【摘要】目的：评价CRP非配套试剂代替配套试剂测定血清CRP浓度的可行性。方法：用CRP非配套试剂和配套试剂在日立7180全自动生化分析仪检测待测样本CRP浓度, 通过评估非配套试剂检测CRP的批内重复性、批间检测变异、验证准确度 、线性范围的评价、非配套试剂实验的抗干扰性和验证正常参考范围是否适用为分析性能验证的标准。结果：非配套CRP试剂的精密度、准确度、线性范围、抗干扰性 和正常参考范围均符合要求,与配套试剂的测定结果比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：非配套CRP试剂能代替配套试剂,适用全自动生化分析仪的检测。
【关键词】非配套试剂；精密度；准确度；线性范围；抗干扰性;参考范围
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）36-0311-02
引言
C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）是急性时相反应蛋白中变化最为显著和迅速的一种（简称CRP），在感染性疾病、动脉粥样硬化和肿瘤等疾病中均有表达。国内最早采用半定量的沉淀试验，现在制备优质的抗血清，可以建立高灵敏度、高特异性、重复性好的定量测定方法。根据《医疗机构临床实验室管理办法》和《医学实验室质量和能力的专用要求》，性能验证是临床实验室的基本要求[1]。作者根据《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》这一行业标准和碳酸氢钠稀释液的特点，通过对非配套CRP定量试剂的精密度、准确度、线性范围、抗干扰性和正常参考范围五项分析性能指标进行验证，现报道如下。
1.资料与方法
1.1 标本来源
收集患者无溶血和乳糜血的低、高值两份临床新鲜血清样本及来自健康人的新鲜血清样本50例，样本分析浓度涵盖整个仪器和检测试剂盒的可报告范围。留取血红蛋白（Hb）≤10g/L,胆红素（BiL）≤300mg/L,甘油三酯（TG）≤20mmol/L血清标本各一份。
1.2 仪器与试剂
检测仪器为日立7180全自动生化分析仪。配套试剂和方法由宁波美康生物科技股份有限公司提供的C-反应蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）。非配套CRP定量试剂：（1）试剂1 称取NaHCO3 4.2g，加100g/L NaOH溶液0.4mL，加蒸馏水至100mL（pH8）[4]。（2）试剂2 抗人CRP抗体胶乳颗粒。（3）非配套CRP定量试剂工作液：试剂1：试剂2=5:1。 CRP校准品（批号：160103），高、低值质控液。
1.3 方法
1.3.1非配套CRP定量试剂的操作如下：
主波长：546 辅助波长700
工作液 300μL
置37℃孵育3～5分钟
样本 2μL
混匀，孵育10秒后，读取吸光度A1,2分钟后，读取吸光度A2，ΔA=A2-A1
制作CRP多点校准曲线，样本中CRP值可从校准曲线求得。
1.3.2批内、批间精密度实验 取低、高值两份临床新鲜血清样本，重复检测10次，计算均值、SD、CV%，评估非配套试剂检测CRP的批内重复性。检测高、低两个水平液态人基质血清质控物，1次／d共20d，计算均值、SD、CV%，评估批间检测变异。
1.3.3准确度和线性范围试验 收集日立7180配套CRP定量试剂检测结果在150～200mg/L的高值新鲜血清5份各5ml，混匀。 将低值和高值血清按不同比例混合，配置成：（C）1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64，1:128及1:256的原浓度样本使用配套试剂、非配套试剂分别双份检测．参照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP9-A2提供的方法进行比对[5]，结合批间精密度验证准确度。参照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP6-A进行非配套试剂线性范围的评价[5]。
1.3.4验证正常参考范围 使用非配套试剂检测20份来自健康人的新鲜血清样本。参考NCCLS C28-A2，选取20个参考个体合理的代表实验室选择的健康总体，可接受的标准是：如果20例参考个体中不超过10%的结果观测值在原始报告的参考限之外，参考区间适用。验证正常参考范围是否适用。
1.3.5抗干扰实验 分别选取血红蛋白（Hb）≤10g/L，胆红素（BiL）≤300 umol/L，甘油三酯(TG)≤20 mmol/L实验血清,检测对非配套试剂检测CRP值的干扰性。
1.3.6统计学处理 采用SPSS 22.0（windows）软件包，配对t检验方法，数据用（x-±s）表示，P＜0.005有统计学意义。
2.结果
2.1 精密度 见表1。
3.讨论
由CRP多点定标其标准曲线可以看出，其标准曲线并非一条直线，而为一条拟和曲线[2]。通过非配套试剂的检测定标，与配套试剂的检测定标曲线是一致的，保证了配套试剂及非配套试剂的测试理论与方法的一致性，按照ISO15189要求，临床实验室在使用新试剂之前必须验证其多项重要性能，为临床检查安全、稳定、一致性提供有效保证。性能验证实验需要简洁且可操作性强的实验方案，使用尽可能少的样本数、得到能够代表临床检测真实情况的实验结果。本文以前人报道为先例，研究以CRP非配套试剂代替配套试剂测定血清CRP浓度的可行性，经研究实验证明由碳酸氢钠稀释液组成的CRP非配套试剂在测定血清CRP浓度方面适用于全自动生化分析仪的检测，具有临床参考价值。
【参考文献】
[1]雷继魁.非配套商品定量试剂的分析性能验证[J].检验医学与临床,2014.11.13.1843-02.
[2]王永卿,郑青,钟祥旭.双乳胶免疫比浊法测定CRP的分析性能评价[J].《第七届生命科学联合学术大会论文汇编》,2015.
[3]胡智颖，胡梅，张曼.超敏C反应蛋白检测试剂性能验证[J]. 国际检验医学杂志,2014.17.019.
[4]张琛.微量血测定ASO和CRP[J].临床检验杂志,1998，16,3:161.
[5]周锡铧,邸玉玮,戴耀宗,董晖,黎艳湘,马建宏,临床医学实验室非配套试剂使用性能验证[R].实用医学杂志2012.22.3824-3826.
论文作者:张琛
论文发表刊物:《心理医生》2017年36期
论文发表时间:2018/2/7
标签：试剂论文; 血清论文; 样本论文; 定量论文; 精密度论文; 准确度论文; 性能论文; 《心理医生》2017年36期论文;