谢海丽
耒阳市疾病预防控制中心 湖南衡阳 421800
【摘 要】目的 探讨多管发酵法、酶底物法、滤膜法三种方法检测水中总大肠菌群的对比研究。方法 选取水样作为研究对象，均应用多管发酵法、酶底物法、滤膜法筛检，观察检测结果。结果 对生活用水的检测结果显示，多管发酵法结果比较粗放，精确度有限，酶底物法及滤膜法检测出的结果比较精确。对水源水的检测结果显示，多管发酵法和酶底物法的检测结果相近，都较为准确，相比差异无显著统计学意义，t=13.27，P＞0.05；滤膜法和其他两种方法的结果差异较大，t=13.98，P＜0.05。结论 多管发酵法、酶底物法、滤膜法在水中总大肠菌群的检测中均具有一定的价值，三种检测方法都各有优缺点，其中滤膜法适用于自来水厂的批量水质检测，多管发酵法适用于浊度较高的水质常规检测，酶底物法适用于应对突发性的公共卫生事件水质检测。
【关键词】多管发酵法；酶底物法；滤膜法；水质；总大肠菌群
生活饮用水是我们日常生活的必需品，因此其质量直接影响到人体的健康，水中大肠菌群是一种有害菌群，也是必须检测的微生物指标，能够评价生活饮用水的质量。总大肠菌群主要包括大肠埃希氏菌、大肠杆菌等。检测水中总大肠菌群的数量能够显示水体被粪便污染的程度，同时能够间接提示存在肠道致病菌。传统检测大肠菌群的方法包括多管发酵法、酶底物法、滤膜法等。其中多管发酵法为传统的检测方法具有较长的检测周期，并且培养基的保存时间较短，而且操作步骤较为繁琐；滤膜法也是一种常用的检测方法，具有快速简便的特点，但是其受到其他影响因素干扰较多，可能导致菌落数偏低。酶底物法是快速简便、准确的方法，具有快速简便的检测特点。本文根据三种检测方法的特点进行简要讨论。
1资料与方法
1.1一般资料
2017年5月至2018年5月收集的生活用水标准及水源水作为水样，分别采用多管发酵法、酶底物法、滤膜法进行检测。
1.2方法
1.2.1多管发酵法
多管发酵法将10ml的水在10ml的双料乳糖蛋白胨培养液中接种，取1ml的水样在单料乳糖蛋白等培养液中接种，另取1ml的水样利用生理盐水稀释10倍后再在10ml的单料乳糖蛋白胨培养液中接种，设置培养箱温度为36摄氏度，进行培养基的培养，经过24小时的观察后，不产酸产气的为大肠菌群阴性，将产酸产气的大肠菌群进行分类培养后，在伊红美蓝培养板上进行培养，经过24小时的观察期后，将紫红和紫灰色的菌落进行革兰氏阴性染色检查并培养24小时后，产酸产气的菌群为大肠菌群阳性。
1.2.2酶底物法
酶底物法通过固定底物技术进行，酶底物法将100ml水样品加入无菌采样瓶中，其中含有含硫带硫酸钠，随后将科利得试剂加入采样瓶中混合均匀搅拌，将溶液倒入97孔订量盘中做空白和阳性对照，设置培养温度37摄氏度24小时后报出结果，阳性判断标准为定量盘孔内黄色，颜色相比阳性比色盘较深，否则则为阴性。怀疑为阳性的样品可以等待28小时后再进行对比。
1.2.3滤膜法
对滤膜进行消毒灭菌后，清除病菌及残留溶剂，将滤器固定完毕后注入100ml样品。打开滤器的阀门设定大气压为负压0.5进行抽滤，过滤水样后将滤膜的边缘部分放置到品红亚硫酸钠培养基，设置恒温箱温度37摄氏度，将培养基培养24小时，对培养基的结果进行观察并验证。滤膜上有典型菌落生长后选择符合特征的菌落进行革兰氏染色，将阴性无芽孢杆菌接种至乳糖蛋白培养液，设置培养温度37摄氏度经24小时培养后产酸产气，则判定为阳性。
1.3统计学方法
数据利用 SPSS19.0处理，计数资料方差检验，计量资料t检验，p＜0.05为显著差异。
2结果
2.1三种检测方法对生活饮用水检测的结果
