王丽娟[1]2003年在《绵羊玻璃化冷冻胚胎直接移植试验研究》文中认为本研究应用EFS40玻璃化液对6.5～7日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻及解冻后直接移植试验。所用胚胎都是经FSH超排处理绵羊获得的。胚胎经形态鉴定后，用胚胎存放液(含20％FCS的PBS液)清洗。冷冻前，胚胎在室温(18～25℃)下置于含10％乙二醇的PBS液中平衡10分钟，移入玻璃化液EFS40中装管并平衡30秒钟，液氮气中熏蒸2分钟后投入液氮中保存，解冻时在室温(18～25℃)空气浴10秒钟后，32℃水浴20秒钟解冻。 试验1：胚胎解冻后以0.5M蔗糖液一步(6分钟)除去保护剂或用胚胎存放液一步直接除去保护剂，然后胚胎移入胚胎存放液中洗3次，将形态正常的胚胎手术移植至同期发情的受体绵羊子宫内；试验2：玻璃化冷冻胚胎解冻后在0.25ml聚乙烯塑料细管内脱除防冻剂直接装管移植，以常规冷冻解冻为对照组。试验结果：试验1共冷冻道赛特与东北半细毛羊杂交青年羊胚胎32枚，解冻回收27枚，其中21枚形态正常，解冻后透明带完整率为100％(27／27)；形态完整率为77.78％(21／27)，移植后的妊娠率为47.37％(9／19)，胚胎存活率为42.86％(9／21)，其中桑椹胚、囊胚的冻后形态完整率分别为81.82％(9／11)、75.00％(12／16)(P＞0.05)，差异不显着；桑椹胚和囊胚移植后的妊娠率分别为37.50％(3／8)、54.55％(6／11)，胚胎存活率分别为33.33％(3／9)、50.00％(6／12)，差异均不显着(P＞0.05)。13枚冷冻胚胎解冻后用0.5M蔗糖脱防冻剂，其中10枚形态恢复正常(76.92％)，与直接用胚胎存放液脱除防冻剂的结果(78.57％，11／14)无差异(P＞0.05)。将两种方法解冻的形态正常的胚胎移植，移植后的妊娠率分别为44.44％(4／9)、50.00％(5／10)、胚胎存活率分别为40.00％(4／10)、45.45％(5／11)(P＞0.05)差异不显着；试验2将10枚解冻后的胚胎细管内脱防冻剂后，直接装管移植给8只受体(其中2只受体移植双胚)，妊娠率为50.00％(4／8)，胚胎成活率为40.00％(4／10)，(其中受体1只在妊娠后第2个月流产，最后有3只受体产3只羔羊)与同期常规冷冻解冻组相比无显着差异(P＞0.05)。 本研究结果表明：绵羊胚胎应用EFS40进行玻璃化冷冻，解冻后用胚胎存放液细管内脱除防冻剂后直接移植获得较高的的妊娠率和胚胎存活率。该方法与常规方法比较简便、省时、可普及，特别是能降低绵羊胚胎移植的成本，加速绵羊品种改良。
王丽娟, 李武[2]2006年在《绵羊玻璃化冷冻胚胎直接移植试验研究》文中指出应用EFS40玻璃化液对6.5～7日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻及解冻后直接移植试验。结果:桑椹胚、囊胚冷冻解冻后移植的妊娠率分别为37.50%(3/8)和54.55%(6/11),胚胎存活率分别为33.33%(3/9)和50.00%(6/12),差异均不显着(P>0.05);胚胎解冻后用0.5 mol/L蔗糖脱防冻剂与直接用胚胎存放液脱除防冻剂的妊娠率分别为44.44%(4/9)和50.00%(5/10,)胚胎存活率分别为40.00%(4/10)、45.45%(5/11)差异不显着(P>0.05);10枚解冻后的胚胎细管内脱防冻剂后,直接装管移植给8只受体,妊娠率为50.00%(4/8),胚胎成活率为40.00%(4/10),与同期常规冷冻解冻组相比无显着差异(P>0.05)。
