山西药科职业学院 山西太原 030031
【摘 要】目的：对白芷川芎提取工艺进行优选。方法：采用正交试验法，以欧前胡素、异欧前胡素、阿魏酸的含量为指标，对乙醇用量、提取次数、提取时间3种主要影响因素进行考察。结果：确定最佳工艺为：8倍量80%的乙醇，连续回流提取3次，每次1h。结论：该工艺提取效率高、稳定性好。
【关键词】正交试验法；欧前胡素；异欧前胡素；阿魏酸
The research on extraction process of the Angelica dahuricaand Ligusticum wallichii
Gao Li-xin Wang Pi-ming Liu Xu-sheng
（Shanxi Pharmaceutical Vocational College，Shanxi，Taiyuan，030031，China）
Abstract：Objective：To optimize the extraction process of the Angelica dahurica and Ligusticum wallichii. Methods：With the imperatorin，the isoimperatorin and the ferulic acid as the main index，the orthogonal experiment was employed to investigate the effects of the three factors including the quantity of ethanol、extraction times and extraction time.Results：the optimized extraction condition is 8 times the amount of 80% ethanol extract 3 times，each time 1 hours.Conclusion：This extraction technique is high efficiency and steady.
Key words：orthogonal experiment；imperatorin；isoimperatorin；ferulic acid
白芷主要化学成分为香豆素类成分，香豆素类成分主要有欧前胡素、异欧前胡素，在白芷中香豆素类成分具有广泛的生理和药理作用[1]。魏玉平等[2]通过研究发现，用乙醇作为溶剂能有效提取白芷中的香豆素类成分。川芎主要化学成分有川芎嗪，阿魏酸，还有生物碱，有机酸及其他成分[3]，其中阿魏酸为主要活性成分之一。溶剂法是提取阿魏酸最常用的一种方法，杨广德等[4]通过研究发现，用40%的乙醇回流提取可以获得较高的提取效率。
《中国药典》2015年版一部收载的中成药制剂都梁丸、都梁软胶囊、都梁滴丸[5] 都是由白芷和川芎两味中药经制剂工艺加工而成，临床用于风寒瘀血阻滞脉络所致的头痛，症见头胀痈或刺痛、痛有定处、反复发作、遇风寒诱发或加重。因此，研究白芷川芎提取工艺对都梁丸、都梁软胶囊、都梁滴丸的制备具有指导意义。
1 仪器与试药
1.1仪器
电子天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）；AB204-N型精密分析天平（METTLER TOLEDO上海衡器有限公司）；Agilent 1200高效液相色谱仪（自动进样器，DAD检测器，安捷伦公司）；干燥箱（上海实验仪器总厂）；中药粉碎机（上海淀久中药机械制造有限公司）；939薄层制板器（220V，50HZ）（重庆南岸贝尔德仪器技术厂）；BUCHI旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）；HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）；SHZ-D型循环水式真空泵（河南巩义市英裕仪器厂）。
1.2试药
白芷、川芎两味中药（安徽亳州中信中药饮片厂）；欧前胡素（中国药品生物制品检定所，批号：110826-201013）；异欧前胡素（中国药品生物制品检定所，批号：110827-201008）；阿魏酸（中国药品生物制品检定所，批号：110773-201012）；含量测定所用试剂均为色谱纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1欧前胡素、异欧前胡素、阿魏酸高效液相含量测定方法及色谱条件
2.1.1欧前胡素、异欧前胡素、供试品溶液的制备及色谱条件[6]：
欧前胡素对照品溶液的制备：取欧前胡素对照品4.98mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得储备液。精密量取储备液1ml置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得欧前胡素对照品溶液。
异欧前胡素对照品溶液的制备：取异欧前胡素对照品4.67mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得储备液。精密量取储备液1ml置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得异欧前胡素对照品溶液。
供试品溶液的制备：精密量取适量提取液（相当于原药材1g），50℃水浴挥至无醇味，残渣用甲醇少量多次转移至25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
