苏州大学附属儿童医院 检验科 215000
【摘 要】目的：探讨耐碳青霉烯类肠杆菌（CRE）的耐药机制。方法：选取2017年3月-2019年3月从我院住院患儿体内临床分离到的20例GRECRE作为研究对象，使用布鲁克快速生物质谱监测系统对其进行细菌鉴定，并应用VITEK-2全自动微生物分析系统对其进行药敏检测，分析这20例CRE的耐药情况应用聚合酶链反应（PCR）对其进行相关耐药基因检测。结果：220例GRECRE细菌类型以肺炎克雷伯菌（10株，50%）和大肠埃希菌（6株，30%）为主；标本来源以痰液最为多见（10例，50%）。20例CRE对临床多种抗菌药物大多存在耐药性，以亚胺培南、美罗培南和氨苄西林的耐药性为最高，耐药率均为100%；其blaKPC和blaIMP的检出率最高，分别为80.00%和10.00%。结论：我院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌抗菌机制主要是产碳青霉烯酶存在严重的多重耐药现象，临床应加强对CRE产碳青霉烯酶的监控，并以KPC和IMP型基因为主，故临床因根据其患者的药敏试验结果选择适宜的抗菌药物进行治疗。
【关键词】碳青霉烯酶；肠杆菌科细菌；聚合酶链反应（PCR）；耐药性；抗菌药物
肠杆菌科细菌是一种常见的临床致病菌，主要包括肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌等，会引起血液系统、呼吸系统、循环系统、泌尿系统等部位的感染[1]。目前，碳青霉烯酶类抗菌药物被认为是临床治疗多重耐药革兰阴性杆菌最为有效的药物[2]。然而，随着临床各类抗菌药物的大量使用，肠杆菌科细菌的耐药性也随之不断增强，给临床治疗感染性疾病带来了严峻的挑战[3]。因此，本研究选取2017年3月-2019年3月我院临床分离到的20例耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌作为研究对象，来探讨GRECRE的耐药机制，从而为临床用药提供科学依据，现将研究结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
选取2017年3月-2019年3月从我院住院患儿体内临床分离到的20例耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌作为研究对象。其中男性14例，女性6例，年龄范围在2-10岁，平均年龄（6.4±2.7）岁。剔除同一患儿在其不同部位分离出的同一中菌株，共计分离到大肠埃希菌6例，肺炎克雷伯菌8例，阴沟肠杆菌4例，产气肠杆菌2例；样本来源部位：血液5例；痰液6例；伤口分泌液8例；尿液1例。且本研究经本院医学伦理委员会批准。
1.2 检测方法
细菌鉴定：应用沃特生物科技有限公司生产的布鲁克快速生物质谱监测系统进行细菌鉴定，操作步骤严格按照说明书进行。
药敏实验：仪器选择法国生物梅里埃公司生产的VITEK-2全自动微生物分析系统，详细操作必须严格按照说明书的执行步骤来操作，结果按照CLSI标准进行判断。
耐药基因检测：应用聚合酶链反应（PCR）进行相关耐药基因检测，使用煮沸法提取肠杆菌科细菌的总DNA，应用PCR法检测β-内酰胺酶基因（包括A、B、D三类）引物参照相关文献[5]，在扩增引物后经10g/L的琼脂糖凝胶电泳，并用其成像系统进行数据观察。
1.3 统计学方法
采用SPSS17.0进行数据分析，药敏实验结果和耐药基因检测结果计数资料均以%表示，采用2检验；以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 CRE分布特点
本研究的20例CRE中，剔除同一患儿在其不同部位分离出的同一中菌株，共计分离到大肠埃希菌6例，肺炎克雷伯菌10例，阴沟肠杆菌2例，产气肠杆菌2例；样本来源部位：血液6例；痰液10例；伤口分泌液1例；尿液3例。
2.12 患者药敏实验结果
如表2-1所示，20例GRECRE对临床多种抗菌药物大多存在耐药性，其中以亚胺培南、美罗培南和氨苄西林的耐药性为最高，均P<0.05。
表2-1 患者药敏实验结果 [n（%）]
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2.2 患者耐药基因的检测
在20例GRE中，检测出blaKPC阳性16例，检出率为80.00%；blaIMP阳性2例，检出率为10.00%；blaOXA-51阳性1例，检出率为5.00%；blaOXA-23阳性1例，检出率为5.00%；其余结果均为阴性，P<0.05。
3 讨论
据CHINET近年来对全球耐药数据检测结果[4]显示，肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率在2013年已经上升到5%，并有逐年递增趋势。另有研究[5]显示，重症监护室内因碳青霉烯类耐药菌感染的致死率要明显高出普通敏感菌感染者的2-3倍。因此，对GRECRE的耐药检测及科学用药显得尤为重要。
本研究结果示：20例CRE细菌类型以肺炎克雷伯菌为主，其次为大肠埃希菌，这与冯旭慧[5]等人的研究结果相似。20例GRECRE对临床多种抗菌药物大多存在耐药性，以亚胺培南、美罗培南和氨苄西林的耐药性为最高，耐药率均为100%。；而但这20例CRE对庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明素几乎不耐药，这给临床治疗该类患者提供了新的选择。
PCR检测示：20株菌株中，对blaKPC和blaIMP的检出率最高，分别为80.00%和10.00%，这说明了碳青霉烯类肠杆菌科细菌抗菌基因主要以blaKPC和blaIMP为主。
综上所述，我院CRE的耐药基因主要以blaKPC和blaIMP为主细菌类型主要以肺炎克雷伯菌为主，且标本多来源于患儿痰液。该类细菌对临床大多数抗菌药物存在耐药性，故临床对KPC酶的准确监控对控制的发展提供科学依据，应对CRE感染患者的用药进行临床合理指导，这对预防和控制CRE传播具有重要的临床意义。
参考文献：
[1]李勇，黄露萍，晏坤，等. 某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的分布及耐药性分析[J]. 临床输血与检验，2018，20（1）：57-60.
[2]李虹，黄家遂，王洁，等. 碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的耐药机制研究及其在医院感染控制中的应用[J]. 检验医学与临床，2017，14（23）：3505.
[3]周发为. 耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制及同源性分析[J]. 吉林医学，2015，36（13）：2824.
[4]李维特，张捷. 耐碳青霉烯肠杆菌科细菌耐药机制的研究进展[J]. 中华医院感染学杂志，2017，27（3）：714-716.
[5]冯旭慧，袁春儿，陈捷. 耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的临床分布及耐药性[J]. 中国微生态学杂志，2016，28（03）：312-315.王坚镪，吴琼，庄亦晖，等. 耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药机制探讨[J]. 检验医学，2017，32（12）：1080-1084.
论文作者:李伟,季健通讯作者
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2019年第12期
论文发表时间:2020/1/3
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