富裕县人民医院 黑龙江齐齐哈尔 161200
摘要：目的：研究感染人体的细菌 L型的分离培养，寻找一种培养细菌 L 型的最佳办法，以便临床鉴定与研究细菌 L 型。方法：对在普通血液培养过程中瓶底出现轻微暗紫红、上清液微混或瓶壁有少量颗粒状物生长时，分别用血浆分离针抽取可疑培养物同时转种于普通血液琼脂培养基、L型增菌培养基及L型琼脂培养基中培养，观察其生长情况。结果：在血琼脂固体培养基上最终形成了细菌 L型，在液体培养基上形成了细菌型、L型、将可疑培养物再用血浆分离针转种于L型细菌液体培养基上又分离出23例L型细菌，使原来一般血培养阳性率提高。结论：经过对细菌 L型的分离培养研究，发现血琼脂固体培养基培养对于培养细菌L型有较好的效果，在临床上可以用于鉴定与研究细菌L型。
关键词：细菌；L型；分离培养
Abstract：Objective：To study the isolation and culture of human L infection，to find a best way to cultivate bacteria type L，so that the clinical identification and study of bacterial L.Methods：the process of training the bottom of the bottle slightly dark purple in the common blood，supernatant of micro mixing or a bottle wall a small amount of granular material growth，were used to isolate plasma needle suspected culture was extracted and implanted in the common blood agar，L enrichment medium and L agar medium，the growth was observed.Results：the medium formed L type of bacteria in the blood agar，L in liquid medium form the type of bacteria，and the Suspicious culture with plasmapheresis implanted in L type bacteria in liquid medium and L type bacteria were separated from 23，the general positive rate of blood culture increased.Conclusion：after separation of L type bacteria culture studies，found that the blood agar solid medium has a good effect on bacterial type L.Can be used in the treatment of bacterial identification and study of the L type.
Key words：bacteria；L；isolation and culture
1.资料和方法
1.1临床资料
研究所采取的标本均来自于我院近期收治的细菌感染致病的病人，病症包括慢性支气管炎、肺炎、泌尿系统感染、前列腺炎、肝硬化以及扁桃体炎，提取标本共50例。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆以上病例常规细菌培养多为1次或数次阴性。
1.2材料
L型培养基（L型增菌液、L型琼脂平板）采用改良Kagan氏培养基。用蒸馏水稀释狡卡青霉素注射剂成20mg/ml，取.0lml浸没10张直径smm滤纸片，制成抗生素纸片。
1.3方法
