（2泰州第二人民医院检验科 江苏 泰州 225500）
【摘要】 目的：因科室Sysmex CA7000全自动凝血仪发生故障，进行了维修和主要部件的更换，现对其进行性能验证。方法：对CA7000进行性能评价，包括精密度、准确度、最小检测限、可报告范围、携带污染率、生物区间等指标。结果：批内最大CV值1%；批间最大CV4.71%；准确度最大偏倚为7.3%；FIB最小检测限为0.8g/L,；FIB临床可报告范围为0.8～45.5 g/；携带污染率结果均低于判定标注10.0%；参考区间的验证试验，计算R值为97.5%，验证均通过。结论：维修后的CA7000全自动凝血仪是一部具有良好精密度、准确度、检测范围宽及携带污染率低的检测系统。
【关键词】 Sysmex CA7000；性能验证；验证结果
【中图分类号】R197.38 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）34-0353-03
SysmexCA7000凝血分析仪是一部集凝固法、发色底物法和免疫法于一体，采用散色光加百分比测定原理的全自动凝血仪。新引入仪器或者仪器进行维修更换部件后，虽然仪器厂商已经提供了仪器性能的初步参数，但由于地区、实验室之间的差异，各实验室在仪器正式用来检测患者样品前，应根据《临床检验质量管理技术基础》、《临床检验方法确认与性能验证》、《医学实验室质量管理与认可指南》的相关规定，重新进行性能评价[1]。这是保证检验质量的一个重要措施，也是实验室认可的要求。
1.仪器和材料
1.1 仪器与试剂
日本Sysmex生产的CA7000全自动凝血仪；试剂为Dade Behring 公司配套试剂。血浆凝血酶原时间（PT）试剂批号为545553，活化部分凝血活酶时间（APTT）试剂批号为547192A，纤维蛋白原（FIB）试剂批号为528077A,Cacl2试剂批号为539718。
1.2 标本
质控血浆为Bio-Rad Laboratories 生产，3个水平分别为Level1-78271、Level2-78272、Level3-78273。新鲜血浆样本处理用0.109mmol/L枸橼酸钠1:9抗凝，2小时内2500g离心15分钟，4小时内测定。
2.方法
2.1 精密度试验
（1）批内精密度试验。将新鲜正常标本若干份混匀，异常血浆若干份混匀，参考美国临床实验室标准化委员会EP15-A文件[2]用CA7000连续重复测定上述两份不同水平标本20次，计算出均值、标准差和变异系数。（2）批间精密度试验。参照CLSI EP5-A文件[3]，取3个水平的质控血浆每天测定1次，连续测定20天，计算出均值、标准差和变异系数。
2.2 准确度试验
使用3个水平的定值质控品验证凝血三项（PT、APTT、FIB）的准确度。每个水平重复测定3次，将检测结果与靶值比较，计算测定误差，观察偏差是否在允许范围。偏倚%=（测定值-靶值）/靶值×100%。
2.3 FIB最小检测限试验
使用OVB稀释液将标准品稀释到厂家标识的FIB浓度检测低限值（0.8g/l）附近，重复检测10次，记录结果，计算CV，若在厂家标识的±20%范围内，该浓度即为该项目的检测下限。
2.4 FIB临床可报告范围试验
按CLSI EP 6-A2[4]文件要求，选取接近预期上限的高值FIB血浆标本（H=5.68g/l）,按2、4、6、8、10、16倍稀释，对每个稀释度重复测定3次，计算均值，将实测值与理论值作比较，作相关回归分析。看高浓度与低浓度之间是否成线性关系，要求r2＞0.95,α=1±0.05范围内。再用均值除以理论值得到R值，求R在0.8～1.2之间的最大稀释倍数，用最大稀释倍数乘以高浓度样品所值得到的值即为CA7000测定FIB的临床最大可报告范围[5]。
2.5 携带污染试验
取一份正常血浆标本（A）和1份异常（高值）血浆标本（B），样本按A1、A2、A3、B1、B2、B3的顺序测定，这个顺序可以看出正常血浆对异常血浆的影响。再将这个检测过程变成B1、B2、B3、A1、A2、A3，这个顺序可以看出异常血浆对正常血浆的影响。每个顺序过程重复5次并计算污染率[6]。污染率1=（B1-B3）/（A3-B2）×100%；污染率2=（A1-A3）/（B3-A2） ×100%。
