王莉萍1 胡莉1 高红1 韦祎2
（1重庆科瑞制药（集团）有限公司 重庆 400060）
（2重庆市中药研究院 重庆 400065）
【摘要】 目的：建立高效液相色谱法测定复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ中甘草苷及甘草酸的含量。方法：色谱柱为Agilent 5 HC-C18，流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液（梯度洗脱），流速为1.0ml/min，甘草苷的检测波长为276nm、甘草酸的检测波长为250nm，柱温为30℃，进样量为20?l。结果：甘草苷和甘草酸的质量浓度分别在4.8274～43.4468、34.5511～310.9597?g/ml范围内与各自峰面积积分呈良好线性关系（r=0.999 9、0.999 9）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤0.9%；甘草苷和甘草酸的平均加样回收率分别为99.6%、98.4%，RSD分别为0.9%、1.1%（n=6）。结论：本方法简便，准确，精密度好，适用于复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ中甘草苷及甘草酸的含量测定。
【关键词】 高效液相色谱法；复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ；甘草苷；甘草酸；含量测定
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2015）22-0351-03
Determination of Liquiritin and Glycyrrhizic Acid in Compound Radix Platycodi Polygala Ephedrine Tablets Ⅰ by HPLC
Wang Liping1，Hu Li1，Gao Hong1，WeiYi2
(1.Chongqing kerui Pharmaceutical Croup Co. Ltd.，Chongqing 400060)
（2. Chongqing Academy of Chinese Materia，Chongqing 400065)
【Abstract】 Objective To establish a method for the content determination of liquiritin and glycyrrhizic acid in Compound radix platycodi polygala ephedrine tablets Ⅰ by HPLC. Methods The determination was performed on Agilent 5 HC-C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.05% phosphoric acid (gradient elution) at the flow rate of 1.0ml/min. The detection wavelength was set at 262 nm for liquiritin and 250nm for glycyrrhizic acid. The column temperature was 30℃. The sample size was 20 ?l. Results The linear range were 4.8274～43.4468?g/ml of liquiritin (r=0.999 9), 34.5511～310.9597?g/ml for glycyrrhizic acid (r=0.999 9) . RSDs of precision, stabillity and repeatability tests were ≤ 0.9%. The average recoveries were 99.6% (RSD=0.9% , n=6) and 98.4% (RSD=1.1% , n=6). Conclusions This method is simple and accurate with good precision .It can be used for the contents determination of liquiritin and glycyrrhizic acid in Compound radix platycodi polygala ephedrine tablets Ⅰ.
【Keywords】 HPLC determination Compound radix platycodi polygala ephedrine tablets Ⅰ Liquiritin Glycyrrhizic acid Content determination
复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ为镇咳祛痰类非处方药，用于咳嗽、多痰，也可用于喘息性支气管炎引起的咳嗽。该药是由盐酸麻黄碱、桔梗流浸膏、远志流浸膏、甘草浸膏、茴香油及辅料制成的复方制剂，其质量标准收载于《国家药品标准》化学药品地方标准上升国家标准（第十一册）（WS-10001-（HD-1083）-2002）[1]，原标准仅对盐酸麻黄碱进行了含量控制，为保证临床用药安全有效，本文对该品种的质量标准进行了提高研究，建立了同时测定其中甘草苷及甘草酸含量的方法。
1.仪器与试药
LC-2010CHT型HPLC仪（日本岛津公司）；KQ-500DV型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；MS205DU 型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；UPH-III型优普超纯水机（四川优普超纯科技有限公司）。
甘草苷对照品（批号：111610-201106）和甘草酸铵对照品（批号：110731-201116）购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱醇；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ（本公司自制，批号：835001、835002、835003）。
