摘要 目的：建立盐酸小檗碱片设备清洁化学残留量的测定方法。
方法：色谱柱岛津Wondsil C18 5μm (250×4.6mm)；以磷酸盐缓冲液[0.05mol/L磷酸二氢钾溶液和0.05mol/L庚烷磺酸钠（1:1），含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0]-乙腈（60:40)为流动相，检测波长为263nm，柱温为30℃，流速为1ml/min。结果：盐酸小檗碱在0.1048μg/ml～14.0417μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为y= 46.553x-1.6856（r=0.9999）；钢板回收率为75% ，RSD为5%。 结论：用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱片设备清洁残留量，方法简便准确，结果准确，重现性好，可用于盐酸小檗碱片设备清洁验证中化学残留的检测。
关键词 高效液相色谱法 盐酸小檗碱 盐酸小檗碱片 清洁验证
1.仪器与试药
高效液相色谱仪Agilent 1100；色谱柱：Wondsil C18 5μm (250×4.6mm)；盐酸小檗碱对照品，批号：110713-201613 ，由中国食品药品检定研究院提供；所用乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯；供试品为盐酸小檗碱片。
2.方法与结果
2.1. 色谱条件 以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液[0.05mol/L磷酸二氢钾溶液和0.05mol/L庚烷磺酸钠（1:1），含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0]-乙腈（60:40)为流动相，检测波长为263nm，柱温为30℃，流速为1ml/min，进样量为10ul。
2.2. 溶液制备
供试品溶液的制备：取盐酸小檗碱片 ,研细，精密称取适量，置100ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理10分钟使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品储备液。
精密吸取供试品储备液2.00mL，置25mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
对照品储备溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品2.311mg，置50ml容量瓶中，加甲醇适量使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.040119mg/ml对照品储备液。
精密吸取对照品储备液 ，精密量取3.50ml于25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得0.0056167mg/ml对照品溶液。
2.3检出限和定量限：精密量取浓度为0.056167μg/mL的对照品溶液10μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行进样，测得信噪比为5.8:1，信噪比大于3:1，说明仪器的最低检出限为0.00056167ug（相当于0.006ug/ cm2）。精密量取该溶液20μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行进样，测得信噪比为15.2:1，信噪比大于10:1，说明仪器的定量限为0.0011233ug（相当于0.012ug/ cm2）。
2.4.专属性:
空白溶液：取用于擦拭法的棉签4支，用75%乙醇溶液润湿，置于50ml具塞锥形瓶中（必须为洁净），精密加入甲醇10ml，超声处理10分钟，即得。分别取空白溶液、溶剂(甲醇)、对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.5.线性关系考察
精密吸取对照品储备液0.25mL、0.50mL、1.00mL、3.50mL、2.00mL、2.50 mL、3.00mL分别至10mL、10mL、10mL、25mL、10mL、10mL、10mL容量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线对照品系列溶液。分别取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果表明盐酸小檗碱在0.1048μg/ml～14.0417μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为y= 46.553x-1.6856（r=0.9999）。
2.6.精密度试验
分别精密吸取浓度为0.0056167mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液10μl，按测定方法重复进样6次，峰面积分别为 254.9、259.1、256.2、256.5、259.2、259.6，峰面积的相对标准偏差RSD%为0.76%，未超过2%，说明仪器精密度良好。
2.7. 稳定性
分别吸取第0h、6h、12h、36h、72h供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，峰面积相对标准偏差RSD%为4.6%，满足要求。
2.8. 准确度
取供试品溶液9份，分别按照50%、100%、150%浓度添加对照品溶液，每个浓度3份，分别吸取溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
试验结果表明回收率以盐酸小檗碱回收率计，平均回收率为99.5%，加样回收率的相对标准偏差RSD为5%，说明方法准确度满足要求。
2.9. 取样方法和取样回收率：照棉签擦拭法取样
供试品溶液制备：分别精密吸取供试品储备溶液0.25ml、0.50ml、0.75ml各3份。
回收率溶液的制备：在不锈钢板上选择4块面积25cm2方块，分别取3个浓度的供试品储备液(0.25ml、0.50ml、0.75ml)均匀涂布于钢板方块上，挥干溶剂；分别将4根棉签放入盛有溶剂（75%乙醇）的试剂瓶中湿润，按取样方法取样，擦拭完后，将4根棉签放回盛有10mL甲醇的具塞锥形瓶中超声10分钟使活性成分溶解，过滤，即得。取4支空白棉签，照上述方法不加样品进行擦拭取样，溶解，过滤，即得空白棉签溶液。
分别取对照品溶液、空白溶液、供试品溶液和回收率溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
试验结果表明取样回收率以盐酸小檗碱回收率计，平均回收率为75%，加样回收率的相对标准偏差RSD为6%，取样回收率满足要求。
3.讨论
通过对该方法检出限、定量限、线性关系、专属性、精密度、稳定性、准确度、取样回收率的研究，并根据《药品生产质量管理规范》（2010年修订）的相关技术要求，表明该方法可用于盐酸小檗碱片设备清洁验证中化学残留的检测，为盐酸小檗碱片生产后清洁方法提供了可靠的检测方法，使盐酸小檗碱片共线生产安全可控。
参考文献
[1] 《中国药典》2015版二部附录药品质量标准分析方法验证指导。
[2].《药品生产质量管理规范》（2010年修订）。
[3]. 《中国药典》2015版二部盐酸小檗碱片
论文作者:涂莉芸，周世雄，李宁
论文发表刊物:《医师在线（学术版）》2019年第13期
论文发表时间:2019/9/4
标签：溶液论文; 盐酸论文; 小檗论文; 回收率论文; 精密论文; 色谱论文; 甲醇论文; 《医师在线（学术版）》2019年第13期论文;