吐尔洪·阿木提, 阿布力孜·吾斯曼, 宋玉坤, 张效生, 王旭光[3]2016年在《黑头萨福克绵羊胚胎玻璃化快速冻胚移植效果分析》文中认为本试验应用玻璃化胚胎冷冻方法进行黑头萨福克绵羊胚胎冷冻和移植,比较了受体羊卵巢上黄体数量、受体羊的体况、移植胚胎的数量对受体受胎率的影响。受体羊卵巢上有一个黄体的移植受胎率42.7%与有2~3个黄体受体羊移植受胎率44.4%无显着差异;受体的体况对受胎率有显着影响,中上等(含中等)体况水平的受体的受胎率47.2%显着高于中下等的受体的受胎率43.0%(P<0.05);使用玻璃化胚胎冷冻法的冷冻解冻胚胎移植受胎率54.2%显着高于常规胚胎冷冻法的冻胚移植受胎率44.0%(P<0.05);移植1枚桑葚胚(1M)的受胎率47.5%略高于移植1枚囊胚(1B)的受胎率44.3%(P>0.05)。因此,受体羊黄体数、冷冻桑葚胚和囊胚对胚胎移植受胎率没有显着影响,而受体中上等(含中等)体况水平和玻璃化胚胎冷冻法冷冻解冻胚胎移植受胎率显着提高。
张立[4]2005年在《牛羊胚胎工程技术产业化研究与应用》文中指出本试验主要对牛羊胚胎工程技术产业化的关键环节进行了研究。针对影响牛羊同期发情、超数排卵、胚胎冷冻、胚胎移植及性别鉴定与控制等主要因素进行试验研究,以期加快我国牛羊良种化进程和胚胎工程技术产业化发展。试验研究结果表明:1. 应用CIDR 加氯前列烯醇法比两次氯前列烯醇法对受体牛同期发情效果好,但差异不显着(p>0.05)。在牛的同期发情处理中,准备的受体牛至少应有3 个月以上的适应期;哺乳期牛同期发情率低,产犊超过3 个月以上才能得到较理想的同期发情效果;受体牛右侧黄体68.64 %,显着高于左侧黄体31.36 % (p<0.01)。2. 胚胎移植的供受体牛羊需加强饲养管理,提高供受体牛羊自身的营养水平,饲养管理和营养水平是胚胎移植成功的关键。西门塔尔、利木赞、海福特、安格斯肉牛的超排效果好于夏洛来牛;育成牛平均可用胚数和胚胎可用率比成年牛高,但差异不显着(p>0.05);在发情周期第11、12 d 起针超排效果较好,第9、10 d 效果最好,可用胚比例高;超排后输精1~4 次胚胎可用率之间差异不显着(p>0.05);用国产FSH 超排荷斯坦育成牛最佳总剂量,14~15 月龄为8.0 mg,16~17 月龄为8.8 mg,18~19 月龄为10.4 mg。3. 本研究采用两次重复超排间隔时间39 d 超排方案,既大大缩短重复超排间隔时间,又达到理想重复超排效果。第一次和第二次重复超排间隔27d,平均可用胚数为6.22±2.45枚和4.25±3.25枚,两者之间差异显着(p<0.05),发情利用率为91.42 %和75.00 %,两者之间差异极显着(p<0.01);第一次和第二次重复超排间隔39 d,平均可用胚数为5.44±2.78 枚和5.17±2.65 枚,介于两者之间差异不显着(p>0.05),发情利用率为95.03%和91.57%,两者之间差异不显着(p>0.05);第一次和第二次重复超排间隔为47 d 或67 d,平均可用胚数和发情利用率两者之间均无显着差异(p>0.05)。在内蒙古典型放牧条件下,海福特肉牛最佳超数排卵时间为5~6 月份;安格斯肉牛最佳超数排卵时间为8~9 月份。用加拿大进口与中科院国产FSH 对青年荷斯坦母牛进行超排,进口药超排平均可用胚数为4.60±3.52 枚,国产药平均为5.34±2.68 枚,两者之间差异不显着(p>0.05)。4. 在牛胚胎移植中,鲜胚移植显着高于冻胚移植妊娠率(p<0.05),分别为61.74 %和45.32 %;一步法冷冻的胚胎与常规法冷冻的胚胎,解冻移植后妊娠率差异不显着(p>0.05);6 d 的囊胚移植于6 d 的受体,妊娠率高达90.91%,显着高于6 d 的桑椹胚和7 d 的囊胚妊娠率(p<0.05),与7 d 的桑椹胚妊娠率相比差异极显着(p<0.01);我国不同地区最佳胚胎移植季节不同,北方地区以夏、秋季节为好,夏季最佳;华中地区以春、秋季节为好,秋季最佳;南方地区以春、冬季节为好,冬季最佳。5. 对不同地区绵羊超排处理,东北地区以10~12 月初效果较好,西北地区最佳超
