周林福[1]2002年在《叁氧化二砷（As_2O_3）治疗哮喘作用机制的实验研究》文中研究说明[目的] 1．研究哮喘小鼠肺内树突状细胞(DC)分布、募集的特点，及不同浓度叁氧化二砷(As_2O_3)对其影响作用。2．研究小剂量As_2O_3对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞(EOS)浸润、EOS凋亡和核因子-kB(NF-kB)表达的影响作用及其相关性，探讨小剂量As_2O_3治疗哮喘的可能机制。 [方法] 1．BALB／c小鼠50只随机分为5组，即对照组、哮喘组、低剂量(1mg／kg)、中剂量(5mg／kg)和高剂量(10mg／kg)As_2O_3治疗组。采用免疫组织化学染色技术检测小鼠肺、气道DC；扫描电镜分析DC形态；计算机图像分析技术对DC进行定量检测。2．豚鼠30只随机分为3组，即对照组、哮喘组和As_2O_3(2mg／kg)治疗组。采用TUNEL技术原位标记细胞凋亡；免疫组织化学染色技术检测豚鼠气道壁NF-kB；计算机图像分析技术对气道壁EOS浸润、EOS凋亡和NF-kB表达进行定量检测。 [结果] 1．对照组小鼠整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个NLDC-145~+DC网络，DC密度从大气道到小气道分别为(500±50)个／mm~2上皮面积到(60±10)个／mm~2上皮面积(P＜0.05)，扫描电镜下DC呈典型的树突状形态；哮喘组小鼠肺内DC分布与对照组相似，但其密度较对照组显着增加(P＜0.01)；哮喘小鼠经As_2O_3处理后，肺内DC分布与哮喘组相似，但密度皆显着下降(P＜0.01)，且叁种不同浓度砷剂处理组间无显着性差异(P＞0.05)。2．对照组豚鼠支气管壁EOS计数为(4.4±2.5)个／HP，EOS凋亡指数(AI)为(0.42±0.08)％，整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个NF-kB~+细胞网络，其中支气管壁胞核NF- 南京医科大学硕士学位论文 x B”细胞密度为门 2 0 t 7 2）个加m‘上皮面积；与对照组 相比，哮喘组豚鼠支气管壁 EOS浸润显着增加（H 0．01）， EoS凋亡指数显着下降（八0．of），胞核w－。B”细胞密 度显着增加（RO．01）；哮喘豚鼠经 AS几处理后，支气 管壁 EOS浸润显着下降（HO．01），EOS凋亡指数显着增 加叶A0．of），胞核呷－。B“细胞密度显着下降（A0．OI）， 但与对照组相比仍较高（HO．05），并且叁组气道壁EOS 浸润 与 EOS 凋亡指数之间呈显着性负相关（r＝－0．94和 刀．”，A0．of），Eos凋亡指数与胞核呷－。B”细胞密度 之间也呈显着性负相关（r＝－0．93和－0．91，HO．01）。 ［结论］1．树突状细胞在整个肺组织构成了一个完整 的 NLDC叶 5DC网络；下调肺内m密度，而不影响其肺 内分布，可能是虹；0；治疗哮喘的一个重要机制。2．EOS 凋亡异常是哮喘重要的发病机制之一；EOS凋亡异常与 NF－。B激活增力。密切相关；下调气道NF－。B激活细胞 数量，促进EOS凋亡，可能也是As几治疗哮喘的一个重 要机制。
