1.广东药科大学 临床医学院，广东 广州 510006
2.广东药科大学 药学院，广东 广州 510006
摘要：目的 研究低温水浸束缚应激对小鼠心肌损伤的影响。方法 将小鼠随机分为空白组、造模1日、2日、3日、4日、5日组。采用低温水浸束缚应激模型。实验结束后检测血清LDH、AST、ALT水平，并进行心肌组织病理学分析。结果 与空白组相比，束缚应激小鼠LDH、AST、ALT水平显著变化（P＜0.05）且心肌组织发生病理变化。结论 束缚应激可诱导小鼠心肌组织发生损伤，其作用与应激时长相关。
关键词：水浸束缚；应激；心肌损伤；
Abstract: Objective：To study on the effect of low temperature water immersion restraint stress on myocardial injury in mice. Methods：The mice were randomly divided into blank group, model 1 day, model 2 day, model 3 day, model 4 day, model 5 day group. Low temperature water immersion restraint stress model was used. At the end of the experiment, the level of serum ldh,ast,alt was measured and the histopathological analysis of myocardium was carried out.Results：Compared with the blank group, the levels of ldh,ast,alt in restraint stress mice were significantly changed (p < 0 05), and the pathological changes of myocardial tissue were observed.. Conclusion：Restraint stress can induce myocardial injury in mice, and its effect is related to stress time.
Keywords：Immersion restraint; stress; myocardial injury；
应激是指机体受到各种内外环境因素及社会、心理因素刺激时所出现的全身性非特异性适应反应，也称应激反应[1]。适度应激可通过适当地调节体内各系统的代谢，增强适应环境的能力；然而过度的应激则不同程度地损害机体的心理和生理健康[2，3，4]。由于过度持久的应激而打破身体内环境的平衡所导致的损伤以及相关应激性疾病的防治已成为医学关注问题。束缚应激模型能有效复制心理社会应激的动物模型[5]。本研究建立水浸束缚应激模型，研究应激对小鼠心肌损伤的影响。
1 材料
1.1 实验动物
健康成年昆明雄性小鼠（22～25g）36只，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供。
1.2 主要仪器
高速冷冻离心机（Eppendorf公司），光学显微镜（Olympus公司），石蜡切片机（湖北伯纳医疗科技有限公司），漂烘片机（湖北伯纳医疗科技有限公司），超净工作台（苏州净化设备公司），数显恒温水浴箱（杭州米欧仪器有限公司），BN-518生物组织自动包埋机（湖北伯纳医疗科技有限公司），超低温（-80℃）冰箱（Panasonic公司）。
2 方法
2.1小鼠低温水浸束缚应激模型建立
36只昆明小鼠随机分为6组，除空白组外，造模小鼠放入装置（在顶部、管身及管底均匀打5个大小适中的孔），扣上瓶盖并加上泡沫固定板，使其不能自由活动，将小鼠头向上竖直浸泡在温度相对恒定（23±1℃）的水中，并加入铁制网板固定，保持小鼠的剑突部位平齐于水平面，建立小鼠低温水浸束缚应激模型[6]。
空白组小鼠正常饲养，实验第一天处死并解剖取材。各造模组小鼠于造模期间灌胃方式给予蒸馏水，每天三次，剂量为0.1mL/10g，分别于造模24h、48h、72h、96h、120h后处死并解剖取材。造模4日组、造模5日组的小鼠在96h和120h的解剖时间前均已死亡。
2.2取材
实验第一天，空白组小鼠摘眼球取血，血液静置30min后，10000转/分离心15min，取血清并冷冻保存。取出心脏后将其对半切开，取一半放入10%甲醛溶液中浸泡保存，以备做HE染色病理分析。各造模组取材方法同空白组。
2.3心肌组织病理学检查
小鼠的心脏组织用10%中性甲醛固定24h后，按照脱水透明、浸蜡包埋、切片与贴片、切片脱蜡、HE染色、脱水、透明、封片的步骤进行切片并HE染色和封片。在光学显微镜下观察着色情况和病理变化，并拍照。
2.4统计学分析
数据采用SPSS 24.0 统计软件分析，结果用均数±标准差（X±SD ）表示。多个样本均数的比较用单因素方差分析，P<0.05表示具有统计学意义， P<0.01表示统计学有极显著性差异。
3结果
3.1 应激情况下可引起小鼠血清LDH（乳酸脱氢酶）、AST（谷草转氨酶）、ALT（谷丙转氨酶）水平的显著变化
3.2 小鼠低温水浸束缚应激后不同时间对心脏组织的病理学影响
HE染色结果发现，与空白组相比，造模1日组个别小鼠的心肌纤维出现部分疏松水肿，甚至融解（损伤小鼠数量占17%）；造模2日组心肌纤维部分疏松水肿融解，比造模1日组严重（损伤小鼠数量占50%）；造模3日组心肌纤维细胞浸润和增殖显著增加，炎症明显，心肌细胞坏死（损伤小鼠数量100%）。
4讨论
大量研究表明，在应激状态下，机体的适应性行为主要由神经、免疫、内分泌以及其他系统共同参与调节[7]，因此，束缚应激对于机体整体的影响，应包括神经系统、内分泌系统、免疫系统和消化系统等系统。本实验成功建立小鼠低温水浸束缚应激小鼠动物模型。
本实验通过束缚应激诱导小鼠心肌损伤，模拟人体慢性心理应激所导致的内脏损伤,为下一步采用GC-MS技术进行代谢性小分子的筛选，试图发现新的防治和检测心肌应激性损伤的物质及其可能的可能机制提供基础。
参考文献
【1】 李莉等.儿茶酚胺在束缚应激大鼠肺损伤中的作用[J].河北医科大学学报, 2017,38(05):501-505.
【2】 王霞等.逍遥散对慢性束缚应激模型大鼠行为学和下丘脑弓状核NPY及受体Y1表达的影响[J].中国中西医结合杂志,2018,38(04),453-458
【3】 Vallès A, MartíO, García A, et al.Single exposure to stressors causes long-lasting, stress-dependent reduction of food intake in rats[J].Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol, 2000, 279(3):1138-1144.
【4】 Ulrich-Lai YM, Fulton S, Wilson M, et al.Stress expo-sure, food intake and emotional state[J].Stress,2015,18(4):381-399.
【5】 迟强,许鹏,卢山,等.慢性束缚应激动物模型生物学特征及相关机制研究进展[J].临床军医杂志,2013,41(12):1299-1301.
【6】 张放等，一种简易小鼠冷束缚应激模型制作装置，中国，实用新型专利说明书，CN203861377U，2014-10-08.
【7】 翟亚南,陈柏安,郭萌,等.束缚应激的研究进展[J].实验动物科学,2013,30(4):56-61.
作者简介：杨韵然（1987-），女，药师，从事应激性心肌损伤研究。
通信作者：臧林泉（1965-），男，博士，教授，从事肿瘤新标志物的研究、诊断试剂与新药研发工作。
论文作者:杨韵然1,庄佳毅1, 张业燊1, 臧林泉2（通讯作者）
论文发表刊物:《医师在线（学术版）》2019年第06期
论文发表时间:2019/5/22
标签：小鼠论文; 心肌论文; 损伤论文; 模型论文; 水浸论文; 低温论文; 空白论文; 《医师在线（学术版）》2019年第06期论文;