吴细波[5]2007年在《应用超数排卵与胚胎冷冻技术保护马头山羊品种的研究》文中认为本研究的目的是通过马头山羊的超数排卵、超排胚胎的冷冻、冷冻胚胎的移植等技术的有机结合，实现马头山羊的胚胎冷冻保种。本试验围绕这个目的，对马头山羊的超数排卵、超排胚胎的冷冻、冷冻胚胎的移植分别进行了研究。本试验首先研究了处理方法、配种方法、上胎产羔数、膘情、重复超排、基因多态性等因素对马头山羊超数排卵效果的影响，旨在充分发掘优秀马头山羊母畜的繁殖潜力。试验结果表明：(1)在CIDR+FSH+PG超排方法的基础上，同时运用LHRH-A_3与P_4进行超排可以显着提高只均获胚数(15.63vs12.75)、只均可用胚数(14.75vs11.25)和可用胚率(94.40％vs88.24％)(P＜0.05)，得到较好的超排效果；(2)超排供体羊配种时，每隔8h本交一次(公母比例1：1)或每隔8h人工授精一次均可得到较好的超排效果，其只均获胚数、只均可用胚胎数、可用胚率均显着高于每隔8h本交一次(公母比例1：2)或每隔12h本交一次(公母比例1：1)(P＜0.05)；(3)上胎产羔4只的供体羊只均获胚数(16.83vs14.17)和只均可用胚数(15.83vs13.33)显着高于上胎产羔2只以下的供体羊(P＜0.05)；(4)中等膘情的供体羊超排效果较好，其只均获胚数、只均可用胚数和可用胚率均显着高于上等膘情和下等膘情的供体羊(P＜0.05)；(5)对供体羊进行重复超排时，其只均获胚数(15.17vs15.67)、只均可用胚胎数(14.17vs14.83)和可用胚率(93.41％vs94.68％)等指标均略低于首次超排，但统计差异不显着(P＞0.05)；(6)INHA基因不同基因型对供体羊只均获胚数和只均可用胚数的影响一致，均表现为GG＞AG＞AA，但是统计差异不显着(P＞0.05)。本试验随后研究了冷冻方法、解冻时水浴温度以及解冻方法等对马头山羊胚胎冷冻后发育效果的影响，旨在探索出适合马头山羊胚胎的稳定可靠的冷冻保存方法，提高其冷冻保存效率。试验结果表明：(1)采用细管玻璃化冷冻和OPS玻璃化冷冻对胚胎进行冷冻，比较两种方法的效果，发现解冻后胚胎形态正常率(84.09％vs81.08％)、囊胚发育率(63.51％vs60.00％)以细管玻璃化冷冻效果略好，但在方法间统计差异不显着(P＞0.05)；(2)胚胎经细管玻璃化冷冻后，分别采用25℃和37℃水浴进行解冻，发现37℃水浴解冻后的胚胎发育效果略好于25℃水浴解冻，但解冻后胚胎的形态正常率(83.78％vs81.48％)和囊胚发育率(64.52％vs59.09％)在方法间统计差异均不显着(P＞0.05)；(3)胚胎经细管玻璃化冷冻后，分别采用二步法和一步法进行解冻，解冻后胚胎的形态正常率(87.50％vs83.78％)和囊胚发育率(66.67％vs64.52％)在方法间统计差异均不显着(P＞0.05)。本试验最后对受体的同期发情以及马头山羊冻胚移植进行了研究，旨在进一步检验其胚胎冷冻的效果及建立胚胎冷冻保种库进行马头山羊保种的可行性。试验结果表明：(1)受体羊用CIDR进行处理时同期发情率为85.71％，受体羊用孕酮海绵栓进行处理时同期发情率为78.57％，两者同期发情率在方法间统计差异不显着(P＞0.05)；(2)马头山羊超排获得的胚胎经细管玻璃化冷冻-解冻后进行不同类型受体羊移植，经产受体羊与育成受体羊的移植妊娠率分别为46.67％和37.50％，经产受体羊移植妊娠率比育成受体羊高，但统计差异不显着(P＞0.05)。
