四川省中江县人民医院 病理科 618100
摘要：在当前时代里，乳腺疾病患者的比例大幅上升，临床乳腺疾病手术量日趋增长，使得临床送检术中快速冰冻切片的病例数量也不断增长。切片的质量和速度都是影响患者治疗质量的重要因素，因此在术中冰冻制片过程中掌控好所需的制片技术显得尤为重要。本文总结了我院在临床治疗过程对快速冰冻切片制作的相关经验和具体操作。
关键词：快速冰冻；切片质量；乳腺组织
1 所需材料和操作方法
1.1所需材料
（1）组织样本：从我院临床送检病理标本中选取187余例新鲜乳腺组织；
（2）试剂：OCT包理剂（高分子聚合物组成的无色透明粘稠液体，骤冷时固化，其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近）；切片固定液（5%含量的冰醋酸；95%含量的乙醇），改良Harris HE染色液、1%的盐酸乙醇、、梯度乙醇溶液和环保型TO透明剂、中性树胶。Thermo Cryotome FSE型恒冷冰冻切片机。
1.2操作方法
（1）取材
当在标本中选取所需的组织切面后，利用常规取材的方式将组织样本取出，并用适量的OCT包理剂将其封存固定。在放入温度在－26℃ ～ －35℃范围之间进行冷冻约2～5min后即可切片
（2）关于切片与固定
等到组织被冻结到整个组织的80%时，就可以进行切片处理了。将所用切片器材的厚度设定在所需的范围之内，切片厚度一般6至8微米左右。先进行测试，待切面被调整好之后在对组织样本进行冰冻切片，同弃用前面的2 ～ 3片，并将获取到的组织切片粘贴在载玻片上后放进固定液中及时固定，时长超过半分钟使其固定。
（3）固定、染色、透明
用流动自来水冲洗先前固定好的组织冰冻切片，时长在10s钟左右即可，再放入苏木素染液中对其进行染色操作，1～3min左右（也可以加热染色，以便缩短染色时间），再用1%盐酸酒精分化5～10s，经自来水冲洗20s后再放入伊红染色液中时长20s～1min，经自来水冲洗10s，最后对其用逐级梯度酒精进行脱水，利用透明剂让组织透明，中性树胶进行封片。
2 结果
冰冻切片厚度匀称、平整无瑕疵，染色效果清晰，组织结构完好无损，对比鲜明。
3.讨论
3.1 冰冻切片存在的意义
冰冻切片技术的运用给临床医疗过程中带来了巨大的贡献，医生可以利用该技术及时有效的发现患者的病变性质，及时对手术方案做出细小精准的变更，最大程度给患者带来的伤害最小化，同时降低患者受病痛折磨的痛苦指数。
在切片的制作过程中，制片时间和报告检测上，都比常规石蜡切片快很多，但正是如此，也使得其在选取标本的材料和处理的过程中陷入了被动中，导致了该方法在精确度上达不到常规石蜡切片的精确度。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆到了冬天时，在对一些组织做冰冻切片染色时，还会出现掉片现象，遇到这样的情况时，就需要重新将组织切片再次切薄，并更换固体液，用洁净的载玻片继续切片，将再次准备好的冰冻切片进行烘烤，最后固定染色。
3.2 提高冰冻切片质量的方法
（1）关于切片的冷冻温度
不同组织由于形态结构，组织大小和性质的不同，对冷冻的温度也有不同的要求。如果温度过低，组织就会变得坚硬，切片时容易破碎，使组织破坏；如果温度过高，组织硬度就不够，导致切片时软化也不易成形。因此，要想获得一张薄而完整的切片，对其温度的控制才是最重要的一步。当组织冰冻变硬还未完全固化时进行切片，就可以有效的避免出现上面的两种现象。进行切片时，要注意切片刀的角度是否正确，确保无误时再缓慢进行切片，选取最好的切片轻轻放入载玻片上，从一边缓慢将切片平整的贴附在载玻片上，同时还要注意整个过程中不要长时间的打开冷冻机的门窗，导致热空气的侵入，从而影响切片效果。