丁礼仁[2]2001年在《叁氧化二砷对抗原激发后哮喘大鼠气道炎症的影响》文中提出哮喘是由嗜酸粒细胞（eosinophils，Eos）、肥大细胞等多种细胞参与的气道慢性炎症性疾病，并伴有气道的高反应性（AHR）变异性气流阻塞。以表面激素应用为代表的抗炎治疗是目前治疗哮喘的主要方法，并在临床上得到了广泛的应用，取得了良好的效果。然而哮喘的发病率和死亡率并未有降低的趋势，反而在不断的上升。祖国传统的医药治疗哮喘已经有一千多年的历史，其中用砒石（主要成分为叁氧化二砷，Arsenic trioxide，俗称砒霜）有平喘作用早就为人们所认识，但由于它的毒副作用，加之在20世纪60年代表面激素问世以后，就逐渐被人们忽视。近年来随着对哮喘发病机制和防治研究的深入，特别是激素治疗哮喘仍有许多问题亟待解决，砷剂的作用重新为人们所认识。虽然人们早已观察到砷剂有一定的治疗哮喘的作用，但缺乏深入的研究。本实验首次在哮喘大鼠模型身上观察了砷剂对Eos的作用，发现砷剂确实有一定的抑制哮喘气道炎症的作用，并和布地奈德进行比较来探讨其可能的作用机制。 实验方法和材料 实验动物 体重约130克左右的Sprague Dawley雄性大鼠37只，随机分为以下几组：抗原致敏激发组（Sensitized group，S组），砷剂处理组（Arsenic trioxide treat group，AT组，分为叁个剂量组），正常对照组（Normalcontrol group，NC组），布地奈德处理组（BUD treat group，BUD组）。 实验方法和步骤 以生理盐水1ml、卵白蛋白（Ovalbmin，OVA）1.0mg、氢氧化铝膝版AI（OH川if）Olllg配成的致敏剂致敏S组、AT组、B UDUD i大鼠1 正常对照组则仅M理盐水 l”卜氢氧化铝凝胶川（OH）＊ 配成的混悬0 液处理。致敏后～周，对AT组大鼠分别按照0·5、l从2．omota叫的剂量】以腹腔注射的方式给子砷剂。致敏后 10天，对 BUD in＃ff＃w）Cm。oo］分两次以雾化的方式给药，连续4天。致敏后两周，S组、AT组、BUD组0 人鼠进行抗原雾化吸入。NC组则仅以生理盐水雾化吸人。在抗原激发后24I 小时，处死动物，取血、进行肺泡灌洗、取骨髓细响．＃0＃MMm。＾。。D 以及骨髓的计数和涂片，Wi虹卜Giemsa垫伊F钮什计猕。un个有拉伽。l 计数 EOS的个数’求出百分比。保留血清、骨髓液以及 BALF的上清液置J 于－20oC冰箱中待测细胞因子 IL6和 IFN7。肺泡灌洗后，取出肺组织，做］石蜡切片和苏木精－伊红染伊。］效姻叼既《头憋驭抵用肥％10·0软件进行统计，所得结果以均数0 士标准差o士sd）表示’各组检测数据先经X‘检验明确符合正态分布及方差 齐性检验后，再进行单因素方差分析咖e－Wy ANOVA）。若不符合N杰分布 及方差不齐，则进行秩和检验，组间多重比较用Mann－Whay法。 1．砷剂对哮喘气道炎症、骨髓Eo的影响，研穷得钡傅于on＿。。。＿＿I＿＿ 肺组织及支气管周围的枷S什拐床的枕朱，；M B＠o BB Q m M。。、。。 一’——“”——”““『’”刁l「I’J社衫巳／V7J二u二，V土1卜厂口7丁”卜h】匕。j 对骨髓有核细胞总数并无显着性的影响，却除惬了骨髓中＊。。新30。日＿al 对E。S的产生和分化成熟可能有抑制作用。同时还发现砷剂在一定程度上也 能够降低血清和BALF中IL－5的水平，可使IFNq恢复至正常的水平。 2．局部应用激素对于气道炎症、骨髓细胞以及IL6的影响：首失确宁雾 化给约而地g德（BUD）抑制气道炎症的最合适剂量0．sththe叼天人以 玩原傲友后24小时作为观察激素作用机制的时间，结果发现BUD明显抑制 了BALF中的细胞WBC总数、EOS，以E。S更为显着，对子骨髓基本无影响。 