钱晓飞[6]2005年在《牛卵母细胞玻璃化冷冻保存及胚胎移植的研究》文中研究表明本文就牛卵母细胞玻璃化冷冻保存以及冷冻胚胎移植黄牛进行了研究。 一、牛卵母细胞玻璃化冷冻研究 以二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(EG)作为冷冻保护剂,分别用0.25mL细管和OPS冷冻体外成熟的牛卵母细胞。解冻后进行孤雌激活。试验1:以DMSO+EG作为冷冻液,分别用0.25mL细管和OPS冷冻培养22h的卵母细胞,解冻后继续培养2h,进行孤雌激活。解冻后其形态完整率分别为90.6%和83.2%,差异不显着(P>0.05),卵裂率分别为32.3%和25.2%,差异也不显着(P>0.05);试验2:将成熟培养22h的卵母细胞分别在4%EG中平衡15min,或在10%EG中平衡10min后,移入35%EG+5%PVP中30s,用OPS进行冷冻。解冻后继续培养2h,进行孤雌激活。解冻后其形态完整率分别为79.4%和62.2%,差异显着(P<0.05),卵裂率分别为26.5%和10.5%,差异显着(P<0.05):试验3:分别用DMSO+EG和35%EG作为冷冻液,用OPS冷冻成熟培养22h的卵母细胞,解冻后继续培养2h,进行孤雌激活。解冻后其形态完整率分别为83.2%和79.4%,差异不显着(P>0.05),卵裂率分别为25.2%和26.55%,差异不显着(P>0.05)。以DMSO+EG或35%EG+5%PVP作为冷冻液,以0.25mL细管和OPS冷冻牛卵母细胞均能取得理想的效果。在4%EG中预平衡的卵母细胞比在10%EG中预处理的冷冻效果好。 二、进口冷冻奶牛胚胎移植黄牛试验 本试验以两种不同的同期发情方法,利用黄牛作为胚胎移植受体,移植冷冻进口奶牛IVF胚胎.试验1:一次PG法。受体牛注射一次氯前列醇钠(0.6mg);试验2:GnRH-PG法。受体牛先注射0.6mg氯前列醇钠,9天后第一次注射LHRH-A~375μg,注射之日为第0天,第7天注射0.6mg氯前列醇钠,48h后第二次注射LHRH-A~375μg。同期发情的黄牛经直肠触诊黄体合格后,移植进口冷冻奶牛IVF胚胎。第1组和第2组的同期发情率分别为60.0%(9/15)和63.2%(12/19),可移植率分别为26.7%(4/15)和36.8%(7/19),两组差异均不显着(P>0.05)。妊娠率分别为0和28.6%,差异显着(P<0.05)。结果表明,GnRH-PG处理效果较好,可以在生产中推广应用。
韩伟[7]2012年在《冷冻液中添加阿拉伯半乳聚糖或聚蔗糖对牛取样胚胎冷冻效果的影响》文中指出自PCR胚胎性别鉴定技术应用以来,显着提高了奶牛场母犊出生率,但该技术需对胚胎切割取样,因而对胚胎造成一定损伤,使其对冷冻的耐受性降低。本实验主要以取样胚胎为对象,通过向常规冷冻液中添加不同浓度的阿拉伯半乳聚糖(arabinogalactan)和聚蔗糖(Ficoll),筛选出适于透明带受损和细胞数量减少的胚胎冷冻液。本研究通过试验一:取样冷冻胚胎二次冷冻-解冻-观察试验、试验二:取样冷冻胚胎二次冷冻-解冻-培养试验、试验叁:取样胚胎鲜胚冷冻-解冻-培养试验和试验四:取样胚胎鲜胚冷冻-解冻-移植试验,从阿拉伯半乳聚糖系列冷冻液和聚蔗糖系列冷冻液中各筛选出一种效果较好的冷冻液(0.03EAS1和0.6EFS1),之后采用这两种冷冻液和对照组EG FREEZE(进口成品乙二醇冷冻液)对体外生产牛胚胎的取样胚和完整胚进行冷冻试验,比较冷冻效果。