方正旭[1]2003年在《pp60～（c-src）及Jak2在凝血酶诱血管平滑肌细胞增生中的作用》文中研究指明目的 凝血酶参与血管平滑肌细胞(VSMCs)异常增生，但其增生与时相、浓度的关系，及pp60c-src、Jak2在其增生信号传递过程中的作用不清楚。本研究旨在对上述问题进行探讨。 方法 3-10代的VSMCs的单细胞悬液用于实验。1. 为明确凝血酶刺激24小时促VSMCs增殖的量效关系, 实验分六组：凝血酶组（0，0.1，0.5，1，3，10U/ml）。 2.为明确凝血酶促VSMCs增殖的时效关系（0，1，6，12，24，48，72小时）,实验分对照组(DMEM)、凝血酶（0.5U/ml和1.0U/ml）。 3、为明确pp60c-src及Jak2活性在凝血酶促VSMCs增殖中的作用,实验分对照组(DMEM)、凝血酶组（0.5U/ml）、凝血酶和PP1组（PP1，Src特异性抑制剂，TH0.5U/ml＋PP1 10μmol/L）、凝血酶和AG490组（AG490，Jak2特异性抑制剂，TH0.5U/ml＋AG490 50μmol/L）。4、用MTS法或β-N-乙酰氨基己糖苷酶活性法测凝血酶促VSMCs细胞增殖。5、用免疫沉淀分别测定pp60c-src及Jak2的活性、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及血小板源生长因子-A链（PDGF—A）的含量 变化。结果 1、不同浓度的凝血酶对VSMCs有明显促增殖作用，但凝血酶浓度为0.1-10U/ml在24小时时对VSMCs的促增殖作用无显着差异。2、0.5(U/ml)和1.0(U/ml)两种浓度的凝血酶促VSMCs增殖相对于对照组，在各时间段均有明显促增殖作用，且二者作用程度相似，增殖曲线呈双峰样改变，增殖峰在1小时 (0.870±0.042和0.890±0.052 比 0.734±0.015 ,P<0.05)和24小时(1.049±0.112和1.040±0.130比0.706±0.041, P <0.05)。 3、凝血酶刺激组pp60 c-src活性在1小时（1.316±0.036比1.0±0.051，P <0.05）及12小时（1.523±0.036比1.0±0.051, P <0.05）均明显上升。相对凝血酶组，PP1有效的降低了凝血酶诱导VSMCs 1小时峰值 (0.723±0.014比 0.786±0.022, P <0.05 )及24小时的峰值(0.874±0.032比 0.982±0.042, P <0.05). 4 凝血酶组，PDGF自分泌高峰在6小时(1.51±0.051比1.0±0.043, P <0.01) 及12小时(1.46±0.029比1.0±0.043, P < 0.01)，bFGF自分泌高峰在1小时（2.1±0.081比1.0±0.056, P <0.01）。用PP1干预凝血酶诱VSMCs增殖组，与凝血酶组比较，PDGF在6小时(1.12±0.046比 1.51±0.051, P <0.01)、及12小时(0.75±0.039比 1.46±0.029, P <0.01)自分泌高峰、bFGF在1小时<WP=4>（1.39±0.052比2.1±0.081, P <0.01）自分泌高峰均明显被抑制。5凝血酶刺激组Jak2的活性在6小时(1.231±0.041vs1.0±0.046, P <0.05)及12小时(1.295±0.047vs1.0±0.046, P <0.05)均明显上升。相对于凝血酶组，AG490有效的降低了凝血酶诱导VSMCs 1小时峰值 (0.693±0.022vs 0.794±0.036, P <0.05 ) 及24小时的峰值（0.798±0.042vs 0.992±0.039, P <0.05）。