（1青海省药品检验检测院 青海 西宁 810016）（2青海省中藏药现代化研究重点实验室 青海 西宁 810016）
【摘要】目的：确立藏药十八味诃子利尿丸中姜黄的定性和定量方法。方法:经与对照药材HPLC图谱的比对，确立HPLC法鉴别姜黄和测定姜黄素含量的方法。结果：多数供试品色谱中出现与姜黄对照药材保留时间一致的3个色谱峰，姜黄素进样量在0.0109～0.3866μg的范围内有良好的线性关系，回归方程y=7930626.771035X-3382.771035，r=1.0000；结论:此方法对姜黄的鉴别专属性强，定量准确。
【关键词】十八味诃子利尿丸；姜黄；姜黄素；高效液相色谱
【中图分类号】R286.0 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）22-0364-02
Qualitative and Quantitative Methods of Tibetan Medicine Shibawei Heziliniao Wan,Duan Guangpei1,2,Zhang Xingfu1,2 .
1. Qinghai Institute for Drug control and Inspection,2. Key Laboratory of Tibetan Medicine Modern Research,China
【Abstract】Objective To develop an identification and assay of Rhizoma Curcumae Longae in Tibetan Medicine Shibawei Heziliniao Wan. Methods HPLC identification was established for the qualitative control,curcumin was determined by HPLC.Results The linear range of curcumin was within the range of 0.0109-0.3866μg,y=7930626.771035X-3382.771035,r=1.000 0.Conclusion The method is simple and rapid, and can be used in quality control of Shibawei Hezi LiniaoWan.
【Key words】Shibawei Heziliniao Wan;Rhizoma Curcumae Longae;Curcumin;HPLC;Identification; Determination
十八味诃子利尿丸是以诃子、姜黄、余甘子、红花等十八味中藏药材制成的复方制剂，主要功效为益肾固精、利尿，用于肾病、糖尿病、遗精等症[1]。研究表明其对通常抗生素难抑制的耐药菌和真菌抑制效果较好,尤其是对白色念珠菌抑制效果最好[2]。姜黄的主要活性成分为姜黄素，姜黄素为橙黄色结晶粉末，经医学研究，姜黄素具有降血脂、抗肿瘤、抗炎、利胆、抗氧化等作用，国际上近年对其研究愈加重视[3-5]。本文建立了十八味诃子利尿丸中姜黄的HPLC定性方法，并对姜黄素进行了HPLC定量测定。定性鉴别方法专属性强，定量方法准确，可有效控制该药中姜黄的质量。
1.仪器与材料
岛津高效液相色谱仪（LC-20ATVP型）；电子天平(SartriousBT224S,德国Sartrious公司)；电子天平(XS105DU，德国Sartrious公司)，超声波清洗器（KQ5200B，昆山市超声仪器有限公司）；姜黄素（供含量测定用，购自中国药品生物制品鉴定所，批号）。乙腈为色谱纯（市售），其余试剂为分析纯（市售），水为超纯水。十八味诃子利尿丸样品十批，分别来自青海格拉丹东药业有限公司等7家企业。
2.方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验[6-8]
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱：ZORBAX Eclipse×DB—C18（250mm×4.6mm）；4％冰醋酸溶液-乙腈(54:46)为流动相；柱温：25℃；检测波长为430nm。理论板数按姜黄素峰计算应不低于10000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取姜黄素对照品0.00545g，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀（每1ml含姜黄素0.0545mg），即得储备液。精密量取储备液10ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每1ml含姜黄素0.0109 mg）。