结果:试验一,通过将各种冷冻液的胚胎回收率、0.5h形态完整率、1h形态完整率、1.5h形态完整率同对照组进行比较,在阿拉伯半乳聚糖系列冷冻液中,筛选出六种冷冻效果较优秀的冷冻液:0.005EAS1、0.01EAS1、0.02EAS1、0.03EAS1、0.04EAS1、0.05EAS1,四项指标同EG FREEZE比较的结果为:96.67%、96.67%、93.33%、93.33%、93.33%、96.67%vs90.00%;72.41%、65.52%、57.14%、85.71%、75.00%、65.52%vs61.62%;58.62%、55.17%、42.86%、78.57%、71.43%、48.28%vs51.52%;51.72%、41.38%、39.29%、60.71%、67.86%、37.93%vs39.39%。在聚蔗糖系列冷冻液中,筛选出七种冷冻效果较优秀的冷冻液:0.4EFS、0.5EFS、0.6EFS、0.1EFS1、0.2EFS1、0.5EFS1、0.6EFS1,四项指标同EG FREEZE比较的结果为:90.00%、96.77%、90.63%、100.00%、90.00%、80.65%、100.00%vs90.00%;77.78%、56.67%、65.52%、70.00%、88.89%、64.00%、76.67% vs61.62%;70.37%、53.33%、55.17%、56.67%、66.67%、52.00%、60.00%vs51.52%;44.44%、46.67%、41.38%、40.00%、51.85%、40.00%、60.00%vs39.39%。试验二,通过将各种冷冻液的胚胎回收率、培养24h发育率、培养48h发育率同对照组进行比较,在阿拉伯半乳聚糖系列冷冻液中进一步筛选出两种冷冻液:0.03EAS1和0.04EAS1,叁项指标同EG FREEZE比较的结果为:100.00%、70.00%vs75.00%;20.00%、42.86%vs13.33%;30.00%、42.86%vs13.33%。在聚蔗糖系列冷冻液中也进一步筛选出两种冷冻液:0.5EFS和0.6EFS1,叁项指标同EG FREEZE比较的结果为:100.00%、36.36%vs75.00%;35.00%、37.50%vs13.33%;40.00%、37.50%vs13.33%。试验叁,通过将各种冷冻液的胚胎回收率、培养24h发育率、培养48h发育率同对照组进行比较,得出结果,阿拉伯半乳聚糖系列冷冻液中,0.03EAS1(86.05%vs93.62%、70.27%vs15.91%、81.08%vs22.73%)冷冻效果最好,聚蔗糖系列冷冻液中,0.6EFS1(88.10%vs93.62%、64.86%vs15.91%、70.27%vs22.73%)冷冻效果最好。试验四移植结果同上述相符。体外受精胚胎冷冻-解冻培养试验,通过比较各种冷冻液的胚胎回收率、4h形态完整率、培养24h发育率,得出结果,对取样胚,0.03EAS1(90.00%、55.56%、11.11%)冷冻效果最好,但是对完整胚,EG FREEZE(100.00%、55.56%、22.22%)冷冻效果最好。结论:冷冻液中添加适量阿拉伯半乳聚糖或聚蔗糖,对于取样胚胎,冷冻效果较好,且阿拉伯半乳聚糖优于聚蔗糖;对于完整胚,EG FREEZE冷冻效果较好。
蔡晨宇, 苏广华[8]2017年在《一种小尾寒羊胚胎玻璃化方法在胚胎移植中的应用》文中研究说明实验目的:在小尾寒羊的畜牧业良种繁育中,探索液氮气相存储技术应用于胚胎玻璃化冷冻的可行性。实验方法:采用小尾寒羊母羊作为胚胎的供体,利用超数排卵技术和体外输精之后,并且胚胎在供体羊体内发育的7天之后,将胚胎冲出。之后,利用新的玻璃化冷冻技术对所采集的胚胎进行冷冻处理,冷冻处理24小时之后复苏,之后移植同期发情蒙古母羊受体体内,并且以鲜胚移植同批发情母羊受体作为对照组。实验结果:玻璃化胚胎移植的妊娠率与胚胎的发育的不同阶段密切相关(fisher精确检验:p=0.018),CM(紧缩桑葚胚)的怀孕率显着高于BL(囊胚期)。实验结论:在气相液氮存储条件下,羊胚胎玻璃化冷冻采用紧缩桑葚期胚胎,能提高妊娠率。
