蓝英
（广西医科大学广西南宁530021）
【摘要】目的：观察鼻咽癌组织中mGluR4蛋白以及基因的表达，探讨它的表达水平与鼻咽癌患者临床特征的关系。方法：用RT-PCR测定40个鼻咽癌组织和相应的癌旁正常组织中mGluR4mRNA表达水平。应用免疫组织化学方法检测118例石蜡包埋的鼻咽癌组织及8例癌旁正常组织中mGluR4的表达。结果：免疫组化中mGluR4染色主要定位于细胞质，mGluR4在鼻咽癌组织中的阳性表达率为74%，明显高于瘤旁正常组织的25%(P<0.05)。RT-PCR结果表明，与正常组织相比，鼻咽癌组织中mGluR4基因表达水平显著增高。并且mGluR4的高表达主要出现于分期较高的鼻咽癌组织和转移的肿瘤组织中。结论：mGluR4在鼻咽癌组织中处于高表达水平，它可能成为诊断鼻咽癌发病的分子标记。
【关键词】鼻咽癌；mGluR4；分期
【中图分类号】R730【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）07-0055-03 MGluR4relationsofexpressionlevelandincidenceofnasopharyngealcarcinomaLanYing.GuangxiMedicalUniversity,Guangxi,Nanning530021,China
【Abstract】ObjectiveObservemGluR4proteinandgeneexpressionofthenasopharyngealcarcinomatissueandexploreitsexpressionlevelandclinicalfeaturesofpatientswithnasopharyngealcarcinoma(NPC).Methods40nasopharyngealcarcinomatissuewasdeterminedbyrt-pcrandthecorrespondinginnormaltissueadjacenttocarcinomamGluR4mRNAexpressionlevel.ResultsMGluR4inimmunohistochemicalstainingismainlylocatedincytoplasm,mGluR4innasopharyngealcarcinomatissueofthepositiveexpressionrateis74%,significantlyhigherthanthe25%ofthenormaltissueadjacenttotumors(P<0.05).ConclusionsMGluR4atahighexpressionlevelinnasopharyngealcarcinomatissue,itcouldbecomeadiagnosisofnasopharyngealcarcinomamarkerofthedisease.
【Keywords】Nasopharyngealcarcinoma;MGluR4;Installment
鼻咽癌是一种发生在鼻咽部上皮的鳞状细胞癌。有显著的地理和种族差异。鼻咽癌好发于中国南部，它的发病率为25-30/100000人/年。病因学研究表明鼻咽癌的发生发展与环境中的化学致癌物质、EB病毒感染等因素密切相关。但是，鼻咽癌发生发展的分子基础仍不清楚。肿瘤的形成是多个基因参与的复杂过程，正常细胞转化为肿瘤细胞的恶变过程涉及多种因素的共同作用。mGluR4是代谢型谷氨酸受体(metabotropicglutamatereceptors，mGluRs)家族的一员。mGluRs是一类与G蛋白相偶联的跨膜受体，被配体激活后通过产生第二信使（如三磷酸肌醇，二酯酰甘油和cAMP）而发挥其生物学效应。mGluRs有8个亚型，mGluR4与腺苷酸环化酶负偶联，抑制环磷酸腺苷的生成，进而抑制蛋白激酶A的功能[1]。mGluR4与多种肿瘤的发病密切相关，但它与鼻咽癌的关系尚未研究。
1.方法与材料
使用免疫组化的方法检测鼻咽癌中mGluRs的表达。石蜡切片经脱蜡和水化后，对组织抗原进行修复；每张切片加3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶；PBS漂洗后加一滴正常山羊血清封闭液；除去血清，切片分别滴加抗mGluRs抗体，４℃过夜；每张切片加一滴生物素标记的二抗；然后滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素；滴加新鲜配制的DAB显色液，PBS冲洗中止显色反应，苏木精复染，逐级乙醇脱水后二甲苯透明，中性树胶封片。
