李侠1 邱赛红2
1湖南省嘉禾县中医医院 424500；2湖南中医药大学中药开发研究所 410208
摘要：炎可清胶囊由黄柏、黄芩、大黄、黄连、银花等药物组成。是嘉禾县中医医院拟申报用于临床治疗口舌生疮、咽喉肿痛、热结便秘等肺胃热盛病证的医院制剂。功能清热泻火、凉血解毒。根据其功能主治，本项目研究通过观察炎可清胶囊的抑菌作用，拟在为其临床应用提供实验依据。
关键词：炎可清胶囊，抑菌作用
最近几年，抗菌药物的研究不断深入，炎可清胶囊具有良好的抗菌作用，深受人们的认可与喜爱。本文以小鼠为试验体简要针对该药物的抑菌作用进行研究，供相关人士参考。
1、实验材料
1.1药物
1.1.1 炎可清胶囊：由湖南嘉禾县中医医院制剂室提供的炎可清胶囊浸膏，含生药量相当于0.7g/g。批号：20090928。推荐成人日用量按生药量计为18.9g。
1.1.2对照药物
①栀子金花丸，规格9g/袋，西安泰昆制药有限公司生产，批准文号：国药准字Z6102498。生产批号：20090105。推荐临床用量为每日3次，每次6片
②盐酸左氧氟沙星片：规格0.1g/片，浙江京星药业有限公司生产。批准文号：国药准字：H19990060，生产批号：0906251。推荐临床用量300-600mg/日。
1．2试验动物与环境
ICR小鼠。购自上海西普尔—必凯实验动物有限公司。生产许可证号SCXK（沪）2009-0002号。实验动物使用许可证号：SYXK（湘）2009—0001号。
公鸡系从当地农贸市场现售。
1.3 试剂、仪器
试剂均为市售AR级产品。
FA-1004型电子分析天平，上海精密科学仪器厂生产。
TF-1000型电子天平，湘仪天平厂生产。
NH-420型恒温水浴箱，天津特斯特仪器有限公司生产。
TDZ4-NS高速离心机，长沙湘仪离心机有限公司生产。
754型分光光度计，上海第三分析仪器厂生产。
1.4菌种及来源
大肠埃希菌编号44102、金黄色葡萄球菌编号26001、肺炎链球菌编号31002、铜绿色假单胞菌编号10104、乙型溶血性链球菌32172、流感嗜血杆菌编号58540，均由中南大学湘雅医学院微生物教研室提供。各菌种均采用了相应的临床株，各临床菌株均由湖南中医药大学微生物教研室临床微生物检验室提供。
上述菌种均采用相应培养基培养，经鉴定确认后进行试验。各菌鉴定方法见下表。每个菌种均取10个菌落置37℃恒温箱中进行增菌培养。试验前用相应培养基分将菌液稀释至每毫升含细菌数为1×106个供体外抑菌试验用。并以标准株作为质控菌。体内抑菌试验所用大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均用临床分离株。
1.5培养基
营养琼脂培养基、营养肉汤培养基购自杭州天和微生物试剂有限公司。PH6.5磷酸缓冲液制沙氏液体及沙氏琼脂培养基对照药典方法自制。血琼脂培养基及血营养肉汤培养基按配方制备后灭菌，冷却至50℃左右，加入10%无菌脱纤维兔血，摇匀。上述培养基均经高压灭菌后使用。
1.6试验数据的统计学分析
试验数据均采用SPSS16.0软件进行统计学处理，采用均数±标准差（x ±s）表示，统计学分析检验计量资料的采用单因素方差分析，组间比较采用LSD法。计数资料检验采用X2检验
2．试验方法与结果
2.1 试验方法
2．1．1平板抑菌环检测试验
按不同菌种培养要求制备相应无菌琼脂平板。取已加入相应固体培养基的无菌琼脂平板，取含菌量约为1×106/ml的相应细菌菌液，分别用无菌玻璃扩散棒均匀涂布于平板表面。炎可清胶囊浸膏用灭菌蒸馏水制成相当于生药量0.5g?mL-1。每个平板用直径6mm的打孔器打孔3个。每个菌种的平板分为两组进行平行比较。其中1组每孔用微量加样器加入含生药量0.5g?mL-1的炎可清胶囊药液50μL；另1组加入同体积2mg?mL-1的盐酸左氧氟沙星阳性对照药。然后将平板置37℃恒温培养箱中培养孵育24h。取平板观察给药孔周围细菌生长情况，测量无菌生长的抑菌环直径。
2．1．2炎可清胶囊对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌感染小鼠的体内抑菌研究
2.2.2.1预试试验
对照文献[1]方法，取18～22g小鼠，雌雄各半。称重并分组，每组6只。分别取经过增菌培养的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌临床株备用菌液，按10倍顺序依次稀释为10-1、10-2、10-3、……10-7等不同浓度。分别给各鼠腹腔注射0.5ml/只。观察2周内各组感染动物的死亡情况。结果，大肠杆菌引起100%小鼠死亡的最低菌液浓度为7×109个/ml，每只鼠腹腔注射0.5ml；金黄色葡萄球菌引起100%小鼠死亡的最低菌液浓度为8×107个/ml，，每只鼠腹腔注射0.5ml。
