【中图分类号】Ｒ５８９．７【文献标识码】Ａ【文章编号】１６７２－３７８３（２０１５）０７－０３９０－０１【摘要】目的ＡＢＣＧ２是新近发现的尿酸盐转运子，具有调节血尿酸水平的作用。本研究采用高分辨率溶解曲线（ＨＲＭ）方法检测痛风患者ＡＢＣＧ２基因ｒｓ２２３１１４２单核苷酸多态性，并分析该多态性与痛风／高尿酸血症的关系。方法选取痛风患者和健康志愿者，提取外周血ＤＮＡ，扩增ＡＢＣＧ２基因ｒｓ２２３１１４２片段，运用高分辨率熔解曲线（ＨＲＭ）分析ｒｓ２２３１１４２的基因型，并用测序法证实。结果痛风组内各基因型和等位基因频率与对照组相比，差别有显著意义（Ｐ ＜０．０５）［分析不同人群的基因型与尿酸浓度后发现，从ＡＡ基因型尿酸浓度明显高于ＡＣ型和ＣＣ型。结论痛风患者ＡＢＣＧ２基因ｒｓ２２３１１４２单核昔酸多态性标志物可以作为潜在的高尿酸血症的分子标志物。
痛风是一种常见的导致关节炎症的疾病，近年来其发病率和流行率均有上升趋势［１，２］尿酸水平升高与肾脏疾病等的发生发展有重要相关性［３．４］。有报道证实遗传因素在痛风与原发性高尿酸血症的发生中起着重要作用［５］。已报道ＡＢＣＧ２基因ｒｓ２２３１１４２单核苷酸多态性与痛风发病密切相关。为此，本研究选取痛风病人２８４例，研究ＡＢＣＧ２基因ｒｓ２２３１１４２多态性与中国汉族痛风／高尿酸血症患者的关系。１．材料与方法１．１研究对象２８４例痛风患者和１４５名年龄匹配，无个人及家族痛风、高尿酸史的健康者，所有痛风病人均为原发性痛风患者，并符合美国风湿病学会的诊断标准。
所有患者和健康对照者均填了知情同意书。１．２ＨＲＭ检测乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）抗凝的真空采血管采集静脉血，并提取ＤＮＡ。采用Ｐｒｉｍｅｒ３软件设计扩增引物。引物的起始预变性为９５℃５ｍｉｎ．ＰＣＲ扩增条件为： ９５℃预变性２ｍｉｎ；然后９５℃３０ｓ变性，５８℃３０ｓ退火，７２℃３０ｓ延伸，共４５个循环；最后７２℃延伸５ｍｉｎ，１０℃停止。扩增完后在Ｒｏｔｏｒ．ＧｅｎｅＱ进行高分辨熔解分析，条件为：９５℃２ｍｉｎ，６０℃２ｍｉｎ预处理后，熔解温度从７５℃到９５℃，每升高０．１℃采集一次数据。获得高分辨熔解曲线图，进行分析。ＨＲＭ分析所使用的为Ｒｏｔｏｒ．ＧｅｎｅＱ１．７软件（Ｑｉａｇｅｎ），在每个测试组中，都相应加入阴性，阳性对照。１．４测序分析随机抽取２０例标本，用上述引物在ＡＢＩ９７００扩增仪上扩增，反应体系除不加ＳＹＴＯ９染料外其余同前，终体积用去离子水补足２０ｕｌ。ＰＣＲ扩增条件同上，产物送上海华大基因科技股份有限公司测序。１．５统计学分析卡方检验分析比较通风组和正常组基因型和等位基因频率分布。Ｈａｒｄｙ— Ｗｅｉｎｂｅｒｉｇ检验确认标本的群体代表性。以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。以比值比极其９５％可信化区间表示相对风险度。２．结果２．１运用ＨＲＭ及测序进行基因分型高分辨率溶解曲线分析各种溶解曲线各代表不同基因型（野生型，杂合型和突变型），ＳＮＰｒｓ２２３１１４２的基因型（ＣＣ，ＣＡ，和ＡＡ）可通过曲线图准确的辨别出。但是，由于样本中野生型和突变都是可出现单峰，有些样本野生型与突变型可产生相似的曲线。为了避免野生型和突变基因型之间的不准确判读，我们使用了先前报道过的方法来进一步区分这种情况的基因型。使用ＨＲＭ的方法检测的基因型与测序检测的基因型１００％相符。２．２ＡＢＣＧ２各位点多态性在痛风和正常人的分布ＡＢＣＧ２基因ｒｓ２２３１１４２，基因型和等位基因频率在痛风患者与正常对照组中分布：见表一。用ｘ２检验各基因型与等位基因频率分布符合Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡定律（０＞０．０５）。在痛风患者组中，ＡＡ基因型分布显然高于健康对照组（３１．４％ｖｓ７．６％，Ｐ＜０．０１），痛风患者组Ａ等位基因显著高于健康对照组（５３．３％ｖｓ３３．４％，Ｐ＜０．０１）。ｒｓ２２３１１４２的小等位基因（ｐ＝３．３５１０．８，ＯＲ２．２８，；９５％ＣＬ１．６９．３．０５］）为增加痛风风险的因子。