2l 浙江大学 2001年硕士学位论文 lD 本册究友规BUD能够明显的抑制抗原激友后B＊u、外周血中IL．5的水十，D 卉且能够便1m十怔复到正富对照组的水干。局部应用微素便气道及血管周l 围 EOS的浸洞得到fflB显的抑制，这与 BALF中 Eos i对计数显着下降相吻 ll／－11．不买锻阶％友现押刑臼一定的抑制哮喻气道炎症的作用，但和BUD 相lDw，过什仆用什1”兀土。仁川用nu里w盅1卞 卜，仰刑井1飞云川月脯厂上仰删，Dl 却能减少骨髓细胞甲Eos的数目，囚此耳可能通过影啊骨髓中EOs的的产生lD 米友择作用，先一万血也叫能是通过抑制I卜5的水十来买现的。D12．砷刑抑制气道炎症的作用机制与促进细胞的凋亡百关，因为IL5是目前
蒋胜华[3]2008年在《哮喘豚鼠骨髓CD_（34）~+、IL-5、IL-5Rα表达关系及三氧化二砷干预研究》文中研究表明目的:1研究支气管哮喘豚鼠骨髓(BM)和肺部CD_(34)~+、白介素-5(IL-5)、白介素-5Rα(IL-5 Rα)的表达关系,探讨小剂量叁氧化二砷(As2O3)对其的干预作用。探讨小剂量As2O3以骨髓为靶点治疗哮喘的作用的机制。方法:健康雄性豚鼠40只随机分成对照组(A组)、哮喘组(B组)、As2O3治疗组(C组)和地塞米松治疗组(D组),每组10只。以腹腔内注射联合雾化吸入卵蛋白复制哮喘模型,末次激发后24 h处死豚鼠检测支气管肺泡灌洗液(BALF)、骨髓(BM)中白细胞总数及分类计数;流式细胞仪测定BM中CD_(34)~+祖细胞比例;免疫组化方法测BM、肺组织中CD_(34)~+、IL-5、IL-5Rα的表达,ELISA法检测BALF、BM中IL-5浓度。结果:1 BALF、BM中白细胞总数及分类计数BALF、BM中白细胞总数、嗜酸性粒细胞(Eos)比例B组较A组均有明显增高,C组与D组较B组明显降低,差异有显着性( P < 0.05)。2 BM中CD_(34)~+祖细胞比例数流式细胞仪检测示BM中CD_(34)~+祖细胞比例B组较A组有显着性增高,D组较B组明显降低,C组较B组却有明显增高,差异有显着性( P < 0.01)。3 BM和肺组织中CD_(34)~+、IL-5、IL-5Rα的表达免疫组化(IH )显示BM和肺组织中CD_(34)~+、IL-5、IL-5Rα表达B组较A组均增高,C组与D组较B组均明显降低,差异有显着性( P < 0.01)。4 BALF、BM中IL-5浓度BALF、BM中IL-5浓度B组较A组均增高,C组与D组较B组显着降低,差异有显着性( P < 0.05)。5线相关性分析显示哮喘豚鼠BM中Eos比例与BM中CD_(34)~+、IL-5Rα阳性细胞(IH )比例之间呈高度正相关;BALF中Eos比例,肺组织中IL-5Rα表达呈高度正相关;BM中IL-5与BALF中IL-5表达量之间呈高度正相关。结论:1.在哮喘豚鼠模型BM中CD_(34)~+、IL-5、IL-5Rα的表达明显增高,支持BM内的CD_(34)~+IL-5Rα细胞可被认为是Eos早期祖细胞的结论。2.小剂量As2O3对哮喘豚鼠平喘作用机制可能与减少BM中Eos和CD_(34)~+、IL-5、IL-5Rα的生成有关。
参考文献：
[1]. 叁氧化二砷（As_2O_3）治疗哮喘作用机制的实验研究[D]. 周林福. 南京医科大学. 2002
[2]. 叁氧化二砷对抗原激发后哮喘大鼠气道炎症的影响[D]. 丁礼仁. 浙江大学. 2001
[3]. 哮喘豚鼠骨髓CD_（34）~+、IL-5、IL-5Rα表达关系及三氧化二砷干预研究[D]. 蒋胜华. 南华大学. 2008