河南平舆中县医院 河南平舆县 46340
【摘要】 目的：总结并归纳流式细胞术检测CD55、CD59对阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）的诊断价值。方法：选取50例阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者作为研究组，50例再生障碍性贫血（AA）患者作为对照A组，50例缺铁性贫血（IDA）患者作为对照B组，50例骨髓增生异常综合征（MDS）患者作为对照C组，50例正常人作为对照D组，用流式细胞术检测研究组与对照组衰变加速因子（CD55）和反应性溶血膜抑制物（CD59）的表达量。结果：研究组患者的CD55与CD59的表达缺失率明显高于对照组，组间差异明显，P＜0.05，具有统计价值。结论：使用流式细胞术检测患者红细胞和中性粒细胞膜CD55和CD59的缺失，能够高特异且敏感地对阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）进行诊断，有效区分出PNH患者与AA、IDA、MDS患者，指标具有可靠性，可以在临床上推广使用。
【关键词】 流式细胞术；CD55；CD59；阵发性睡眠性血红蛋白尿
阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）是一种造血干细胞基因突变产生的溶血性贫血，由获得性细胞膜缺陷引起的疾病，临床表现主要包括血红蛋白尿、溶血性贫血、血栓和感染等症状[1]，发病期对患者进行尿检往往得到尿潜血阳性以及含铁血黄素实验持续阳性的结果[2]。目前已经得知PNH是一种克隆性疾病，患者细胞膜上糖基磷脂酰肌醇（GPI）生成障碍，从而使GPI的连接蛋白CD55和CD59等的表达显著减少[3]，因此使用流式细胞术检测患者CD55、CD59的缺失率可以有效对阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）做出诊断。本文总结并归纳流式细胞术检测CD55、CD59的缺失率对阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）的诊断价值。
1、资料与方法
1.1 一般资料
选取2017年1月至2018年1月期间我院收治50例阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者作为研究组，50例再生障碍性贫血（AA）患者作为对照A组，50例缺铁性贫血（IDA）患者作为对照B组，50例骨髓增生异常综合征（MDS）患者作为对照C组，50例正常人作为对照D组。其中研究组男27例，女23例，年龄平均（43.28±9.31）岁；对照A组男25例，女25例，年龄平均（42.29±10.01）岁；对照B组男27例，女23例，年龄平均（43.71±9.30）岁；对照C组男23例，女27例，年龄平均（41.29±9.67）岁；对照D组为无贫血等疾病的正常人，男25例，女25例，年龄平均（41.79±9.26）岁。两组患者在性别、年龄等基本资料无明显差异，P＞0.05，具有比较价值。
1.2 方法
仪器选择Becton-Dickinson公司生产的BD FACSCaliburTM Flow Cytometer，检测所用试剂盒均从此公司。使用流式细胞术的方法分别对研究组和对照组患者中性粒细胞和红细胞膜表面CD55和CD59的表达量进行检测。
（1）红细胞标记检测：①分为样品管和对照管，样品管中加入CD55和CD59抗体各20ul，对照管中加入FITC和PE同型对照组各5ul；②样品管和对照管中均加入全血样品20ul，混合均匀后，于室温下暗处孵育15~20min；③样品管和对照管中均加入鞘液1ml，充分混匀；④24h内上机检测，利用机带软件进行分析处理。
（2）中性粒细胞标记检测：①分为样品管和对照管，均加入全血样品100ul；②样品管和对照管均加入1×溶血素2ml，充分混匀后，于室温下暗处孵育10min；③300g离心5min后，弃去上清液，加入2ml稀释工作液混匀再次离心，弃去上清液，留100ul稀释工作液；④样品管中加入CD55和CD59抗体各20ul，对照管中加入FITC和PE同型对照组各20ul，混匀后于室温下暗处孵育15~20min；⑤加2mlPBS再洗一次；⑥样品管和对照管中均加入鞘液0.5ml，充分混匀；⑦24h内上机分析。
