卿克勤
（成都市第一人民医院检验科 四川 成都 610041）
【摘要】 目的：探讨尿足细胞标志蛋白（PCX）、nephrin和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）对早期DN诊断的临床价值。方法：对86例单纯2型糖尿病（T2DM）患者、81例早期糖尿病肾病（DN）患者、69例临床DN患者和100例健康对照组尿液PCX、nephrin和MCP-1水平进行测定，同时测定血清胱抑素C（Cys C）和肌酐（Cre）水平。结果：单纯T2DM组、早期DN组和临床DN组尿液PCX、nephrin和MCP-1水平均显著高于健康对照组，早期DN组和临床DN组均显著高于单纯T2DM组，临床DN组显著高于早期DN组，组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。尿PCX、nephrin和MCP-1水平与24小时尿白蛋白排泄的相关系数分别为0.619、0.573和0.589。尿PCX、尿nephrin、尿MCP-1、血清Csy C和血清Cre诊断DN的灵敏度分别为100%、100%、100%、83.3%和60%。尿PCX、尿nephrin、尿MCP-1、血清Csy C和血清Cre诊断DN的ROC曲线下面积分别为0.912、0.923、0.905、0.863和0.726。结论：尿PCX、nephrin和MCP-1是早期糖尿病肾病诊断的有效指标，优于血清Cys C和Cre。
【关键词】 糖尿病肾病；足细胞标志蛋白；nephrin；单核细胞趋化蛋白-1
【中图分类号】R587.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）15-0033-03
Clinical value of of urinary podocalyxin,nephrin and monocyte chemoattractant protein-1 for diagnosis of diabetic nephropathy in patients with type 2 diabetes mellitus Qing Keqin. The First People's Hospital of Chengdu City, Sichuan Province, Chengdu 610041, China
【Abstract】Objective To explore clinical value of urine podocalyxin (PCX), nephrin and monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1) for diagnosis of early diabetic nephropathy(DN). Methods The levels of PCX, nephrin and MCP-1were measured in the urine from 86 patients with type 2 diabetes mellitus(T2DM) without DN,81 patients with early DN,69 patients with clinical DN and 100 healthy control group, meanwhile, the levels of cystatin C(Cys C) and creatinine (Cre) were measured in sera from them. Results The levels of PCX, nephrin and MCP-1 were higher in patients with T2DM without DN, patients with early DN and patients with clinical DN than these in healthy control group(P<0.05),these were higher in patients with early DN and patients with clinical DN than in patients with T2DM without DN(P<0.05), these were higher in patients with clinical DN than in patients with early DN(P<0.05). The levels of PCX, nephrin and MCP-1 were positively corrected with 24 h urinary albumin excretion(r=0.619、0.573 and 0.589). The sensitivity of urinary PCX, urinary nephrin, urinary MCP-1,sera Cys C and sera Cre for diagnosis of DN were 100%,100%,100%,83.3% and 60.0%, respectively. The area under ROC curve of PCX,nephrin,MCP-1,Cys C and Cre for DN were 0.912,0.923,0.905,0.863 and 0.726, respectively. Conclusion Urinary PCX,nephrin and MCP-1 were the sensitive, simple, and effective indexes for the diagnosis of early DN,they were better than Cys C and Cre for the diagnosis of early DN.
