川北医学院附属医院：1.风湿免疫研究所，2.医学研究中心，3.检验科；四川南充 637000
摘要：目的：探讨分析自身免疫调节因子对于THP-1细胞发生自噬性凋亡产生的影响以及相关价值。方法：采用流式细胞仪、PI染色法以及AnnexinⅤ-FITC染色法对细胞凋亡率进行检测。结果：经过染色处理以后，其流式细胞仪检测结果表明，空载体转染细胞与阴性对照组的细胞凋亡率分别是（5.02±0.42）%与（3.86±0.46）%；质粒转染的细胞凋亡率是（10.01±0.69）%，同空载体转染在组与阴性对照组进行对比，差异具备统计学意义（P＜0.05）。而空载体转染在组与阴性对照组进行对比，差异不具备统计学意义（P＞0.05）。结论：自身免疫调节因子可以通过上调THP-1细胞的自噬而使其更迅速的凋亡。
关键词：自身免疫调节因子；THP-1细胞；自噬性；细胞凋亡
[Abstract]Objective：To investigate and analyze effects of autoimmune regulators
on autophagic apoptosis of THP-1 cells and the value relating to it.Methods：the cell apoptosis rate was detected by flow cytometry，PI staining and Annexin staining of -FITC v.Results：after staining，the flow cytometry test showed that the apoptosis rates of empty vector transfected cells and negative control group are respectively（5.02 + 0.42）% and（3.86 + 0.46）%；the apoptosis rate of plasmid transfected cells is（10.01 + 0.69）%，the difference is statistically significant compared with the negative control group and empty vector transfected group，（P < 0.05）.There is no statistical significance between the empty vector transfected group and the negative control group（P > 0.05）.Conclusion：autoimmune regulators can upregulate autophagy of THP-1 cells，and therefore make the apoptosis of THP-1 cells progress more rapidly.
[keyword]autoimmune regulator；THP-1 cells；autophagy；apoptosis
自身免疫调节因子（autoimmune regulator，AIRE）作为转录调节因子，若基因突变则可以引发自身免疫性疾病，例如外胚层发育不良综合征与自身免疫性多腺体念珠菌病等[1]。因为自身免疫调节因子能够对外周组织抗原对于胸腔的异位表达进行调节，并对胸腺细胞的相关阴性选择进行调节[2]。所以，很多研究都把重点放在了自身免疫调节因子对于中枢免疫耐受的相关诱导的研究中[3]。相关研究显示，自身免疫调节因子作为前凋亡因子，其对于构建胸腺内自我耐受以及胸腺髓质上皮细胞的成长的微环境具备着至关重要的意义[4]。本研究中主要探讨分析了自身免疫调节因子对于THP-1细胞发生自噬性凋亡产生的影响以及相关价值，现总结如下：
1.资料与方法
1.1 一般资料
本研究中主要涉及的研究材料主要有：含人全长的自身免疫调节因子的真核表达载体质粒pEGFP-AIRE；空表达载体pEGFP-C3购自BD公司；蛋白定量试剂盒和化学发光检测试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司；细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司；兔抗人多克隆抗体以及蛋白提取试剂和羊抗兔均购自武汉博士德生物工程有限公司；蛋白酶抑制混合剂购自上海杰美基因医药科技有限公司；转染试剂以及低血清培养液购自HyClone 公司。主要仪器设备：超净工作台[HFSafe 1200，CO.，Ltd.（Hong kong）]、CO2培养箱（Heal ForceHF90）低温离心机（UNIVERSAC16R，USA）、倒置显微镜（OLYMPUS IX71）、流式细胞仪（FACScalibur，BD）等。
1.3 方法
把已经转染的THP-1细胞经2000rpm的速率离心5分钟，采用PBS对细胞进行洗涤两次以后，将细胞密度调整为1×105/mL，并对细胞沉淀进行收集。根据细胞凋亡检测试剂盒上面的说明，将500μL结合缓冲液加入到沉淀内对细胞进行重悬处理。再依次将5μL碘化丙啶与5μL AnnexinⅤ加入到细胞悬液中，确保其均匀混合；在室温避光下反应15分钟。等到反应结束以后，采用上流式细胞仪对细胞凋亡情况进行检测。选择没有进行转染的细胞当作阴性对照。
1.4 统计学方法
本研究采用统计学SPSS17.0对实施处理与统计，采取卡方对计数资料进行检验，采用t对计量资料进行检验，若P＜0.05则代表差异具有统计学意义。
2.结果
经过染色处理以后，对过表达自身免疫调节因子对于THP-1细胞自噬凋亡产生的影响进行分析研究，其中流式细胞仪检测结果表明，空载体转染细胞与阴性对照组的细胞凋亡率分别是（5.02±0.42）%与（3.86±0.46）%；质粒转染的细胞凋亡率是（10.01±0.69）%，同空载体转染在组与阴性对照组进行对比，差异具备统计学意义（P＜0.05）。而空载体转染在组与阴性对照组进行对比，差异不具备统计学意义（P＞0.05）。
3.讨论
在临床中，单核细胞是一种树突状细胞与巨噬细胞的前体来源细胞，其对于免疫调节与天然免疫具备着至关重要的意义[5]。单核细胞作为抗原提呈细胞与职业吞噬细胞，其适时适量的凋亡对于炎症反应的控制等具备着非常积极的效应，能够防止发生持续性的炎症反应，避免发生自身免疫性疾病[6]。因为自身免疫调节因子能够对外周组织抗原对于胸腔的异位表达进行调节，并对胸腺细胞的相关阴性选择进行调节[7]。其中，源自于自身免疫性疾病的自身免疫调节因子对于中枢免疫耐受的角色已经逐步的得到论证，但是自身免疫调节因子对于外周免疫耐受具备的作用还不是很明确，而利用调节单核细胞的自噬凋亡防止发生自身免疫性疾病也是一项非常关键的作用[8]。相关研究显示，自身免疫调节因子作为前凋亡因子，其对于构建胸腺内自我耐受以及胸腺髓质上皮细胞的成长的微环境具备着至关重要的意义。
本组研究结果显示：经过染色处理以后，其流式细胞仪检测结果表明，空载体转染细胞与阴性对照组的细胞凋亡率分别是（5.02±0.42）%与（3.86±0.46）%；质粒转染的细胞凋亡率是（10.01±0.69）%，同空载体转染在组与阴性对照组进行对比，差异具备统计学意义（P＜0.05）。而空载体转染在组与阴性对照组进行对比，差异不具备统计学意义（P＞0.05）。由此可知，自身免疫调节因子可以通过上调THP-1细胞的自噬而使其更迅速的凋亡。
结论：
综上所述，本研究中利用在THP-1细胞中过表达自身免疫调节因子证实了自身免疫调节因子可以通过上调THP-1细胞的自噬而使其更迅速的凋亡，由此进一步的对自身免疫调节因子对于外周免疫系统的作用进行了探讨，并为自身免疫性疾病提供了更多实验基础，但是如何介导细胞凋亡与调节细胞自噬凋亡还需要进一步研究分析。
参考文献：
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论文作者:蒋红1，2,杨明辉1，2，3,张梦云2,赵明才1，2，
论文发表刊物:《健康世界》2015年11期供稿
论文发表时间:2016/1/21
标签：细胞论文; 免疫调节论文; 转染论文; 因子论文; 凋亡论文; 阴性论文; 统计学论文; 《健康世界》2015年11期供稿论文;