2.3 姜黄对照药材溶液的制备
取姜黄粗粉约50mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 供试品溶液的制备
取本品细粉约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.5 阴性溶液的制备
按处方比例称取除去姜黄以外的其他药材适量，依照十八味诃子利尿丸供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
2.6 检测波长的选择
利用高效液相色谱-二极管阵列(DAD),根据姜黄素的光谱图进行选择,姜黄素在430±2nm处有最大吸收，因此选择430nm为检测波长。
2.7 测定法
按上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、姜黄对照药材溶液、供试品溶液、阴性溶液各10μl，分别注入液相色谱仪。供试品溶液色谱图中，在与姜黄素对照品色谱峰相应的位置上，有相同的色谱峰；在与姜黄对照药材色谱峰相应的位置上，有保留时间相同的三个相邻的主色谱峰；而阴性溶液在此无干扰。色谱图见图。
2.8 线性关系考察
取上述已配制好的姜黄素（浓度为0.0109mg/ml）对照品溶液。在上述色谱条件下，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程为：y=7930626.771035X-3382.771035，R=1.0000；结果表明姜黄素进样量在0.0109～0.3866μg的范围内有良好的线性关系，见表。
2.9 精密度试验
精密吸取姜黄素对照品溶液（浓度为0.0109mg/ml），连续进样5次，每次进样量为10μl,测得姜黄素峰面积，平均值859005。表明姜黄素精密度良好，RSD为0.54%（n=6）。
2.10 稳定性试验
取供试品溶液（青海省格拉丹东药业有限公司生产，批号0907108，），于不同时间内进样测定峰面积，结果表明供试品中姜黄素在24h内稳定性良好，RSD为1.30%（n=12）。
2.11 重复性试验
取十八味诃子利尿丸细粉（西藏神猴药业有限责任公司生产，批号20100101，），精密称取6份，按上述方法制成供试品溶液并测定姜黄素含量，结果该份样品平均含量0.6227%，结果表明：供试品重现性良好。RSD为1.7%。
2.12 加样回收率试验
分别精密吸取1.70ml姜黄素对照品储备液（0.0545mg/ml）各6份，置100ml锥形瓶中，蒸干溶剂。取已知含量的十八味诃子利尿丸样品约0.25g（西藏神猴药业有限责任公司生产，批号20100101，姜黄素含量为0.6227mg/g），精密称定，分别置上述锥形瓶中，制成供试品溶液，并按上述色谱条件测定姜黄素的含量，计算回收率。结果平均回收率为100.04%，RSD=1.06%，回收较好。
2.13 样品含量测定
取所有样品细粉，照上述方法制成供试品溶液。按上述色谱条件测定，计算姜黄素的含量。测定结果见表。
2.14 药材的测定
取7个生产企业的姜黄药材细粉，照上述方法制成供试品溶液。按上述色谱条件测定，结果6家生产企业的姜黄药材出现保留时间一致的三个色谱峰，姜黄素含量范围为0.65%～1.39%
2.15 十八味诃子利尿丸中姜黄的HPLC鉴别
取“2.2”和“2.4”项下的供试品溶液和对照品溶液，另取姜黄对照药材粗粉约50mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述色谱条件进样。供试品溶液色谱中，在与姜黄素对照品色谱保留时间一致的位置上，有相同的色谱峰；在与姜黄对照药材色谱峰相应的位置上，有保留时间相同的三个相邻的主色谱峰；而阴性溶液在此无干扰。
3.讨论
对姜黄药材按药材做了原粉和水煮两种方法的考察，结果表明水煮会使姜黄素含量降低约14倍。
通过比较姜黄素的含量后发现，不同企业所生产的十八味诃子利尿丸中姜黄色含量存在一定差异。
对样品进行的HPLC鉴别结果表明，大多数厂家的样品中，均出现与姜黄对照药材保留时间一致的三个色谱峰，且阴性无干扰，部分企业所提供的姜黄药材和十八味诃子利尿丸中只出现姜黄色的色谱峰，表明企业所用姜黄药材需要进一步考察。
【参考文献】
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论文作者:段广佩1,2,张幸福1,2
论文发表刊物:《医药前沿》2018年8月第22期
论文发表时间:2018/8/30
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