（甘肃省酒泉市中医院；甘肃酒泉735000）
摘要：同型半胱氨酸( HCy)又称高半胱氨酸(HHcy)，是一种含硫氨基酸，它不属于组成蛋白质的20种氨基酸，本身不参与蛋白质的合成，也没有特异的3个DNA碱基对其进行编码，在体内不能合成，它是由蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中产生的重要的中间产物，只能来源于蛋氨酸的分解代谢。血浆Hcy是一个总称，指血浆中所有形式的Hcy，包括还原型Hcy，双硫Hcy，混合双硫半胱氨酸Hcy和混合双硫蛋白质Hcy，正常情况下游离Hcy很少，主要以蛋白质形式存在。很多因素如遗传、营养、肾功能不全、药物、激素等因素均可能影响体内同型半胱氨酸的代谢，造成高Hcy血症。近年来，随着Hcy检测技术的不断改进和发展，大量研究证明高Hcy血症是心脑血管疾病的一个新的独立危险因素。还与糖尿病、肾衰、老年痴呆等高度相关，危险度随Hcy浓度的升高而增加[1]。但到目前为止，Hcy的检测只局限于研究性质的科研单位和大型医院实验室，而基层医院的医务工作者对心脑血管危险因子的认识还停留在早已家喻户晓的血脂上。现就Hcy的检测方法，临床诊断及疗效观察做一简述。
关键词：同型半胱氨酸检测；进展；方法评价
1放射免疫分析法：该方法灵敏度高，特异性强，但操作繁琐且有放射污染，同时同位素易衰变及对人体有危害限制了使用，目前未推广使用。
2气湘色谱质谱法(GC-MS)：1987年首先报道了GC-MS法联用测定Hcy，该法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点。但因需要的设备昂贵，操作十分复杂，耗时长，仪器设备要求较高，难以在常规临床化学实验室推广使用。
3高效液相色谱法(HPLC)：是目前公认的参考方法，基本分析原理：先使用还原剂使血样中所有形式的Hcy转变成还原形式，然后与荧光试剂进行衍生生成Hcy-荧光物质复合物，将衍生后的样品进行色谱分析。因色谱固定相对不同物质的吸附力不同，因此流动相将其洗脱下来的次序也不同，根据这一原理将样品中的不同物质分开，以荧光检测器检测洗脱下Hcy-荧光物质复合物的荧光强度，将其与标准品／内标的比值进行比较和计算，就可以测定血中Hcy的水平。此方法灵敏度高，准确度和精密度好，但由于其操作繁琐复杂，耗时耗费，不适用于临床应用，主要用于实验研究。
3.1 高效液相荧光检测法( HPLC-FD)： 采用柱前衍生的技术，然后用HPIC将衍生物分离，并用荧光检测。1993年有研究者首先采用全自动HPLC法对血浆和尿液的Hcy和硫醇物进行测定。该方法较有代表性，近年来，国内也有学者对HPLC进行了改进。该法检测原理为血浆中Hcy、混合型硫化物及蛋白质结合的Hcy经巯基还原剂处理之后，再与巯基结合的荧光物质SBD-F充分反应形成带有共轭结构的化合物，其受紫外光激发后，能辐射出荧光，而且在一定条件下，荧光强度和样品的浓度呈正比。3.2高效液相电化学法(HPLC-ED)：具有样本处理简单，无需衍生的特点，又有较高的灵敏性、专一性和稳定性，应用较广泛。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆该法中有两种电极均可使用（H2/H+玻璃电极和Ag/AgCI碳糊电极）[2]。
4氨基酸分析仪检测法：该法原理是二硫苏糖醇或2巯基乙醇为还原剂，样本还原，脱蛋白处理后，直接或经碘乙酸被S_碳甲基化后在氨基酸分析仪上离子交换层析分离，茚三酮反应检测。整个过程花费时间较长。该法灵敏度低，且对含硫氨基酸不敏感，现已不采用此法测定血浆Hcy。
1.5酶联免疫分析吸附试验( ELISA)：先使用酶将血样中所有形式的Hcy转变成S-腺苷-L-Hcy，然后加入酶标的抗S腺苷-L-Hcy的单克隆或多克隆抗体，采用竞争结合的原理，将不同水平的标准品与酶标抗体竞争结合，然后以显色试剂和终止试剂分别进行显色和终止，制作出Hcy浓度与发色强度的标准曲线。样品也按相同步骤处理，在标准曲线上就可以查出其Hcy的浓度。
1.6荧光偏振免疫( FPIA) 基本分析原理：样品中游离Hcy和抗单克隆抗体相结合的Hcy的荧光偏振强度不同，将样品、标准品与标抗体竞争结合，采用竞争结合的原理制作出Hcy浓度与荧光偏振强度的标准曲线，在标准曲线上就可以查出其Hcy的浓度，是临床上测定Hcy水平的比较好的方法。该方法完全自动化仪器分析，具有快速、准确、方便的优点，受到临床医师们的欢迎，但需专门仪器。
1.7毛细管电泳法基本分析原理：先使用还原剂使血样中所有形式的Hcy转变成还原形式，然后与荧光试剂进行衍生生成Hcy-荧光物质复合物，将衍生后的样品进行毛细电泳分析。将样品放置于10千伏左右的高压电场中，因为各种物质所带电荷不同，其等电点也不相同，因此其在电场中的迁移速度也就不同。根据这一原理可将Hcy与样品中的其他物质分开，再以荧光检测器检测Hcy-荧光物质复合物的荧光强度，将其与标准品／内标的比值进行比较和计算工作。
1.8循环酶法简称酶法，其原理是利用小分子捕获技术(SMT)的s-腺苷Hcy(SAH)水解酶的方法。在三一乙一羧乙基膦(TCEP)作用下，氧化型Hcy被转化为游离型Hcy，后者通过与共价底物S腺苷甲硫氨酸反应，生成蛋氨酸和SAH。SAH被SAH水解酶水解成腺苷和Hcy，Hcy经循环反应放大信号，同时产生腺苷，腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使NADH转化为NAD+，样本中的Hcy含量与NADH转化速率呈正比。
综上所述，HPLC法是经典的方法，循环酶法是最近推出的新检测方法，HPLC法和FPIA法都具有较高的灵敏度和精密度，是应用最广泛的两种方法，而FPIA法操作更加简单速度也较快，但两者成本相对较高。ELISA法和循环酶法操作较简单且成本也较低，而循环酶法在全自动生化分析仪上可实现批量自动检测，具有更加广泛的应用前景。
参考文献
[1]吕伟标，罗玲．检测同型半胱氨酸的方法学进展和评价[J]．临床和实验医学杂志，2008，7(7)。 [2]何俊，丁敏，张晓清，等．高效液相色谱法同时测定血浆同型半胱氨酸及其相关硫醇物浓度方法的建立[J]．中华检验医学杂志，2006,29(3):203-206.
论文作者:柴娅丽,谢丽娟通讯作者
论文发表刊物:《医师在线》2017年10月下第20期
论文发表时间:2018/1/8
标签：荧光论文; 半胱氨酸论文; 腺苷论文; 样品论文; 方法论文; 血浆论文; 原理论文; 《医师在线》2017年10月下第20期论文;