张红梅[1]2004年在《陕西省常见四种实蝇的分子鉴定》文中指出实蝇作为一种有重要经济意义的有害生物类群，不仅对水果生产构成直接的危害，而且对水果进出口贸易也造成严重的影响。目前，世界上危害果蔬类的实蝇达 150 余种，且分布在不同的国家和地区，各国政府均采取了严密的检疫措施，以防止检疫性实蝇的传播扩散。目前，实蝇的分类鉴定主要是以成虫的外部形态特征作为依据，但在口岸实际检疫工作中，截获的往往是幼虫或蛹，通常的做法是对其进行室内饲养待获得成虫后再进行鉴定，这样不仅延长了进出口物品的通关时间，而且增加了检疫人员的工作强度。因此，对实蝇进行快速、准确的鉴定，无论是在口岸检疫上还是在防治上都具有重要意义。本文利用 RAPD 技术和 PCR 方法在国内首次对实蝇的分子鉴定进行了研究，旨在找到一种能准确、快速鉴定实蝇的方法，主要结果如下： 1、利用目前国内提取干标本 DNA 的多种方法，如 CTAB 法、SDS 法等试验结果表明，常规保存条件下，保存一年左右的干标本很难进行 DNA 的提取，不管采用何种方法，大多数标本均不能提取到 DNA；仅少数保存比较好的干标本，可以提取出 DNA并进行 PCR 扩增。而利用 CTAB 法、SDS 法等方法对绝大多数保存在超低温冰箱中的干标本都能提取到足量的 DNA。 2、在多次筛选试验的基础上，优化了实蝇的 RAPD 体系，建立了一套稳定的实蝇鉴定 RAPD 反应体系，为今后采用分子生物学技术进行实蝇鉴定奠定了一定的基础。 3、从 69 条引物中筛选出 S361、S67 和 S252 可以对南瓜实蝇、具条实蝇和叁点棍腹实蝇进行区别鉴定；S112 引物可以对具条实蝇、桔大实蝇和叁点棍腹实蝇进行区别鉴定；S126 和 S134 可以对具条实蝇和叁点棍腹实蝇进行区别鉴定，S83 可以对南瓜实蝇的雌性和雄性进行鉴定。 4、利用 3 条扩增结果稳定、清晰的引物，每种实蝇用 7 个个体对 4 种实蝇的种内稳定性进行了研究，结果表明南瓜实蝇、具条实蝇、桔大实蝇和叁点棍腹实蝇的种内平均相似系数分别为 0.551、0.538、0.373、0.778，从相似系数可以看出叁点棍腹实蝇种内最稳定，其次为南瓜实蝇和具条实蝇，桔大实蝇种内分化最大。 5、用 S61、S83、S107、S264、S265、S266、S271、S274、S275、S276、S1142、S 合引等 12 条引物，每种实蝇用 1 个个体，对 4 种实蝇进行扩增，根据 DICE 遗传距离聚类结果表明南瓜实蝇和具条实蝇先聚在一起，然后与叁点棍腹实蝇聚在一起，最后再与桔大实蝇聚在一起。用 S61、S107、S126、S275、S1142 等 5 条引物，每种实蝇用3 个个体，对 4 种实蝇进行扩增，用 DICE 和 NEI 遗传距离聚类结果表明南瓜实蝇和具条实蝇先聚在一起，再与桔大实蝇聚在一起，最后它们 3 个与叁点棍腹实蝇聚在一起。这与传统分类所提出的亲缘关系完全一致。 6、通过扩增 ITS1 片段，成功的对 4 种实蝇进行了鉴定，其中南瓜实蝇扩增出的条
张红梅, 潘亚勤, 魏迪功, 仵均祥[2]2004年在《陕西省常见四种实蝇的RAPD研究初报(双翅目:实蝇科)》文中进行了进一步梳理应用31种随机引物对陕西省常见4种实蝇的基因组DNA进行扩增,筛选出5种引物S61、S107、S126、S275、S1142,可以对4个种扩增出稳定清晰的多态性片段,其中引物S126可以把南瓜实蝇和具条实蝇,具条实蝇和叁点棍腹实蝇分开;利用UPGMA法聚类构建的系统树与传统分类完全一致。
参考文献：
[1]. 陕西省常见四种实蝇的分子鉴定[D]. 张红梅. 西北农林科技大学. 2004
[2]. 陕西省常见四种实蝇的RAPD研究初报(双翅目:实蝇科)[J]. 张红梅, 潘亚勤, 魏迪功, 仵均祥. 昆虫分类学报. 2004