【Key words】Diabetic nephropathy; Podocalyxin;nephrin; Monocyte chemoattractant protein-1
2013年全球成年人糖尿病（DM）患者约3.82亿，中国成年人DM患病率11.6%，DM患者人数居各国之首，并在急剧增加。糖尿病肾病(DN)是2型糖尿病(T2DM)最严重和最常见的并发症之一，是引起终末期肾病的首要原因，也是DM患者致残、致死的主要原因之一。我国T2DM患者的DN患病率在社区患者中为30%～50%，在住院患者中约40%[1]。DN约占我国终末期肾病的15%，早诊断、早治疗是改善患者远期预后的关键[2]。早期DN临床症状隐匿且缺乏特异性的临床症状。长期以来，DN诊断主要依靠尿白蛋白排泄（UAE），但微量白蛋白尿在显著肾小球损伤后才出现[3]。因此，寻找UAE之外，对早期DN的诊断更敏感和特异的标志物成为临床迫切解决的问题。本实验对近年新发现的DN生物标志物－尿足细胞标志蛋白（PCX）、nephrin和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）对DN诊断的临床价值进行了评价。
1.材料与方法
1.1 研究对象
本院2013年1月至2014年12月就诊的T2DM患者236例，男153例，女83例，均符合1999年WHO糖尿病诊断标准。据24小时UAE将T2DM患者分为3组[4]：单纯DM组86例，UAE＜30mg/24小时，28～69岁，平均年龄47.8±13.9岁，男56例，女30例；早期DN组81例，UAE为30～300mg/24小时，30～71岁，平均年龄48.3±12.8岁，男53例，女28例；临床DN组69例，UAE＞300mg/24小时，32～73岁，平均年龄50.3±15.1岁，男48例，女21例。对照组为同期本院健康体检的健康者100例，26～72岁，平均年龄49.3±15.9岁，男63例，女37例。排除标准：感染，心、肝、甲状腺等脏器疾病，肿瘤，高血压，发热，自身免疫病，急慢性肾炎，急慢性炎症和孕妇。各组间年龄、性别、体质量指数差异无统计学意义（P＞0.05）。
1.2 仪器与试剂
日本OLYMPUS AU2700全自动生化仪。尿微量白蛋白试剂、校准品、质控品由英国RANDOX公司提供，PCX试剂由广东虹业抗体有限公司提供， MCP-1试剂盒由上海源叶生物科技有限公司提供，nephrin试剂盒由上海索尔生物科技有限公司提供，血清胱抑素C(Cys C)和肌酐(Cre)试剂由北京九强生物技术有限公司提供。
1.3 实验方法
1.3.1标本收集：用无抗凝剂的无菌真空管取受检者晨起空腹静脉血5ml，2小时内3000转/分离心15分钟分离血清，供检测Cys C和Cre用。收集晨起第1次中段尿10ml供检测尿PCX、nephrin和MCP-1用。收集24小时尿供检测24小时UAE用。
1.3.2尿PCX、nephrin、MCP-1和白蛋白的检测方法：PCX和白蛋白含量测定采用免疫比浊法，nephrin和MCP-1含量测定采用酶联免疫吸附试验(ELISA)。严格按试剂说明书进行实验操作。
1.3.3血清Cys C、urea和Cr检测方法：Cr采用酶法，Cys C采用免疫比浊法。严格按试剂说明书进行实验操作。
1.3.4参考区间：血清Cre 45～84μmol/L和Cys C 0.59～1.03mg/L[5]。尿PCX、nephrin和MCP-1以对照组结果的“均数±2s”。结果大于参考区间上限为阳性。
1.4 统计学处理
用SPSS17.0软件包进行统计学分析。符合正态分布的计量资料结果以均数±标准差表示，多组间比较采用方差分析并用q检验进行两两比较。计数资料采用χ2检验。双变量相关性采用Pearson直线相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 各组DM患者血液和尿液检测结果
各组间尿PCX、nephrin和MCP-1水平差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表1。
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2.2 各组DM患者尿PCX、nephrin、MCP-1及血清Csy C和Cre的阳性率
对早期DN，尿PCX、nephrin和MCP-1的阳性率显著高于血清Csy C和Cre，差异有统计学意义(P<0.05)，血清Csy C的阳性率显著高于血清Cre(P<0.05)。结果见表2。
表2 各组DM患者尿PCX、nephrin、MCP-1及血Csy C和Cre的阳性率%（n）比较