３讨论越来越多的研究证实遗传学因素在痛风的发生过程中有重要的影响。ＡＢＣＧ２近年来被认为是一种高通量的尿酸转运蛋白，它的突变引起的功能丧失可导致高尿酸血症及痛风。不同人群不同地区间ｒｓ２２３１１４２基因型和基因频率分布有差异。日本科学家同时还分析了在普通人和痛风患者中ｒｓ２２３１１４２频率。
他们发现ｒｓ２２３１１４２的基因型和等位基因频率在日本人痛风患者，高尿酸血症患者与正常人群有显著性差异。Ｄｅｈｇｈａｎ［５］等的全基因组关联分析研究也证实了在白人和黑人中ＡＢＣＧ２基因的ＳＮＰｒｓ２２３１１４２与高尿酸血症和原发性痛风均密切相关。青岛大学医学院的孟东梅等对中国汉族男性人群ＡＢＣＧ２基因ｒｓ２２３１１４２与原发性痛风相关性进行了研究，发现在中国ｒｓ２２３１１４２多态性与痛风密切相关。我们对ＡＢＣＧ２基因ｒｓ２２３１１４２与痛风的相关性进行系统的研究。
我们选取了２８４例中国汉族原发性痛风患者及１４５例正常对照，研究两组人群中ＡＢＣＧ２基因ｒｓ２２３１１４２基因型分布和等位基因频率。我们发现我们所检测到的ｒｓ２２３１１４２的基因型分布和等位基因频率与青岛大学医学院孟东梅教授的结果存在一定的差异，这可能与中国南方人群与北方人群生活习性，人群分布，地区分布差异有关。
总之，本研究结果揭示了ＡＢＣＧ２基因ｒｓ２２３１１４２单核苷酸多态性与痛风的相关性，可以作为评估原发性痛风风险的遗传标志。本研究成功将ＨＲＭ技术用于ＡＢＣＧ２基因的单核苷酸的筛查。
参考文献［１］Ａｒｒｏｍｄｅｅ，Ｅ．，ｅｔａｌ．，Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙｏｆｇｏｕｔ：ｉｓｔｈｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒｉｓｉｎｇＪＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２００２．２９（１１）：ｐ．２４０３．６．［２］Ｃｈｏｉ，Ｈ．Ｋ．，Ｄ．Ｂ．ＭｏｕｎｔａｎｄＡ．Ｍ．Ｒｅｇｉｎａｔｏ，Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｇｏｕｔ．ＡｎｎＩｎｔｅｒｎＭｅｄ，２００５．１４３（７）：ｐ．４９９．５１６．［３］Ｋａｎｅｌｌｉｓ，Ｊ．ａｎｄＤ．Ｈ．Ｋａｎｇ，Ｕｒｉｃａｃｉｄａｓａｍｅｄｉａｔｏｒｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ， ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ．ＳｅｍｉｎＮｅｐｈｒｏｌ，２００５．２５（１）：ｐ．３９．４２．［４］Ｋａｗａｍｏｔｏ，Ｒ．，ｅｔａｌ．，Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｓｅｒｕｍ ｕｒｉｃａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅａｎｄｃａｒｏｔｉｄａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．ＩｎｔｅｒｎＭｅｄ，２００６．４５（９）：ｐ．６０５．１４．［５］Ｋｉｖｉｔｙ，Ｓ．，ｅｔａｌ．，ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＳｅｒｕｍＵｒｉｃＡｃｉｄａｎｄＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｉｓｅａｓｅｉｎＨｅａｌｔｈｙＡｄｕｌｔｓ．ＡｍＪＣａｒｄｉｏｌ，２０１３．
论文作者:罗新华
论文发表刊物:《健康必读》2015年第7期供稿
论文发表时间:2015/8/17
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