李海龙[9]2004年在《小鼠胚胎的玻璃化冷冻技术研究》文中研究指明本试验探讨了冷冻保护剂基础液、冷冻载体的选择及不同玻璃化冷冻方法对小鼠3.5d～4d桑椹胚和囊胚的冷冻保存效果。（1）玻璃化液分别使用TCM-199和D-PBS为基础液，在基础液中添加10% EG+10% DMSO为玻璃化1液（VS1），添加20% EG+20%DMSO为玻璃化2液（VS2），冷冻小鼠桑椹胚和解冻后获得的发育率分别为70.00%和72.34%，二者差异不显着(p > 0.05)；（2）使用玻璃管和塑料管作为胚胎的承载材料进行玻璃化冷冻效果比较，玻璃材质的OPS管玻璃化冷冻桑椹胚，解冻后形态正常率和发育率分别为95.23%和87.57%，而使用塑料OPS管玻璃化冷冻桑椹胚解冻后形态正常率和发育率分别为89.66%和86.40%；玻璃材质的OPS管玻璃化冷冻囊胚，解冻后形态正常率和发育率分别为92.00%和85.83%，而使用塑料OPS管玻璃化冷冻桑椹胚解冻后形态正常率和发育率分别为86.84%和77.14%，使用玻璃OPS管和使用塑料OPS管在胚胎解冻后形态正常率和发育率上差异均不显着(p > 0.05)；（3）采用程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻法进行对比，结果使用玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对小鼠胚胎进行冷冻保存都可以取得很好的结果。程序化冷冻在形态正常率桑椹胚97.78%，高于玻璃化冷冻94.64%，囊胚为95.12%，低于玻璃化冷冻100%。在发育率方面，程序化冷冻桑椹胚解冻后发育率为95.45%，玻璃化冷冻法为88.94%，差异显着(p < 0.05)；程序化冷冻囊胚解冻后发育率为86.16%，玻璃化法为83.33%，差异不显着(p > 0.05)；(4) 使用OPS细管进行玻璃化冷冻桑椹胚，解冻后形态正常率和发育率分别为97.01%和86.91%，0.25ml细管冷冻桑椹胚，解冻后胚胎形态正常率和发育率分别为91.84%和75.51%，差异不显着(p > 0.05)；使用OPS细管进行玻璃化冷冻囊胚，解冻后形态正常率和发育率为88.46%和83.51%，0.25ml细管冷冻囊胚，解冻后胚胎形态正常率和发育率分别为75.47%和68.89%，差异不显着(p > 0.05)。得出结论，使用玻璃化冷冻法也可以获得与程序化冷冻相同的良好结果。
王珂[10]2008年在《奶牛卵母细胞玻璃化冷冻方法及胚胎程序化冷冻研究》文中研究表明卵母细胞和胚胎冷冻技术在家畜遗传资源保存方面具有广泛和潜在的应用价值。本试验用OPS管或GMP管对牛卵母细胞玻璃化冷冻和用麦管对胚胎程序化冷冻进行研究。在冷冻时,对基础液、不同发育阶段的牛卵母细胞、保护剂、冷冻载体、解冻步骤进行比较试验。同时研究叁步平衡法和一步细管法冷冻牛胚胎和移植受胎率效果。1.基础液中添加牛血清白蛋白或胎牛血清对GV期牛卵母细胞的冷冻效果。冻后对照组和两个试验组形态正常率分别为45%,65.1%,65.6%,成熟率分别为28.%,44.4%,44.2%,卵裂率分别为11.7%,23.8%,21.3%,试验组与对照组差异显着,但添加BAS和FCS两组之间差异不显着。2.不同发育阶段的牛卵母细胞玻璃化冷冻效果。冷冻GV期和MⅡ期,结果形态正常率分别为71.3%和68.8%,差异不显着(p>0.05);成熟率分别为45%和47.6%,差异显着(p<0.05);卵裂率分别为23.3%和31.1%,差异显着(p<0.05)。3.不同颗粒细胞层数的牛卵母细胞玻璃化冷冻效果。裸卵,含2～4层颗粒细胞,颗粒细胞完整的卵母细胞冻后形态正常率分别为21.7%,60.3%,60.7%,成熟率分别为6.7%,46%, 44.2%,卵裂率分别为1.6%,30.2%,24.6%。