多管发酵法采用MPN方法计算，本身结果比较粗放，精确度有限，酶底物法及滤膜法检测出的结果比较精确。
2.2三种检测方法对水源水检测的结果
多管发酵法和酶底物法的检测结果相近，都较为准确，相比差异无显著统计学意义，t=13.27，P＞0.05；滤膜法和其他两种方法的结果差异较大，t=13.98，P＜0.05。这是因为水源水的浊度较高，滤膜上的菌落数不能准确辨别导致。
3讨论
多管发酵法是利用统计学原理进行的检测方法，也是一种半定量试验，该检测方法的优势在于能够免于受到浊度的影响，对于浊度较大的水样具有较为稳定的检测结果，并且检测的成本较低，但是缺陷在于检测步骤繁琐，增加了检测人员的工作量，而且检测的周期较长。该检测方法的实验周期高达96小时左右，由于不能得出具体的大肠杆菌数值，所以对于生活饮用水的检验并不适用。多管发酵法使用的是半成品培养基，需要采取较多的准备工作，因此在准备过程中的任何环节出现了偏差都会影响检测结果的准确性，例如试剂的称量是否准确以及高压消毒的场所都会对检测结果造成干扰，另外还要经历转种、验证、试验等步骤，以上操作也会增加检测的误差。多管发酵法的检测大肠菌群数量相比于酶底物法较多，这是因为多管发酵法主要检测总大肠菌群，而酶底物法主要检测的是大肠埃希氏菌。
酶底物法使用的试剂盒能够按照国际标准配置，不会存在二次污染，在24小时内能够得到准确的检测结果。可以对大肠菌群的群数和钟数进行准确分辨，对无菌条件没有明确要求。酶底物法检测的成本较高，但是其操作步骤最为简便，而且对实验室的环境以及无菌操作条件的要求不高，不需要采用验证实验所以减少了检测的步骤，并且对于大肠埃希氏菌的检测结果较为准确，检测结果显示其检测结果更加真实，不会受到水的浊度影响，因此适用于任何水质的检测，是一种特异性高准确度强的先进检测方法，误差较小受到的因素干扰较少。
滤膜法的操作步骤简便，操作周期较短，并且具有较低的检测成本，但是对于实验室的要求以及无菌操作的条件要求较高并且实验结果需要验证，因此临床应用受到了一定的限制，就检测结果而言滤膜法的检测结果偏低，主要原因是菌落分布不均匀，因此辨别菌落存在干扰。非常适用于低浊度水的大批量检测，特别是在自来水厂中的应用较多，但是对于杂质含量高的水而言其特异性较低，很容易受到其它细菌的干扰，另外其检测结果的确确定，至少需要2天的时间，对于突发急性事件的应对并不适用。
水中含有一定数量的微生物，这是他们生长的天然环境，其中的病原菌主要来自于动物的传染性排泄物。进行肠道细菌的检验有助于保证饮水安全，同时能够评价水质的状况。大肠菌群主要来自于动物的粪便，所以检测水中含有的大肠菌群能够检测出水受粪便污染的程度，特别是被粪便近期污染的程度。水中的大肠菌群数是指100ml水样中含有的大肠菌群数值。人体的肠道中含有大肠菌群等多种细菌都能够进入到水源中，但是大肠菌群的数量最多，所以能够反映水源被粪便污染的程度，也是世界上公认的粪便污染指标，所以必须要进行大肠菌群数量的检测。
本次研究结果表明，三种检测方法都各有优缺点，其中滤膜法适用于自来水厂的批量水质检测，多管发酵法适用于浊度较高的水质常规检测，酶底物法适用于应对突发性的公共卫生事件检测。
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论文作者:谢海丽
论文发表刊物:《中国结合医学杂志》2019年6期
论文发表时间:2019/8/19
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