（2）组织标本的正确取材
尽量避开坏死组织和诊断非必需的脂肪等多余的组织，从而确保组织的代表性，为了防止切片时产生冰晶现象所导致细胞受损导致细胞发生内部结构变化，改变结果，做出错误的病理诊断，应对使用的器械进行干燥，减少遇水的可能性，从而避免这种误差的出现可能。
（3）组织标本的染色
在对组织标本进行染色步骤时，选取了苏木素伊红染料，组织越是新鲜的在进行染色时就会越快，因为新鲜组织比较容易与苏木素伊红染料相结合，所以需要的染色时间比较短。如果在染色过程中对苏木素染液先进行了加温，那么所需的时间就会更加的短。在染色过程中需要时刻留意染色的效果，如果染色效果不佳时，要及时的更换新的染液，从而保证切片的质量、效果。
由于乳腺组织中含有大量质地柔软的脂肪以及脂肪空泡。因此，应选择冷冻温度在较低的范围内，一般温度范围为27℃ ～ 36℃；冰冻时间上也略长一些，等到组织稍硬时就可切片，切片厚度约6 ～ 8 μm 为最佳。另外，切片进刀应迅速，染色应避免加热，以免造成脱片、粘连等情况发生。另外，切片过程中，一定要掌握好速度，温度等一系列细节问题，减少一个过程重复，注重质量效率的提高。
3.3 冰晶现象
冰晶现象是在冰冻固化过程中，由于时间过长，将细胞和组织间还没结合的水解析出来而产生的一种现象。当蛋白质和水所形成的胶体受到破坏时，水分就会从中被分离出来形成冰晶。在4℃时，水分的体积会缩小，当在0℃以下时形成冰，体积增大，使得细胞不断的膨胀直至变形，导致细胞发生形态变化。随着冰晶的融化，原组织的形态结构也会发生变化，形态大小不定的空隙就留在了组织之间。
3.4组织切片脱片分析
（1）冰冻切片的裱片是利用载玻片和组织切片间温度差，将切出的片子贴附在载玻片上，然后进行固定染色。在寒冷的冬天，室内的温度低，加之组织切片过厚，往往组织切片与载玻片贴附不牢固，适当的加温，使之切片与载玻片紧密粘附在一起；
（2）对固定液时间掌握不足，使用时间过长导致固定液的浓度降低，没有起到固定的作用而使切片脱落；
（3）载玻片未洗净，有灰尘或其他污染物质，都会导致冰冻切片脱片；
（4）送检标本和取材超时，这样组织会形成冰晶，如果采用了坏死组织，当组织细胞坏死崩解以后，局部渗透压升高，吸收水分，切片一经固定水分逸出，坏死组织失去支撑，染色时，就造成切片脱片；
4 总结
在手术病理诊断中，快速冰冻切片得到了广泛应用，在确立手术方式和治疗方案上都做出了很大的帮助，因此，冰冻切片的质量对手术有着绝对性的影响。为了及时准确无误的对患者做出诊断，同时配合临床医生的治疗，在制片的质量和技巧上都需要做出相对的革新来，从而提高诊断过程中的准确性。
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[2]杨月红，袁永辉．快速冰冻切片的几点体会．实用医技杂志，2005．1（12）．
[3]袁永辉，张韵风．制作临床快速冰冻切片的质量控制．实用医技杂志，2004，1l（6）．
[4]胥维勇．影响冰冻切片质量因素的分析．中国组织化学与细胞化学杂志，2003，12（2）.
论文作者:钟诚
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2017年第20期
论文发表时间:2017/12/15
标签：切片论文; 组织论文; 冰冻论文; 载玻片论文; 苏木论文; 温度论文; 过程中论文; 《中国误诊学杂志》2017年第20期论文;