（广州医科大学附属第三医院 广东 广州 510000）
【摘要】目的：研究多个miRNA作为一个诊断组合应用于CRC筛查的敏感性和特异性。方法：采用qRT-PCR分析miRNA在CRC患者肿瘤和瘤旁组织之间的表达水平，并统计分析miRNA及其组合作为筛查CRC患者的敏感性和特异性,设定P<0.05。结果：由数个miRNA组成的miRNA组合对CRC诊断准确性明显更高。结论：本实验表明miRNA组合具有作为结直肠癌诊断标记的潜能。
【关键词】结直肠癌；微小RNA；诊断标记；癌胚抗原;粪便潜血实验
【中图分类号】R735.3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）15-0143-02
结直肠癌（CRC）是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一，而且其发病率正快速的上升[1-2]。CRC早期缺乏典型症状[3]，临床上又缺乏早期特异、敏感的筛查指标，目前临床使用的筛查指标特异性及敏感性不理想[4]。找到一种CRC的高特异性、高敏感性的临床标记显得尤为重要，近年来，有研究表明非编码RNA包括微小RNA(miRNA)在CRC的发展中具有重要作用[5]，并具有作为肿瘤诊断标志物的潜能[6-7]。本研究通过分析miRNA组合作为CRC诊断标记的敏感性及特异性，研究其作为CRC诊断标记的潜能。
1.资料与方法
1.1 材料
使用标本取自广州医科大学附属第三医院，所有病例术前均未做放、化疗处理并取得患者知情同意。FOBT及CEA的检查结果来自临床数据。
1.2 研究方法
1.2.1组织miRNA的抽提及质量检测 miRNA的提取采用RNAZOL试剂盒并按说明操作提取miRNA。利用紫外分光光度仪测定样品miRNA的吸光度比值（A260/A280），并对样本miRNA进行甲醛变性凝胶电泳检测纯度以控制miRNA质量。
1.2.2 miRNA qRT-PCR表达分析 采用cDNA合成试剂盒并按操作说明对样本中的miRNA进行反转录，MS2RNA作为外参基因一起反转并同时单独反转MS2RNA作阳性对照，采用U6和U48RNA作为预实验反应的内参基因，所有的反应都设有三个复孔并设外参和空白对照。
1.3 统计方法
miRNA的相对表达量采用ΔΔCT方法计算,ΔCT肿瘤=CT肿瘤-CT内参,ΔCT正常=CT正常-CT内参,ΔΔCT=ΔCT肿瘤-ΔCT正常。采用SPSS16.0(SPSS Ltd.,UK)分析软件对数据进行t检验进行分析，设定双侧P<0.05。逻辑斯特回归方法分析获得miRNA组合，受试者特征曲线（ROC）分析其敏感性和特异性。
2.结果
对比FOBT、CEA与miRNA组合三种筛查手段，结果显示FOBT、CEA、miRNA组合、miRNA组合联合CEA、miRNA组合联合FOBT、三者联合的诊断率分别是26/50、17/50、42/50、46/50、46/50、46/50。
3.讨论
CRC作为高发病率和高致死率的一种恶性肿瘤[8]，CRC在过去几十年间的生存和预后并没有得到明显的改善[1]。因此临床科研人员一直致力于研究具有高敏感性和高特异性的临床筛查指标。有研究报道认为，miRNA有可能作为肿瘤抑制因子或促癌因子参与肿瘤的发生过程[9]。本实验通过RT-qPCR分析了50个miRNA在CRC中的表达情况，结果显示20个MiRNA的表达在肿瘤和瘤旁之间具有显著性的差异，进一步通过ROC曲线分析发现，4个miRNA的曲线下面积为0.7，通过逻辑斯特回归分析，获得由该4个miRNA组成的miRNA组合，其曲线下面积达到0.829（P<0.05），可以认为该组合能够比较好的筛查出肿瘤患者[10]。另外，我们对目前临床上普遍使用的FOBT及CEA结果进行了分析，其敏感性分别为26/50（FOBT）、17/50（CEA），和既往关于其低敏感性的研究结果是一致的，这也是目前临床上所遇到的困难，对比分析miRNA组合和FOBT及CEA作为CRC筛查指标时可以发现，miRNA组合可以在很大程度上提高CRC的诊断准确性，当然我们的实验也有一些局限的部分，比如，我们的CRC患者多数为III、IV期的患者，早期患者病例较少，这需要在以后的研究中进一步改进。但是我们的研究表明miRNA组合作为CRC的诊断工具具有很大的潜能。
【参考文献】
[1] Hrasovec S,Glavac D:MicroRNAs as Novel Biomarkers in Colorectal Cancer. Frontiers in genetics 2012,3:180.
[2] Tauriello DVF,Batlle E.2016.Targeting the Microenvironment in Advanced Colorectal Cancer.Trends in cancer 2(9):495-504.
[3] Torre LA,Bray F,Siegel RL,Ferlay J,Lortet-Tieulent J, Jemal A. 2015. Global cancer statistics,2012.CA: a cancer journal for clinicians 65(2):87-108.
[4] Dong Y,Wu WK,Wu CW,Sung JJ,Yu J,Ng SS.MicroRNA dysregulation in colorectal cancer:A clinical perspective. Br J Cancer 2011; 104(6):893-8.
[5] Li et al.,2017;Slaby et al.,2009; Weng et al.,2017.
[6] Mohammad iA,Mans oo r iB,Ba r ada r anB. Theroleof microRNAsi ncolorectal cancer[J].B i omedPha rma cother, 2016, 84( 6):705 713.
[7] YangY,GuX,ZhouM,e tal.Se r ummi c r oRNAs:Anew d i agno s t i cme t hodf orcolorectalc ancer[J].B i omedRep,2013, 1( 4): 495 498.
[8] Tan E,Gouvas N,Nicholls RJ,Ziprin P,Xynos E,Tekkis PP: Diagnostic precision of carcinoembryonic antigen in the detection of recurrence of colorectal cancer.Surgical oncology 2009,18(1):15-24.
[9] Sreekumar R,Sayan BS,Mirnezami AH,Sayan AE:MicroRNA Control of Invasion and Metastasis Pathways.Frontiers in genetics 2011, 2:58.,
[10] Kunte DP,DelaCruz M,Wali RK, Menon A,Du H,Stypula Y, Patel A,Backman V,Roy HK:Dysregulation of microRNAs in colonic field carcinogenesis:implications for screening. PloS one 2012,7(9):e45591.
论文作者:李晓丹,耿文艳,罗冰,李志发,陈戎,吴小兵（通讯作
论文发表刊物:《医药前沿》2018年5月第15期
论文发表时间:2018/6/1
标签：组合论文; 肿瘤论文; 特异性论文; 敏感性论文; 筛查论文; 患者论文; 方法论文; 《医药前沿》2018年5月第15期论文;