（重庆市璧山区人民医院；重庆402760）
【摘要】目的：以乙型肝炎病毒（HBV）DNA 为核心指标探寻 2016 年以来渝西地区HBV感染流行情况和演变轨迹，以期为制定针对性的 HBV 感染防治策略提供客观参考依据。方法：使用荧光定量PCR对2016~2018年渝西地区7307份乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性的血清标本进行HBV DNA定量检测，分析在HBsAg阳性人群中HBV DNA阳性率和病毒载量等状态。结果：乙肝病毒载量的中位数性别之间有统计学差异（P<0.05）；但男性及女性病毒载量的中位数与时间无明显相关性（P>0.05）；此外HBV DNA检测阳性率随着时间逐渐下降。结论：以 HBV DNA 为指标能够了解渝西地区HBV 现患感染的流行情况，为制定针对性的 HBV 感染防治策略提供了更为客观、可靠的参考依据。
关键词：乙型肝炎病毒，病毒载量，流行病学，研究
乙型肝炎病毒（HBV）感染是当前最常见的慢性病毒感染性疾病之一，具有病毒复制活跃、传染性强、肝脏损坏严重等特征，以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害[5]。目前，临床上HBV感染主要是通过检查血清标志物进行确诊，HBsAg呈现阳性说明乙肝病毒存在，但是否需要进行治疗须由HBV DNA来决定，因此HBV DNA 阳性是乙肝病毒感染的直接证据, 同时能够反映乙肝病毒的复制水平[3]。本研究依托璧山区人民医院，以渝西地区的HBV感染阳性患者为对象，对年龄、性别等相关信息进行详细描述，通过传统的血清免疫学标志物HBsAg检测分析，结合荧光定量PCR测定HBsAg阳性人群HBV DNA阳性率和病毒载量。以HBV DNA为核心指标了解渝西地区HBV感染的流行情况和发展趋势，以期为制定HBV感染防治策略提供更多客观、可靠的依据。
1 材料与方法
1. 1 样本
收集2016年8月至2018年6月重庆市璧山区人民医院HBsAg阳性患者的血清标本7307例。
1.2样本采集
用一次性的针头抽取病人静脉血2 ml，置于灭菌的一次性试管中室温自然凝固（不用肝素抗凝），或2000-4000 rmp离心20分钟，标本采集后置于-20℃保存待检。
1.3主要仪器与试剂
江苏天隆公司的四通道实时荧光定量PCR仪（TL988），江苏天隆生物科技有限公司的乙肝病毒核酸提取及扩增试剂。
1.4HBV DNA检测方法与原理
采用核酸释放剂快速裂解、释放血清或血浆样本中的HBV-DNA，利用针对HBV核酸保守区设计的一对特异性引物、一条特异荧光探针，配以PCR反应液，在荧光定量PCR仪上，应用实时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现HBV-DNA的定量检测。
1.5HBV DNA定量检测及结果判定
本实验建立荧光定量PCR法进行HBV-DNA定量检测。PCR反应体系共40μl：反应液混合液35.4μl，酶混合液0.6μl，DNA模板4ul。反应条件为95℃ 3分钟，94℃ 15秒-〉60℃ 30秒共40个循环。检测荧光通道：检测样本（FAM）,内标（HEX/VIC）。阴性标本Ct值无数据且内标Ct值< 45,检测样本HBV DNA≥10IU/ml均判定为阳性。
1.6数据分析与统计
本研究中所有数据使用SPSS 19.0软件行统计分析，HBV载量呈偏态分布，以中位数表示，组间比较采用Mann-WhitneyU检验，HBV DNA检测阳性率比较采用χ2检测，多组分间的差异有统计学意义，p值小于0.05则判定为有统计学意义。
2 结果
2.1HBV DNA阳性人群分布特征
2.1.1性别分布