1.3 观察指标
观察比较研究组与对照组患者的红细胞和中性粒细胞膜衰变加速因子（CD55）和反应性溶血膜抑制物（CD59）的缺失率。
1.4 统计学方法
本次研究中，将研究组与对照组共250例患者的研究数据均输入至SPSS17.0软件中，进行统计学有效处理，CD55和CD59的表达量均用（±s）的形式表示，处理方式为t检验。
2、结果
2.1 各组患者红细胞CD55和CD59的表达情况
研究组（PNH患者）的红细胞CD55缺失率明显高于对照组，组间差异较大，P＜0.05，具有统计价值；研究组（PNH患者）的红细胞CD59缺失率明显高于对照组，组间差异较大，P＜0.05，具有统计价值；而对照组之间进行红细胞CD55与CD59缺失率的比较，均无较大差异，P＞0.05，数据从统计学角度思考，不具有统计意义，如表1。
2.1 各组患者中性粒细胞CD55和CD59的表达情况
研究组（PNH患者）的中性粒细胞CD55缺失率明显高于对照组，组间差异较大，P＜0.05，具有统计价值；研究组（PNH患者）的中性粒细胞CD59缺失率明显高于对照组，组间差异较大，P＜0.05，具有统计价值；而对照组之间进行中性粒细胞CD55与CD59含量的比较，均无较大差异，P＞0.05，数据从统计学角度思考，不具有统计意义，如表2。
3、讨论
PNH患者与AA、IDA与MDS患者具有一些相似的症状，在症状早期难以区分。
但 由于PNH患者 GPI的生成障碍而导致相关细胞膜上CD55与CD59的缺失，因此对CD55与CD59的表达量的检测能够应用于PNH的诊断[4]，并且有研究表明CD59的表达缺失率比CD55的表达缺失率高，能够更好地反应病情和溶血之间的关系[5]，本次研究中，PNH患者的红细胞与中性粒细胞膜上的CD55与CD59的缺失率均大于20%，且明显高于AA患者、IDA患者、MDS患者和正常人，组间差异较为明显，P＜0.05，具有统计价值；而对AA患者、IDA患者、MDS患者和正常人之间进行比较，CD55和CD59的缺失率并无明显差异，P＞0.05，不具有统计意义。说明使用流式细胞术检测CD55与CD59的表达量的方法能够对PNH进行有效可靠的诊断，与李玉云[7]、曹文俊[8]等人的研究结果相同，值得推广使用。
综上所述，使用流式细胞术检测患者红细胞和中性粒细胞膜CD55和CD59的缺失，能够高特异且敏感地对阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）进行诊断，有效区分出PNH患者与AA、IDA、MDS患者，指标具有可靠性，可以在临床上推广使用。
参考文献：
[1] 许彩民, 杨洋, 吕照江,等. 体外转运红细胞囊泡的GPI锚定蛋白CD59保护阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞[J]. 中国实验血液学杂志, 1999(2):123-127.
[2] 丁磊, 姜叙诚. CD55、CD59在造血干细胞疾病中的表达[J]. 诊断学理论与实践, 2008, 7(5):559-562.
[3] 钟琼, 马丽. GPI锚定蛋白抗体CD55、CD59及RET在贫血诊断中的意义探讨[J]. 中国实验诊断学, 2009, 13(11):1566-1569.
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[8]曹文俊, 王枕亚, 石厚荣,等. CD55/CD59缺陷检测及其在阵发性睡眠性血红蛋白尿诊断中的意义[J]. 诊断学理论与实践, 2004, 3(6):416-419.
论文作者:李喜丽
论文发表刊物:《医师在线》2019年第01期
论文发表时间:2019/3/4
标签：患者论文; 蛋白尿论文; 缺失论文; 红细胞论文; 粒细胞论文; 血红论文; 阵发性论文; 《医师在线》2019年第01期论文;