将采取的标本提取液，采取各种接种方法，初步的将提取接种到准备好的培养基上，将培养基放置于适宜细菌 L型的温度下，培养一段时间，血平板观察48小时，L型平板在低倍镜下逐日观察5~7天，如发现“油煎蛋”状（L型）、颗粒状（G型）或丝状（F型）菌落，即转种于普通肉汤、血平板等传代返祖，直至恢复细胞壁。待有菌生长后经细胞缺壁染色及菌落形态观察，证实为L型变异后再行返祖鉴定。还可进一步作支原体的生化特性试验，患者血清支原体抗体的血凝试验。为了观察细菌 L型形成的菌落，要采取染色的方法来进行观察。染色的主要方法是采取10% 的鞣酸固定染色 15 分钟后用大量的清水进行冲洗，然后0.5% 的结晶紫染液对目标培养基进行充分你的染色，大概染色3~5 分钟后，开始用油镜进行观察。用型玻棒将分离出的细菌型均匀涂布于型平板上，用取菌环将分离出的细菌型密集划线于普通平板上，贴上药敏纸片置37℃24小时后测量抑菌环径。支原体（mycoplsma）在人的口腔、呼吸道、泌尿生殖器、尿液或其他部位寄生，至今在人体内寄生的支原体可分为13种之多。由于细菌L型菌落与支原体菌落眼球状或油煎蛋状极为相似，故分离的细菌L型菌落，必须与支原体菌落相鉴别。故而有条件的单位还可进行电镜细菌L型超微结构分析细胞壁成分鉴定、DNAG+LCmol%测定，支原体探针杂交以及支原体聚合酶链反应测定。
2.结果
对比观察液体培养基和血琼脂固体培养基形成的菌落，发现在液体培养基上形成有三种不同的细菌在生长，而血琼脂固体培养基上形成了细菌 L型。在检出的57株细菌L型中，41株形成颗粒状菌落，15株形成油煎蛋状菌落，1株形成丝状菌落。
3.讨论
随着抗菌药物的应用与滥用，细菌变异为L型的机会有逐渐增多趋势。在临床标本检验时，除进行常规细菌培养外，还应重视细菌L型的培养，以提高细菌检出率.在目前的各类感染性疾病中，细菌 L 型是其中一种致病性较高的疾病。临床上为了能够及时准确的诊断出患者感染病原体的种类，最稳妥的办法是提取感染患者的提取液进行细菌 L型的培养，对一些应用抗生素治疗后仍持续发热、或一些慢性反复再发的感染患者，在做常规细菌培养的同时，应加做细菌L型的高渗培养，以提高病原菌的检出率.观察最终形成了菌落鉴定其是否是严重的细菌 L型致病菌。菌L型的形成及产量可受许多因素的影响，故L型细菌的生长现象比一般细菌弱，即使血液培养基底部出现轻微的暗紫红色或瓶壁有少量颗粒状生长，大多亦仅能维持2 d便可消失，如不仔细观察或及时转种即可造成漏检。L型细菌转种在一般固体培养基上不能生长，只有在L型液体培养基上经增菌后再转种于L型固体琼脂培养基上才能出现生长良好的菌落，如培养基的营养、琼脂或盐浓度、CO2浓度、诱导剂的种类及浓度和本文结果所示空气中氧含量也影响细菌L型的形成。所以在诊断过程中有着很大的漏洞，为了能够避免细菌 L型漏诊造成的损害，我院进行了细菌L型的分离培养试验，寻求一种鉴别培养细菌L型的最佳办法。经过本次的试验发现，细菌L型一般生长在高渗透性的培养基上，所以在临床上诊断患者的过程中，经过常规的培养基培养后，若L型菌显示为阴性，可以让其在血琼脂培养基上进行培养，观察是否会形成细菌L型的菌落，这样可以一定程度上提高细菌L型的检出率。
经过本次的研究，血琼脂固体培养基对于分离培养细菌L型具有极其明显的效果，在临床的检验中，如果出现疑似细菌L 型感染的患者，可以进行血培养或液体培养，一旦出现L型细菌生长，立即进行具体菌种的鉴定工作，这样能够有效的提高细菌L型的诊断与治疗。治疗选用破坏细胞壁的抗生素时，剂量应充分足量，以期彻底破坏细胞壁及其菌体，不使其变为L型.若遇有反复发作、迁延不愈或慢性感染病人，可能是细菌L型感染时，则考虑试用抗菌药物联合治泞。
参考文献：
[1]佘晓玲，王涛，丁文静，吴文娟，潘耀振，汤可立，王丹霓，王和.猪胆囊中沙门菌L型的分离培养与invA基因检测[J].动物医学进展，2015，03：25-28.
[2]孙亮亮，王和.猪胆汁体外诱导培养物和胆囊中鼠伤寒沙门菌L型的检测[J].贵州农业科学，2015，08：181-184.
[3]刘欣.细菌L型的分离培养探讨[J].人人健康，2016，08：210+180.
论文作者:孙广研
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2017年第3期
论文发表时间:2017/4/7
标签：细菌论文; 培养基论文; 菌落论文; 琼脂论文; 支原体论文; 生长论文; 固体论文; 《中国误诊学杂志》2017年第3期论文;