色谱条件及方法：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（5μm 4.6×250mm）；填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-水（70：30）；流速为1ml/min；检测波长为254 nm；柱温25℃；样品进样量为10μl；理论板数按欧前胡素计算应不低于3000。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。HPLC色谱图见图1、图2、图3、图4。
图4 缺白芷阴性对照色谱图
2.1.2阿魏酸对照品、供试品溶液的制备及色谱条件[7]
阿魏酸对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品5.46mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得储备液。精密量取储备液1ml置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得阿魏酸对照品溶液。
供 试品溶液的制备：精密量取适量提取液（相当于原药材1g），50℃水浴挥至无醇味，残渣用甲醇少量多次转移至25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
色谱条件及方法：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（5μm 4.6×250mm）；填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-1%冰醋酸水溶液（30：70）；流速为1ml/min；检测波长为321 nm；柱温25℃；样品进样量为10μl；理论板数按阿魏酸计算应不低于4000。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。HPLC色谱图见图5、图6、图7。
图7 缺川芎阴性对照色谱图
2.2白芷、川芎80%乙醇回流提取工艺的优化
在单因素考察基础上，对影响回流提取工艺的主要因素：乙醇用量、提取时间及提取次数，按 L9（34）正交表安排试验进行优化。考察指标：欧前胡素、异欧前胡素和阿魏酸的含量及浸膏得率，按照2.1项下方法进行含量测定，试验结果见表1、表2和表3。
表1 因素水平表
注：总评分=总含量×0.8＋浸膏得率×0.2
表3 方差分析表
注：F0.05（2，2）=19，F0.01（2，2）=99
结果分析：
由方差分析可知，提取次数（B）有显著性影响（P<0.05），乙醇用量（A）和提取时间（C）无显著性差异。由直观分析：由极差R的大小可知，因素影响的主次为：B>A>C，即提取次数>乙醇用量>提取时间。各因素K值大小分别为：A因素A3>A1>A2；B因素B3>B2>B1；C因素为C3>C2>C1，最佳提取工艺为A3B3C3，因乙醇用量和提取时间两因素无显著性，从节能及缩短工时考虑，最终选定最佳工艺为A1B3C1，即用8倍量80%的乙醇，连续回流提取3次，每次1h。
2.3工艺验证试验
按处方药材比，称取白芷药材粗粉80g，川芎药材粗粉20g，按照正交试验所得的最佳提取工艺（即用8倍量80%的乙醇，连续回流提取3次，每次1h），进行三次验证试验，按照2.1项下方法进行含量测定，并计算供试品溶液的浓度，结果见表4。
表4 验证试验
由上表可知，3次验证试验结果稳定，表明该工艺稳定可行。
2.4白芷、川芎药材提取工艺研究结果
确定白芷、川芎药材的最佳提取工艺为：8倍量80%的乙醇，连续回流提取3次，每次1h。
3 讨论
根据白芷、川芎药材中有效成分的性质，在单因素考察的基础上，通过正交试验进行提取工艺优化，对主要影响因素（乙醇用量、提取次数、提取时间）进行了筛选，得出药材的最佳提取工艺为：8倍量80%的乙醇，连续回流提取3次，每次1h。试验结果表明该工艺提取效率高、稳定性好，可为工业化生产提供参考。
参考文献：
[1] 何开家，张涵庆.白芷化学成分及其药理研究进展[J].现代中药研究与实践，2008，22（3）：59-62.
[2] 魏玉平，刘俊，颜小林，等.都梁丸提取工艺研究[J].中草药，2001，31（5）：349.
[3] 李秋怡，干国平，刘炎文.川芎的化学成分及药理研究进展[J].时珍国医国药，2006，07.
[4] 杨广德，梁明金，贺浪冲.川芎中阿魏酸的提取方法研究[J].中成药，2002，24（6）：418 -420.
[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.2015年版（一部）[M]，北京：中国医药科技出版社，2015：1325-1326.
[6] 贾敏如，王梦月，等.HPLC测定13种白芷中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].华西药学杂志，2003，18（5）：361-362.
[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.2015年版（一部）[M]，北京：中国医药科技出版社，2015：41.
作者简介：高丽新（1982-），男，硕士，山西药科职业学院，研究方向：药物新剂型研究与开发。
论文作者:高丽新,王丕明,刘旭升,李德成
论文发表刊物:《中国蒙医药》2018年第6期
论文发表时间:2018/8/15
标签：白芷论文; 川芎论文; 溶液论文; 乙醇论文; 精密论文; 甲醇论文; 色谱论文; 《中国蒙医药》2018年第6期论文;