朱万琴, 顾伟, 董昕[1]2003年在《醋氨酚中毒致大鼠肝细胞的凋亡》文中认为目的 探讨醋氨酚中毒大鼠肝组织中Fas、Fas L的表达与醋氨酚药物剂量之间的关系 ,以及醋氨酚药物剂量与肝细胞凋亡之间的关系。方法 采用免疫组化方法对醋氨酚中毒大鼠肝组织中Fas、Fas L的表达进行检测 ;应用末端原位标记法对大鼠的肝细胞凋亡进行检测。结果 醋氨酚中毒剂量与Fas/FasL表达之间关系密切 (P <0 0 1 ) ,醋氨酚剂量越大 ,Fas/FasL表达越强。同时 ,醋氨酚中毒剂量与肝细胞凋亡之间也关系密切 (P <0 0 1 ) ,醋氨酚剂量越大 ,凋亡细胞数目也越多。结论 醋氨酚介导的Fas和FasL表达在肝细胞凋亡和坏死中起重要作用 ,肝细胞的直接自杀或自分泌及旁分泌杀伤机制 ,可能是醋氨酚中毒致肝细胞凋亡和坏死的重要发病机制之一。
顾伟, 朱万琴, 董昕[2]2002年在《Fas和Fas-L在醋氨酚中毒致大鼠肝损伤中的表达》文中指出目的 :探讨醋氨酚中毒大鼠肝组织中Fas和Fas 配体 (Fas L)的表达及其与醋氨酚药物剂量之间的关系。方法 :采用免疫组化方法对醋氨酚中毒大鼠肝组织中Fas和Fas L的表达进行检测。结果 :在绝大多数的大鼠肝组织中均有Fas和Fas L的表达 ,阳性率均为 93 .3 %。醋氨酚中毒剂量与Fas和Fas L的表达之间关系密切(P <0 .0 1) ,醋氨酚剂量越大 ,Fas和Fas L表达越强 ,呈显着正相关 (r =0 .42 5 / 0 .461)。部分阳性肝细胞发现同时有Fas和Fas L的表达 ,但并无淋巴细胞浸润。结论 :醋氨酚介导的Fas和Fas L表达在肝细胞凋亡和坏死中起重要作用 ,肝细胞的直接自杀或自分泌及旁分泌杀伤机制 ,可能是醋氨酚中毒致肝细胞坏死的重要因素之一。
顾伟[3]2003年在《醋氨酚中毒致大鼠肝细胞的凋亡》文中指出前言 凋亡(apoptosis)是细胞的主动性死亡，是机体清除感染、变异及衰老细胞而维持自身生理状态的主要调节方式之一。Fas是一种细胞表面受体，与相应配体结合后活化靶细胞固有的死亡程序，介导细胞毒性细胞(CTL)的细胞毒效应，使肝细胞凋亡。在醋氨酚中毒患者的肝组织中，肝细胞坏死和凋亡均可存在。目前，关于凋亡在醋氨酚中毒肝损伤的机制尚无报道。本研究主要是大鼠醋氨酚中毒时，检测肝组织中Fas／FasL的表达及醋氨酚剂量与Fas／FasL表达和肝细胞凋亡之间的关系，探讨Fas系统导致的肝细胞凋亡在醋氨酚中毒的可能作用及其相互联系。 实验材料和方法 1．醋氨酚中毒动物模型制备：49只Wistar雄性大鼠，体重280-320克，分别给予实验组大鼠腹腔内注射150、300、450mg／Kg体重的醋氨酚溶剂(用生理盐水配制)。给予对照组大鼠腹腔内注射等量生理盐水。观察大鼠表现，8h后每只大鼠分别以脊髓拉断法处死，立即剖开胸腔、腹腔，暴露心脏，剪开心包，剪开左心室，插入导管并固定，同时用手术剪切开右心耳放血，然后用PBS缓冲液从左心室导管注入，灌注速度由慢至快，经过体循环，从右心耳流出，重复上述过程，直至肝脏颜色由鲜红色变为灰白色，且从右心耳流出液变清澈。用组织剪将肝叶分离出来，置于10％福尔马林溶液中固定，经脱水、透明。浸蜡后制成石蜡标本，每份标本作连续切片进行系列检测。 2．检测： ①肝细胞Fas／FasL表达检测：石蜡切片常规脱蜡、水化，继以免疫组化试剂盒Onununostain SP kit）检测，步骤按说明书进行。最后常规DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。 ②肝细胞凋亡的检测：石蜡切片常规、水化，再用DNA末端原位标记染色试剂盒检测，按说明书步骤进行。最后常规DAB显色，苏木素轻染，中性树胶封固。 ③对照组：阳性对照用对照组肝组织按以上方法分别检测凋亡和Fs／FsL表达，阴性对照用PBS缓冲液分别代替Fs单抗，FasL多抗按上述方法进行对照检测。 3．结果判定标准： ①Fas／FaSL阳性细胞为胞浆和／或胞膜棕褐色染色，阳性程度分叁级：阳性细胞仅见于中央静脉周围、或少数在碎屑样坏死区为（＋h在碎屑样坏死区有较多数为（订厂在肝小叶中也有弥漫分布为（＋＋十八 ②肝细胞凋亡程度判定：细胞核呈棕褐色染色为阳性，无细胞核棕褐色染色为阴性。以凋亡指数（选择 1－3个400 X高倍阳性视野，计数200个细胞中阳性细胞，计算公式’：凋亡指数（AI）一凋亡阳性细胞创细胞总数X 100％）反映凋亡程度。 4。统计学处理：①Fs／FasL表达与剂量的关系采用计数资料的 X检验，两两比较采用 X’检验的分割方法，同时计算 Ken－dall’s值；②凋亡细胞数据采用秩和检验（Kru水al－wallistest＊凋亡细胞与Fas／FasL表达的关系采用Speannan秩相关分析方法（以上方法计算均采用SPSS10．0统计软件） ·二· 实验结果 1．肝细胞Fas／FasL检测：各种不同剂量的醋氨酚中毒标本的肝细胞大部分有Fas／FasL表达，检测的49份标本中，均有43份检出Fas／FasL表达，阳性率都为87．8％，二者都与药物剂量呈显着正相关性。 2．肝细胞凋亡的检测：各种不同剂量的酪氨酚中毒的49个标本，有43份检出凋亡细胞。经统计学处理，肝细胞凋亡程度与醋氨酚药物剂量有统计学意义＊＝28．977，P＜0．01人并且呈显着正相关。 讨 论 目前，细胞内钙稳态失调［‘］、炎症介质、氧自由基、脂质过氧化等学说都进一步从不同角度解释了酷氨酚中毒的可能发病机制。现在认为CTL细胞介导的细胞免疫反应可能与醋氨酚中毒的肝损伤有关。在许多肝病中（病毒性肝炎’‘’、肝癌”‘、酒精性肝病［’］、免疫性肝病［‘］＊ 的肝细胞中均有Fas／FasL表达，Fas抗原和FasL结合后引起的细胞免疫反应可介导肝细胞的凋亡和死亡。 本研究结果提示：醋氨酚中毒大鼠肝组织中高表达Fas／FasL，醋氨酚剂量越大，Fas厅asL表达越强。因此，醋氨酚中毒时，肝细胞表面表达Fas和FasL介导的细胞免疫反应，可能是促进肝细胞凋亡、参与损伤肝细胞的重要机制之一。细胞毒性T细胞＊TL）损伤肝细胞的的机制主要是C’YL的抗原特异的T细胞受体（TC）和CDS分子与靶细胞（肝细胞）表面的抗原一MHCI结合，激活细胞内信号，产生穿孔素和颗粒酶，通过 ·3·脱胞作用进人靶细胞，同时促进Fs和FsL的结合，两者共同激活蛋白水解酶类如航门蛋白酶（＊一P肪X破坏线粒体外膜，同时启动凋亡信号，活化细胞死亡程序，造成肝细胞死亡或凋亡［’］口 本研究还发现Fs／FasL可在同一肝细胞、同一区域中的不同肝细胞表达，同时，FsL主要表达于假小叶中心，该区无淋巴细胞浸润，而仅有肝细胞和间质细胞，说明FsL直接表达于肝细胞表面，而不仅限于淋巴细胞，故Fs系统也可能不依赖于CTL，而依赖于?
参考文献：
[1]. 醋氨酚中毒致大鼠肝细胞的凋亡[J]. 朱万琴, 顾伟, 董昕. 中华急诊医学杂志. 2003
[2]. Fas和Fas-L在醋氨酚中毒致大鼠肝损伤中的表达[J]. 顾伟, 朱万琴, 董昕. 中国医科大学学报. 2002
[3]. 醋氨酚中毒致大鼠肝细胞的凋亡[D]. 顾伟. 中国医科大学. 2003
标签：内分泌腺及全身性疾病论文; 醋氨酚论文; 和配体论文; 凋亡论文; 肝细胞论文;