2.方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent 5 HC-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.05％磷酸溶液（B），采用梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1；流速：1.0ml/min；甘草苷检测波长：276nm；甘草酸检测波长：250nm；柱温：30℃；进样量：20μl。
表1 梯度洗脱程序
2.2 对照品溶液制备
精密称取甘草苷对照品12.88mg，置50ml量瓶中，用70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为甘草苷对照品贮备液。再精密量取5ml，置50ml量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀即得。
精密称取甘草酸铵对照品94.70mg，置50ml量瓶中，用70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为甘草酸铵对照品贮备液（甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207）。再精密量取5ml，置50ml量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀即得。
2.3 供试品溶液制备
取本品，研细，精密称取约1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液制备
按处方比例称取除甘草浸膏以外的其它物料，按制备工艺制成不含甘草浸膏的阴性供试品，按“2.3项”方法操作。
图1 高效液相色谱图
A. 对照品溶液（276nm）；B. 阴性对照溶液（276nm）；C. 供试品溶液（276nm）；
D. 对照品溶液（250nm）；E. 阴性对照溶液（250nm）；F. 供试品溶液（250nm）
2.5 方法学考察
2.5.1线性关系考察
精密量取“2.2项”的两种对照品贮备液各1ml、3ml、5ml、7ml、9ml，分别置50ml量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀。取不同浓度的两种对照品溶液20?l注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。以峰面积A为纵坐标，浓度C（?g/ml）为横坐标，绘制标准曲线。甘草苷在4.8274～43.4468?g/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程：A=39850C-6865，r=0.999 9；甘草酸在34.5511～310.9597?g/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程：A=17634C+45403，r=0.9999。
2.5.2精密度试验
取“2.2项”的对照品溶液，按“2.1项”色谱条件，连续进样6次，记录色谱图，甘草苷及甘草酸的峰面积RSD分别为0.3%和0.6%。表明本方法精密度好。
2.5.3稳定性试验
取同一供试品溶液（批号：835001），室温（25℃）放置，分别于0，1，2，4，8，12，16h时依法测定，记录色谱图，结果甘草苷和甘草酸的峰面积RSD分别为0.6%和0.9%。表明供试品溶液在16h内稳定。
2.5.4重复性试验
取同一批次复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ样品（批号：835001），按照上述方法平行试验6份，记录色谱图，甘草苷和甘草酸含量测定的峰面积RSD分别为0.5%和0.7%。表明本方法重复性好。
2.5.5加样回收率试验
精密称取已知含量的供试品（批号：835001）6份，每份约1.5g，按“2.3项”方法制备，各精密量取续滤液10ml，置20ml量瓶中，分别精密加入甘草苷对照品贮备液1ml和甘草酸铵对照品贮备液1ml，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀。按“2.1项”色谱条件测定，计算回收率，结果见表2。
表2 加样回收率试验结果（n＝6）
3.样品测定
取本公司自制的三批复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ，按“2.3项”方法制备供应品溶液，按“2.1项”色谱条件测定。结果见表3。
表3 样品含量测定结果（n＝3）
4.讨论
4.1 在200nm～400nm波长范围内扫描，甘草苷及甘草酸铵分别在276nm及250nm波长处有最大吸收。经查2010年版《中国药典（一部）》[2]及相关文献 [3-5] ，甘草苷及甘草酸铵均采用单一波长测定含量，由于单一波长不能使每个组分都在最大吸收处测定，检测灵敏性会受影响，因此利用HPLC检测器可同时检测双波长的功能，将甘草苷及甘草酸的检测波长均设定为各自的最大吸收波长。
4.2 复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ中还含有桔梗流浸膏、远志流浸膏、茴香油这几种能发挥药理作用的有效成分，为保证患者用药安全有效，建议其质量标准中能增加相应的质量控制项目。
【参考文献】
[1] WS-10001-（HD-1083）-2002. 国家药品标准·化学药品地方标准上升国家标准（第十一册）[S] ．
[2] 国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社．2010：376-377．
[3] 邰顺章，袁步娟，黄柳燕.HPLC法测定复方桔梗止咳片中甘草苷和甘草酸含量[J].药学与临床研究，2014，02：115-117．
[4] 柴彦，陆颖，任爱农.高效液相色谱法同时测定芩香颗粒中甘草苷和甘草酸的含量[J].海峡药学，2013，25（9）：86-88．
[5] 周刚，吕庆红. 高效液相色谱法测定甘勺颗粒中甘草苷和甘草酸的含量[J].中南药学，2013，11（3）：227-229．
论文作者:王莉萍1, 胡莉1, 高红1, 韦祎2
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第22期供稿
论文发表时间:2015/10/21
标签：甘草论文; 麻黄碱论文; 溶液论文; 色谱论文; 甘草酸论文; 桔梗论文; 远志论文; 《医药前沿》2015年第22期供稿论文;