2.2.2.2治疗试验
取ICR小鼠100只，雌雄各半，体重18～22g。按性别体重分层，随机分为5组，每组20只。分别灌胃给予炎可清胶囊40、20、10g/kg、左氧氟沙星片100mg/kg及纯净水20ml/kg。每天给药1次，共给药6天。第4天给药后1h，每鼠腹腔注射细菌数为6×109个/ml，（即大肠杆菌引起100%小鼠死亡最低菌液浓度7×109个/ml，的90%）的大肠杆菌菌液0.5ml。观察记录注射大肠杆菌后一周内小鼠的存活情况，计算小鼠存活率。并计算与空白对照组比较各药物组的小鼠存活提高率。存活提高率计算方法如下：
存活提高率（%）=1－[（100－给药组存活率）/（100－对照组存活率）]×100%
另取ICR小鼠100只，雌雄各半，体重18～22g。按性别体重分层，随机分为5组，每组20只。分别灌胃给予炎可清胶囊40、20、10g/kg、左氧氟沙星片100mg/kg及蒸馏水20ml/kg。每天给药1次，共给药6天。第4天给药后1h，每鼠腹腔注射细菌数为7×107/ml（即金黄色葡萄球菌引起100%小鼠死亡最低菌液浓度8×107/ml的90%）金黄色葡萄球菌菌液0.5ml。观察记录注射金黄色葡萄球菌后一周内小鼠的存活情况，计算各组小鼠存活率，及与空白组比较的小鼠存活提高率。
2.2 结果
平板抑菌环测定结果表明，炎可清胶囊浓度为0.7g/ml时，对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、流感嗜血杆菌和铜绿色假单胞菌均有较强的抑制作用。表明，炎可清对所观察的几种细菌的抑制作用均达到了中度敏感以上水平。见表1。
3．讨论
中医的热证分为实热和虚热。虚热的形成多因久病体虚，阴、血不足，阴不制阳而生内热。治疗重在采用滋阴、养血等方法，益阴以制阳而除虚热。实热证的治疗则多从清热、泻火、凉血及解毒着手。现代医学的多种急性传染、感染性热性疾病等多属于中医实热证和热毒证的范畴。临床症状有发热、烦渴、尿黄、大便干结、舌红、苔黄，或局部见红、肿、热、痛等[5、6]。炎可清胶囊的功能为清热泻火、凉血解毒，用于肺胃热盛。所主治的病证为实热证。
有关中药清热泻火解毒作用的药理研究方法很多。但归纳起来，主要还是不外乎从抗病原微生物、抗细菌毒素、解热、抗炎及对免疫功能影响等方面着手[6]。故针对炎可清胶囊功能主治的主要药效学研究，本文实验设计了主要从抑菌方面对炎可清胶囊的药理作用进行了观察。
由于病原微生物感染是实热证形成的最常见原因，故本研究首先观察了炎可清胶囊在抗菌方面作用，并分别采用了体外和体内两种实验方法。在菌种的选择上，考虑到肺胃热盛所表现出的症状部位主要是呼吸系统和消化系统的感染，故选择了大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、铜绿色假单胞菌、乙型溶血性链球菌和流感嗜血杆菌等呼吸道和消化道的常见致病菌作为实验对象。实验结果表明，炎可清胶囊有较广谱的抑菌作用，对所观察细菌的抑菌作用也相对比较敏感。体内抑菌试验则显示对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌致死性感染均具有明显保护作用。
参考文献：
[1]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科技出版社.2006，第2版，758
[2]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社.2006，第2版，347.
[3]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科技出版社.2006，第2版，725
[4]李勇，夏翠英，章天寿.等.前列康对鸡红细胞致小鼠溶血素抗体生成的影响.安徽中医学院学报.2004，23（6）：35～36
[5]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科技出版社.2006，第2版，753
论文作者:李侠1,邱赛红2
论文发表刊物:《健康世界》2015年5期供稿
论文发表时间:2015/10/23
标签：小鼠论文; 胶囊论文; 葡萄球菌论文; 培养基论文; 金黄色论文; 大肠杆菌论文; 菌种论文; 《健康世界》2015年5期供稿论文;