摘要：在养殖过程中，滥用抗生素、大量使用合成等药物的现象越来越严重，兽药具有致癌、至畸、至突变等不良效用，危害人类健康。近年来由于滥用兽药引起的食品安全问题频发已逐渐成为人们普遍关注的一个社会热点问题。。一些化学合成药物在畜牧水产养殖业中使用较多，随便使用这些药物是很容易使水产品受到污染的。在这种情况下，人们吃了这种受到污染的肉类食物，就会使得这些毒素在人体内积累，会使人体产生一定的抗药性。随着兽药在我国实际生产中的广泛应用，人们对其危害有了更多的认识，这些肉类食品中所残留的兽药也是目前食品安全中所关注的重要内容。因此，对畜牧水产养殖业的相关产品进行严格的检测，能够保证肉类食品的质量。本文建立了高效液相色谱-串联质谱HPLC-MS/MS同时测定水产品中喹诺酮类、大环内酯类、磺胺类、磺胺增效剂、林可胺类、硝基咪唑类、类和多肽类8类共38种限用兽药残留的检测方法。
关键词：高效液相色谱；串联质谱；兽药残留
本试验同时测定鳗鱼、鳙鱼和小龙虾中的类药物残留，在检测的过程中，检测的药物种类虽多，但前处理方法简单并不需要特殊的实验装置来辅助实验，检测周期短且成本低，从而为水产品的大量检测，提供了更加简便的方法。
一、实验部分
1.1实验所用的仪器和试剂
实验仪器：质谱仪、高效液相色谱仪、Waters C3色谱柱、IKAT25数显型高速分散机、低温高速离心机和氮吹浓缩仪。
实验试剂：甲醇、正已烷、甲酸、冰乙酸、无水硫酸钠，以上试剂均为分析纯，乙腈、甲酸为色谱纯。
1.2样品前处理
样品的提取及净化：称5.00g样品置于50mL聚丙烯离心管中，加入约5g无水硫酸钠及15mL1%的乙酸乙腈溶液，用高速分散机进行提取，离心（5000r/min，5min），收集上清液。沉淀再用20mL1%的乙酸乙腈溶液按照上述步骤重复提取一次，离心，合并上清液，用提取液将其定容到25mL，混合均匀，将其放到-80℃的冷冻机中冷冻1小时。准确吸取7.0mL的提取液，加入15mL正乙烷，离心10分钟，弃去上层正己烷，乙腈层经氮气吹干后加入1mL样品溶解液进行溶解，再加入3mL正已烷，混匀，吸取下清夜过0.22μm滤膜备用。空白基质溶液制备：称阴性样品5.00g，按照上述操作步骤进行。
1.3仪器条件
色谱柱柱温30℃，流速为0.3mL/min，进样量10μL，流动相A为乙腈溶液，B为0.1%的甲酸水溶液。质谱条件：多反立监测采集方式；雾化气圧力:60psi；辅助气圧力:60psi；气帘气压力:20psi；离子源温度:450C；MS1及MS2均力单位分辨率；碰撞气体速度：中流速；去簇电压：50-105V。
二、结果与讨论
2.1对样品提取方法进行优化
提取方法是水产品兽药残留中的关键点，但目前尚未发现对多种兽药进行同时提取的有效方法。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆研究发现，用乙酸乙酯溶液对其进行提取，油脂较多，提取的效果不佳。通过对提取溶剂进行研究发现，乙腈提取效果最佳，乙腈相对较于其他提取剂可以有效的沉积蛋白且油脂的提取率大大降低。因此本实验采用乙腈作为提取溶剂。经过实验可以发现，纯乙腈的提取效率并不高，一些兽药是具有酸碱两种性质，但是在酸性提取剂中更容易被提取出来。但有些兽药在强酸提取液中不稳定极易分解，因此所使用的酸性提取液浓度不应该太大。
无水硫酸钠有脱水的作用，样品提取过程加入无水硫酸钠能够提高兽药在有机相的纯度，并可防止水溶性的杂质进入有机相可起到净化的效果。无水硫酸钠可使蛋白变性可防止样品结块，从而影响提取的效果。
2.2质谱与色谱条件的优化
对资生堂CAPCELL PAK MG I Cig(100 mm x2. 0 mm， 3 μm)、Waters cosmoil5C1g-MS-I(150mmx2.0mm，3μm)和LunaC1g(2)100A(150mmx 2.0mm，3μm)三种色谱柱进行比较可以发现，这三种色谱柱的分离效果并没有很明显的不同，但是C3色谱柱中的压力比较稳定，对多种化合物的色谱分离效果好。所以说在实际分析的过程中应该使用WatersC3色谱柱。去簇电压和碰撞能量的大小，能够对定量离子的响应有非常明显的作用，同时与所使用方法的合适性有着很大的关系。在实际提取的过程中，对38种兽药组分进行去簇电压和碰撞能量以及入口电压和出口电压进行不断地优化，使用多种检测的方式，对上述四个压力的相关电压值进行一定的选择，可以发现入口电压和出口电压的电压值基本稳定在8-14V之间。
根据待测的兽药相关化学性质，分别将38种标准样品的储备液进行稀释，将其配制成标准工作曲线。在设定仪器条件下，将待测物质的质谱参数进行优化。然后根据所要测量的药物的相对分子质量，选择一个合适的去簇电压对其进行一个有效的监测。然后优化碰撞能量，对其进行一定的分析，选择能量值最大的且干扰性最小的粒子对进行实验。
2.3合理验证方法
选取鳗鱼、鳙鱼和小龙虾三个样品，做四水平七平行实验，每种组分的平均回收率范围为30%-123%，每一天内的回收率值为：2.3%-30.1%，日间日间的回收率值为1.8%-27.6%。多种兽药同时提取，由于要兼顾每种兽药的化学性质，因而相较于单一或者同类兽药的回收率并不高，但本实验的检测方法是一种快速的检测方法，美国食品药物管理局中规定：如所测兽药均未检出，其回收率的高低范围可以进行一定的放宽，因而这种快检方有一定的使用价值。
三、结束语
在本次研究中，以小龙虾等水产品作为研究的对象，使用1%的乙酸乙腈溶液作为提取溶剂，用正己烷进行净化除油脂，将其放入-80℃下冷冻1小时对其进行净化，使用高效液相色谱-串联质谱法，同时测定水产品中兽药残留的分析方法。这种检测方法简单快速，且准确率比较高，是实验的成本有效降低，能够提高水产品中兽药残留的检测效率。
参考文献
[1]熊春兰,郭平,占春瑞,刘光斌,万建春.高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中8类38种兽药残留[J].分析测试学报,2013,32(02):193-198+ 204.
[2]隋涛,付建,李晓玉,郭海霞,娄喜山.超高效液相色谱串联质谱法同时测定水产品中6种兽药残留[J].食品科学,2011,32(10):203-207.
论文作者:许立兴,王利霞,吴玉莹
论文发表刊物:《基层建设》2019年第31期
论文发表时间:2020/4/20
标签：兽药论文; 色谱论文; 水产品论文; 样品论文; 电压论文; 高效论文; 回收率论文; 《基层建设》2019年第31期论文;