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2.3 临床诊断效能
以UAE为≥30mg/24小时为DN诊断标准，尿PCX、尿nephrin、尿MCP-1、血清Csy C和血清Cre诊断DN的灵敏度分别为100%、100%、100%、83.3%和60%。尿PCX、nephrin和MCP-1的灵敏度显著高于血清Csy C和Cre，差异有统计学意义(P<0.05)，血清Csy C的灵敏度显著高于血清Cre(P<0.05)。
2.4 ROC曲线下面积（AUC）
尿PCX、尿nephrin、尿MCP-1、血清Csy C和血清Cre诊断DN的AUC分别为0.912、0.923、0.905、0.863和0.726。
2.5 尿PCX、nephrin和MCP-1水平与UAE的相关性
尿PCX、nephrin和MCP-1水平与UAE都呈正相关，相关系数r分别为0.619(P<0.05)、0.573(P<0.05)和0.589(P<0.05)。
3.讨论
足细胞即肾小球脏层上皮细胞，正常情况下足细胞及其足突与肾小球基膜、毛细血管内皮细胞一起构成肾小球滤过屏障。Nephrin和PCX是二种重要的足细胞相关蛋白，PCX为足突顶端质膜的主要成分，是足突顶膜区主要的带负电荷的唾液酸蛋白，参与维持足细胞的正常结构和滤过屏障。nephrin是肾小球裂孔膜上的跨膜蛋白，在维持肾小球滤过膜完整性上具有重要作用[6]。当肾脏发生病变时，足细胞损伤、凋亡、脱落，引起足细胞数目减少，导致肾小球基底膜电荷屏障和裂孔膜的破坏，使得尿蛋白漏出[7]。尿Nephrin和PCX增加是反映足细胞损伤的重要指标。本实验结果显示，单纯DM患者、早期DN患者和临床DN患者尿PCX和nephrin水平显著高于对照组(P<0.05)，早期DN患者和临床DN患者尿PCX和nephrin水平显著高于单纯DM患者(P<0.05)，临床DN患者尿PCX和nephrin水平显著高于单纯DM患者和早期DN患者(P<0.05)，尿PCX和nephrin水平与24小时UAE呈正相关，与文献[8]报道一致。提示尿液PCX和nephrin水平测定可早期发现DN，并有助于肾损害程度判断。Kalani等[9]报道在正常蛋白尿患者中即可发现足细胞的异常，足细胞的受损早于蛋白尿的出现。T2DM伴有白蛋白尿的患者100%存在肾病蛋白表达[10]，未出现白蛋白尿的T2DM患者中54％出现尿PCX和nephrin表达[11]。本实验结果显示，早期DN患者和临床DN患者尿PCX和nephrin的阳性率均为100%，尿PCX和nephrin对DN的诊断灵敏度和准确性都显著高于血清Cre和Cys C(P<0.05)，提示尿PCX和nephrin可出现在DN早期，为DN早期诊断的有效标志物。本实验中UAE正常的单纯DM患者尿PCX和nephrin的阳性率分别为26.7%和29.1%，这可能是DN肾损伤所致，也可能是非特异性升高，因足细胞标记蛋白还存在于内皮细胞/壁层上皮细胞及各种非肾脏细胞中[12]。
足细胞损伤及炎症是DN发病的重要机制。临床研究发现，长期慢性炎症反应参与了DM的发生、发展，炎症因子与糖尿病微血管病变密切相关[13],肾组织中单核/巨噬细胞浸润介导的炎症反应被认为是糖尿病肾病发病的始动因素，尿液MCP-1水平能精确地反映肾脏MCP-1的生成[14]。本试验结果显示，单纯DM患者、早期DN患者和临床DN患者尿MCP-1水平显著高于对照组(P<0.05)，早期DN患者和临床DN患者尿MCP-1水平显著高于单纯DM患者(P<0.05)，临床DN患者尿MCP-1水平显著高于单纯DM患者和早期DN患者(P<0.05)，尿MCP-1水平与24小时UAE呈正相关，这与文献[13]报道一致。单纯DM患者和DN患者血清及尿液中MCP-1、IL-18和NKκB水平均显著升高[13,15,16]。提示DM和DN患者局部肾组织存在炎症性反应，尿液MCP-1水平测定有助于糖尿病肾病的早期诊断和肾损害严重程度判断。本实验中的早期DN患者和临床DN患者尿MCP-1的阳性率均为100%，尿MCP-1对DN的诊断灵敏度和准确性都显著高于血清Cre和Cys C(P<0.05)。提示尿MCP-1为DN早期诊断的有效标志物。
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论文作者:卿克勤
论文发表刊物:《医药前沿》2016年5月第15期
论文发表时间:2016/6/22
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