采用RT-PCR检测鼻咽癌中mGluRs编码基因GRMs的表达。用Trizol抽提组织总RNA，使用high-capacitycDNAsynthesiskit来进行反转录反应.每个样本cDNA的引物序列、扩增产物的长度以及反应条件见表一。取20ulPCR产物行琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像系统扫描图像，分别测定各标本目的基因条带与对应GAPDH条带的比值，对电泳条带进行半定量测量，记录mRNA表达丰度。
2.结果
如图1所示，mGluR4阳性染色位于细胞质，在118例鼻咽癌切片中，86例高表达mGluR4，32例是低表达水平(其中有7例鼻咽癌组织没有表达mGluR4)。8例正常组织全为阴性。为了进一步探讨mGluR4在鼻咽癌发生发展中的作用，我们分析了mGluR4表达水平与鼻咽癌临床病理特征的关系。mGluR4在肿瘤的各个分期中均有表达，mGluR4高表达更常见于高的分期和转移的鼻咽癌组织。
如图2所示，与正常组织相比mGluR4在鼻咽癌中表达显著增加。统计分析表明mGluR4mRNA在鼻咽癌中(mean±SD：1.57±0.33)的表达水平要比正常组织中(mean±SD：0.62±0.25；P<0.05)显著增高。
3.讨论
大多数早期对mGluRs的研究都局限于中枢神经系统，它主要参与学习、记忆、疼痛的传导以及维持中枢神经系统细胞内环境的稳定。近年来，在外周非神经系统的组织中，例如：骨、皮肤和胰腺等，也发现有谷氨酸受体的表达。谷氨酸信号系统可能参与这些组织中成骨细胞的分化、角化细胞的增殖以及胰岛素分泌的调节等过程[2]。如今人们逐渐认识到mGluRs除了在突触传递中发挥作用外，还与恶性肿瘤的发生发展有着重要关系。Pollock等首先发现mGluR1的异常表达是小鼠黑色素瘤形成的驱动力[3]。其他类型的mGluRs也被证实与恶性神经胶质瘤[4]和成神经管细胞瘤的发病有关。Seidlitz检测了一些有骨转移倾向的肿瘤细胞系，发现这些肿瘤细胞系通过胱氨酸/谷氨酸转运蛋白向细胞外微环境分泌出更多的谷氨酸[5]。Chang等发现mGluR4在结直肠癌、恶性黑色素瘤、喉癌和乳腺癌中有表达。其中241个结直肠癌组织中有131个表达了mGluR4，说明mGluR4和结肠直肠癌的发病存在一定的联系，在随访中他们还发现mGluR4高表达与较差的预后有显著的相关性。除此以外，这个团队还发现mGluR4抑制剂可以抑制结肠癌细胞的生长。我们的数据表明mGluR4高表达与鼻咽癌的临床分期和转移有联系，但是目前尚不知道这种分子的生理作用是怎样影响鼻咽癌的复发和转移。许多调节通路都与mGluR信号相偶联（包括丝裂原活化蛋白激酶，磷脂酰肌醇3激酶，磷脂酶C）抑制cAMP途径。所有的这些通路都与细胞增殖、分化、抗凋亡有关，表明mGluR4高表达可能会影响鼻咽癌细胞的生物学行为。我们的实验不能检测mGluR4信号通路具体是怎样致癌的，但是我们的结果支撑先前关于mGluR4信号通路参与肿瘤生长与恶化的结论。在免疫组化试验中，mGluR4高表达不仅出现于分期更高的鼻咽癌组织还出现于转移的鼻咽癌中。
我们对118例鼻咽癌患者的病理切片进行了免疫组化检测，结果发现86例患者mGluR4高表达，25例低表达，7例不表达，作为对照的8例正常组织全部没有mGluR4的表达。mGluR4在不同分期的鼻咽癌组织中均有可能表达，但mGluR4高表达更常见于较高的分期和已发生转移的鼻咽癌组织中。进一步开展mGluR4与鼻咽癌之间关系的研究，不仅有助于全面阐明鼻咽癌发生、发展的机制，而且对它早期诊断、治疗、预后有着重要意义。
【参考文献】
[1]肖胜杰.代谢型谷氨酸受体组成性活性突变体的构建和功能检测[D].华中科技大学,2013.
[2]张娅玲,白艳秋.代谢型谷氨酸受体4亚型(mGluR4)高通量药物筛选模型的建立[J].生物工程学报,2009,03:457-463.
[3]郑蓓,周立民,赵青威等.代谢型谷氨酸受体4在ES细胞体外分化为心肌细胞中的表达研究[J].浙江大学学报(医学版),2012,04:366-372.
[4]TakanoT,LinJH,ArcuinoG,etal.(2001)Glutamatereleasepromotesgrowthofmalignantgliomas.NatMed7:1010-1015.
[5]SeidlitzEP,SharmaMK,SaikaliZ,etal.(2009)Cancercelllinesreleaseglutamateintotheextracellularenvironment.ClinExpMetastasis26:781-787.
通讯作者：蓝英（1988-），女，在读硕士，主要从事鼻咽癌的肿瘤生物学研究邮箱:lanying3211@163.com.
论文作者:蓝英
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第7期供稿
论文发表时间:2015/7/2
标签：鼻咽癌论文; 组织论文; 谷氨酸论文; 细胞论文; 肿瘤论文; 受体论文; 切片论文; 《医药前沿》2015年第7期供稿论文;