结论 1、凝血酶浓度在0.1-10U/ml之间促VSMCs增殖无浓度依赖性，提示凝血酶受体有饱和性。 2、凝血酶促VSMCs的增殖在时间上呈双峰样改变，提示凝血酶不仅有早期快速促VSMCs的增殖作用，而且有后期促VSMCs的增殖作用。3、由于pp60c-src活性第二高峰（12小时）在凝血酶促VSMCs第二增殖峰值（24小时）之前，提示pp60 c-src活性后期的增加参与了凝血酶促VSMCs后期增殖。4、pp60 c-src参与了凝血酶促VSMCs自分泌PDGF和bFGF。5、由于Jak2活性高峰（6小时及12小时）在凝血酶促VSMCs第二增殖峰值（24小时）之前，提示Jak2活性后期的增加参与了凝血酶促VSMCs后期增殖。
方正旭, 王伶, 刘东, 程晓曙[2]2009年在《Jak2在凝血酶诱血管平滑肌细胞增生中的作用》文中认为目的探讨凝血酶诱血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)异常增生的时相关系,及Jak2在其增生信号传递过程中的作用。方法本实验采用培养大鼠胸主动脉4～10代的VSMCs的单细胞悬液用于实验。用MTS法测VSMCs细胞增殖率。用免疫沉淀测定Jak2的活性。结果(1)0.5(u/ml)和1.0(u/ml)两种浓度的凝血酶相对于对照组,在各时间段均有明显促VSMCs增殖作用,且两者作用程度相似,增殖曲线呈双峰样改变,增殖峰在1h和24h。(2)凝血酶刺激组Jak2的活性在6h(P<0.05)及12h(P<0.05)均明显上升。相对于凝血酶组,AG490有效的降低了凝血酶诱导VSMCs1h峰值(P<0.05)及24h峰值(P<0.05)。结论(1)凝血酶促VSMCs的增殖在时间上呈双峰样改变,提示凝血酶不仅有早期快速促VSMCs的增殖作用,而且有后期促VSMCs的增殖作用。(2)由于Jak2活性高峰(6h及12h)在凝血酶促VSMCs第二增殖峰值(24h)之前,提示Jak2活性后期的增加参与了凝血酶促VSMCs后期增殖。
方正旭, 王伶, 刘东, 程晓曙[3]2005年在《pp60c-src在凝血酶诱血管平滑肌细胞增生中的作用》文中研究指明目的探讨凝血酶参与血管平滑肌细胞(VSMCs)异常增生的时相关系,及pp60c-src在其增生信号传递过程中的作用。方法本实验采用培养大鼠胸主动脉3-10代的VSMCs的单细胞悬液用于实验。用MTS法测凝血酶促VSMCs细胞增殖率。用免疫沉淀测定pp60c-src的活性。结果①0.5(umol/ml)和1.0(umol/ml)两种浓度的凝血酶促VSMCs增殖相对于对照组,在各时间段均有明显促增殖作用,且二者作用程度相似,呈双峰样改变,增殖峰在1h(P<0.05)和24h(P<0.05)。②凝血酶刺激组pp60c-src活性在1h(P<0.05)及12h(P<0.05)均明显上升。相对凝血酶组,PP1有效的降低了凝血酶诱导VSMCs1h峰值(P<0.05)及24h的峰值(P<0.05)。结论①凝血酶促VSMCs的增殖在时间上呈双峰样改变,提示凝血酶不仅有早期快速促VSMCs的增殖作用,而且有后期促VSMCs的增殖作用。②由于pp60c-src活性第二高峰(12h)在凝血酶促VSMCs第二增殖峰值(24h)之前,提示pp60c-src活性后期的增加参与了凝血酶促VSMCs后期增殖。
参考文献：
[1]. pp60～（c-src）及Jak2在凝血酶诱血管平滑肌细胞增生中的作用[D]. 方正旭. 江西医学院. 2003
[2]. Jak2在凝血酶诱血管平滑肌细胞增生中的作用[J]. 方正旭, 王伶, 刘东, 程晓曙. 江西医药. 2009
[3]. pp60c-src在凝血酶诱血管平滑肌细胞增生中的作用[J]. 方正旭, 王伶, 刘东, 程晓曙. 江西医学院学报. 2005