2016年，2017年，2018年男性HBVDNA载量中位数分别是6.1x104 IU/ml, 7.1x104 IU/ml ， 5.2x104 IU/ml ；女性HBVDNA载量中位数分别是4.9x104 IU/ml, 3.7x104 IU/ml , 4.1x104 IU/ml,由此可知男性病毒载量的中位数高于女性病毒载量的中位数，差异具有显著性差异（P＜0.05），但男性及女性病毒载量的中位数与时间无明显相关性（P>0.05）（见表一）。
2.1.2年龄分布
2016年，2017年，2018年检测HbsAg阳性人群中小于15岁只有28人，统计意义不大。16 ~ 25 岁年龄组HBV DNA 阳性率最高为60%,、60%、55.46%（见表二），16 ~ 25 岁、25~ 35岁年龄组HBV DNA 阳性率高于其他年龄组，差异有统计学意义（x2=7.359,P ＜ 0.05）（见表二）。16 ~ 55岁年龄段，HBV DNA阳性率随着年龄的增长有下降趋势（见表二）。将2016年到2018年HBV DNA检测阳性率进行分组比较，HBV DNA检测阳性率随着时间逐渐下降，在2018年达到48.11%，差异具有统计学意义（x2=19.856，P ＜ 0.05）。
3讨论
乙型肝炎由 HBV 感染所致传染病，其病理过程是从肝细胞的炎症、坏死及纤维化，进而演变成肝硬化或肝细胞癌，是严重威胁人类生命健康的全球性传染病之一[6]。HBV DNA 能够反映了乙肝病毒的复制水平，HBV DNA 阳性是乙肝病毒感染的直接证据[2,8]，其可用于监测抗病毒药物的疗效，指导临床用药血循环中 HBV DNA 水平与 HBV 感染者病情和预后的关系密切，尤其是急
性和慢性乙型肝炎患者。此外，当前乙型肝炎治疗指南中通常认为 HBV DNA> 105IU/mL 肝炎处于活动期，并且推荐开始药物治疗[1]。目前，HBV DNA 的检测主要用于慢性病毒性感染的确定性诊断，并且是指导干扰素、核酸类药物对病毒性肝炎的治疗和疗效判断的重要指标[9]。荧光定量 PCR 法检测血清 HBV DNA 水平是 HBV 感染情况的最直接参考指标，其检测灵敏度、特异性较高，且能直接、动态地反映 HBV 的复制状态及传染危险性[3,7]，广泛用于乙型病毒性肝炎的诊断、抗病毒疗效的监测以及预后的评估。
本研究通过法检测 荧光定量 PCR 检测 HBV DNA，阐述了2016年、2017 年、20118 年渝西地区 HBsAg 阳性人群 HBV DNA 检测阳性率一直在 48%以上，但HBV DNA检测阳性率随着时间逐渐下降。2018 年 HBV DNA 检测阳性率及病毒载量中位数均为最低，这提示抗病毒治疗能有效减低病毒载量，其结果对于控制本地区乙型肝炎患者的病情进展、减少不良预后和传染性具有显著的流行病学意义。2016年，2017年，2018年男性HBVDNA载量中位数明显高于女性病毒载量中位数，但男性及女性病毒载量的中位数与时间无明显相关性，16 ~ 25 岁、25~ 35岁年龄组HBV DNA 阳性率高于其他年龄组，16 ~ 55岁年龄段，HBV DNA阳性率随着年龄的增长有下降趋势，这可能是因为随着年龄的增加乙肝病史的延长，接受抗病毒药物治疗的机会也会更多，有效的抗病毒治疗可使病毒载量持续下降然后维持在低水平，或低至小于检测下限，与以前的研究一致[4]。
综上所述，本研究分析了渝西地区 HBsAg 阳性人群 HBV 感染的分子流行病学特征，提示常规检测 HBV DNA 非常必要。HBV DNA 检测能够准确的反映病毒的复制情况和病毒载量，对疾病诊断、治疗方案的选择和疗效观察都有重要的应用价值。以 HBV DNA 为指标能够了解渝西地区HBV 现患感染的流行情况，为制定针对性的 HBV 感染防治策略提供了更为客观、可靠的参考依据。
参考文献
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论文作者:谭海波 殷明春通讯作者
论文发表刊物:《医师在线》2019年7月14期
论文发表时间:2019/11/5
标签：中位数论文; 病毒论文; 阳性论文; 定量论文; 荧光论文; 乙型肝炎论文; 阳性率论文; 《医师在线》2019年7月14期论文;