2.6 参考区间的验证
选取40例健康体检者标本（男、女各20例），按照标准操作程序用CA7000检测PT、APTT、FIB，来验证PT、APTT、FIB的参考区间能否转移到本实验室。计算比率R（%）=参考个数落在引用区间的个数/参考个数总数×100%。
3.结果
3.1 精密度试验
批内精密度和批间精密度试验所测得的各组结果见表1和表2。CV值符合要求，验证通过。
表1 批内精密度结果
3.3 FIB最小检测限试验
检测稀释好的样品FIB 10次，CV值为1.38%，符合厂家提供的FIB检测限0.8g/l，该浓度即为FIB的检测下限。
3.4 FIB临床可报告范围试验
FIB线性回归方程为Y=1.0345X-0.089，r2为0.996，线性验证通过，见图1。各个稀释倍数测得的值见表4。由表中看出，FIB测定最大稀释度为8倍。
图1 FIB相关的线性回归图
表4 FIB各稀释度检测结果（g/L）
3.6 生物参考区间的验证
40例健康体检者检测PT、APTT、FIB，共120个值，其中117个值在参考区间内。比率R（%）=117/120×100%=97.5%。
4.讨论
质量是检验的生命，而检测系统或方法的分析性能评价是临床检验质量管理的重要内容。ISO 15189和CLIA’88均要求医学实验室对检测系统的主要分析性能进行验证。本实验对CA7000全自动凝血仪的主要分析性能（精密度、准确度、可报告范围、携带污染率和生物参考区间）进行了验证。
精密度是指在一定条件下进行多次测定时，所的测定结果之间的符合程度。根据有关资料PT、APTT、FIB批内精密度要求小于3.0%、4.0%、6.0%，批间精密度要求小于6.5%、6.5%、9.5%，表1和表2试验结果表明，CV值均符合要求，表明该检测系统具有良好的重复性。准确度也是检测系统重要的分析性能之一，经查阅相关资料[7]，选择最适合本项目当前条件下的准确度评价方法，即检测定值质控品，与质控说明书标示的靶值范围比较[8]。检测结果（见表3）均在质控说明书的靶值范围内，偏倚度均在厂家标识的±10%范围内。FIB检测下限为0.8g/L，经实验通过验证。 FIB线性回归方程为Y=1.0345X-0.089，r2为0.996，线性验证通过。由表4可看出，本次结果表明样品8倍稀释时，其R为0.85，10倍稀释时，R值为0.75，因此FIB的最大稀释倍数为8倍，8×5.68=45.5g/L，所以45.5g/l为可测定最大值。FIB临床可报告范围为0.8～45.5g/。检测PT、APTT、FIB的携带污染率结果（见表5）均低于判定标注10.0%，满足卫生部临检中心要求的标准，全部合格。参考区间的验证试验，计算R值为97.5%，按照CA28-A2[9]要求90%健康者测定结果在引进的参考范围内，就可实现参考区间转移，上述结果表明引进试剂说明书上PT、APTT、FIB的参考区间适用于本实验室。
综上所述，通过本次性能评估试验，经过维修后的Sysmex CA7000全自动凝血仪是一部具有良好精密度、准确度、检测范围宽及携带污染率低的检测系统，引用的参考区间也适应，符合ISO15189的要求，可用于临床样品检测。
【参考文献】
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[8]杨有业，张秀明.临床检验方法学评价[M].北京:人民卫士出版社，2009.
[9] CLSI C28-A2.How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory;Approved Guideline-second edition[S].Wayne,PA,UAS:CLSI,2005.
论文作者:朱琴1,全媛（通讯作者）2
论文发表刊物:《医药前沿》2017年12月第34期
论文发表时间:2018/1/9
标签：精密度论文; 血浆论文; 区间论文; 准确度论文; 性能论文; 凝血论文; 试剂论文; 《医药前沿》2017年12月第34期论文;