的研究报道。在前期实验中,我们已克隆了长片断形式dif14基因的开放读框序列,并克隆于pGEM-7zf(+)载体中。研究目的检测dif14基因在髓系白血病细胞分化和人体多种正常组织中的表达情况,并寻找和克隆其异位剪接mRNA,为深入认识该基因功能打下基础,并期望为进一步认识髓系白血病细胞分化机制提供理论依据。实验方法1.应用生物信息学技术分析dif14基因的同源基因和同源蛋白,并进行进化分析。2.通过Northern blot检测HMBA诱导前后K562细胞中dif14 mRNA的表达变化,并分析该基因在多种组织中的表达情况。3.建立原核表达体系,表达并纯化dif14基因N端蛋白,制备多克隆抗体;运用Western blot检测诱导前后K562细胞中dif14蛋白的表达变化。4.运用RT-PCR方法寻找并克隆异位剪接mRNA,为进一步认识dif14基因的功能打下基础。实验结果1.dif14 cDNA编码490a.a.的蛋白,生物信息学分析提示该蛋白为九次跨膜蛋白。在多种低等生物中存在其同源基因,为进化中相对保守的一个蛋白家族成员之一。2.dif14 mRNA在HMBA诱导后的K562细胞中表达上调,人体正常骨骼肌、肾和肝组织表达较高。并存在4.6 Kb和2.5 Kb两种不同大小的表达产物。HMBA诱导后K562细胞向巨噬细胞样分化后其蛋白水平表达上调。3.克隆了dif14基因异位剪接片断。结论1. dif14基因编码蛋白为低等生物和高等生物中一个序列保守的细胞膜蛋白家族成员,可能具有细胞内吞膜蛋白的功能。2. dif14 mRNA和蛋白水平在诱导白血病细胞K562向巨噬细胞样分化后表达均有上调,提示dif14的表达可能与单核分化相关。3. dif14基因的转录产物具有两种不同异位剪接形式,我们已经找到并克隆了另一种剪接形式的mRNA,其功能还需要进一步研究。
参考文献：
[1]. 用cDNA消减杂交法克隆白血病细胞K562分化相关基因[D]. 王哲. 第四军医大学. 2000
[2]. 用cDNA消减杂交法克隆白血病K562细胞分化相关基因[C]. 王哲, 黄高昇. 新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展（上册）. 2001
[3]. 分化相关基因dif14在白血病细胞K562分化中的表达及其不同异位剪接mRNA的克隆[D]. 王璐. 第四军医大学. 2007