结果含2～4层颗粒细胞的卵母细胞冷冻效果最好。4.不同玻璃化冷冻溶液对OPS法冷冻GV期牛卵母细胞体外发育的影响。在EFS30和EFS40液中,冻后形态正常率分别为67.2%和66.7%,差异不显着(p>0.05);成熟率分别为36.2%和37.6%,差异不显着(p>0.05)。在EDFS30和EDFS40中,冻后形态正常率分别为73.1%和75.4%,差异不显着(p>0.05);成熟率分别为42.9%和43.7%,差异不显着(p>0.05)。而在EFS30液和EDFS30液中,冻后形态正常率分别为67.2%和73.1%,差异显着(p<0.05);成熟率分别为36.2%和42.9%,差异显着(p<0.05),EFS40与EDFS40在影响成熟率上差异也显着。5.不同玻璃化冷冻溶液对GMP法冷冻GV期牛卵母细胞体外发育的影响,在EFS30和EFS40液中,冻后形态正常率分别为63.5%和63.9%,差异不显着(p>0.05);成熟率分别为33.7%和36.1%,差异不显着(p>0.05);在EDFS30液和EDFS40液中,冻后形态正常率分别为78.6%和75%,差异不显着(p>0.05);成熟率分别为43.8%和47.6%,差异不显着(p>0.05)。EDFS30和EDFS40均是牛GV期卵母细胞良好的玻璃化冷冷冻液。6.采用OPS法和GMP法冷冻牛GV期卵母细胞,在EFS40中冻后形态正常率分别为68.4%和74.1%,差异不显着(p>0.05);成熟率分别为47.3%和48.4%,差异不显着(p>0.05);在EDFS40液中冷冻后形态正常率分别为74.6%和75.4%,差异不显着(p>0.05);成熟率分别为42.4%和49.1%,差异不显着(p>0.05);OPS管和GMP管都是比较理想的冷冻载体。7.不同解冻程序对玻璃化冷冻的牛卵母细胞发育影响。采用EFS30玻璃化冷冻液,OPS法冷冻GV期牛卵细胞,通过一步法,叁步法,五步法解冻,形态正常率分别为32.3%,51.7%,49.1%,成熟率分别为25.4%,43.4%,36.7%,卵裂率分别为18.7%,30%,29.8%,叁步解冻法效果较好。8.程序化冷冻牛胚胎移植效果。采用叁步平衡法和一步细管法,结果显示,用10%甘油作抗冻剂,叁步平衡冷冻,叁步解冻的胚胎移植后受胎率为38.3%和用15%乙二醇作抗冻剂一步细管法冷冻胚胎移植后受胎率为36.9%,两者差异不显着(p>0.05)。
参考文献：
[1]. 绵羊玻璃化冷冻胚胎直接移植试验研究[D]. 王丽娟. 东北农业大学. 2003
[2]. 绵羊玻璃化冷冻胚胎直接移植试验研究[J]. 王丽娟, 李武. 黑龙江动物繁殖. 2006
[3]. 黑头萨福克绵羊胚胎玻璃化快速冻胚移植效果分析[J]. 吐尔洪·阿木提, 阿布力孜·吾斯曼, 宋玉坤, 张效生, 王旭光. 中国畜牧兽医文摘. 2016
[4]. 牛羊胚胎工程技术产业化研究与应用[D]. 张立. 西北农林科技大学. 2005
[5]. 应用超数排卵与胚胎冷冻技术保护马头山羊品种的研究[D]. 吴细波. 华中农业大学. 2007
[6]. 牛卵母细胞玻璃化冷冻保存及胚胎移植的研究[D]. 钱晓飞. 南京农业大学. 2005
[7]. 冷冻液中添加阿拉伯半乳聚糖或聚蔗糖对牛取样胚胎冷冻效果的影响[D]. 韩伟. 河北农业大学. 2012
[8]. 一种小尾寒羊胚胎玻璃化方法在胚胎移植中的应用[J]. 蔡晨宇, 苏广华. 科技经济市场. 2017
[9]. 小鼠胚胎的玻璃化冷冻技术研究[D]. 李海龙. 新疆农业大学. 2004
[10]. 奶牛卵母细胞玻璃化冷冻方法及胚胎程序化冷冻研究[D]. 王珂. 甘肃农业大学. 2008