（1.辽宁中医药大学 辽宁沈阳 110847；2.辽宁省肿瘤医院 110042）
摘要：目的 讨论康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌H1975细胞株增殖作用的影响。方法 应用MTT法计算康莱特注射液作用于人肺腺癌H1975细胞株48h的半数抑制浓度（IC50），检测康莱特注射液（5、10、20、40、80、100、160μl/ml）、吉非替尼（0.1、0.5、1.0、5、10、25、50μmo1/L）以及康莱特注射液（40μl/ml）联合吉非替尼（0.1、0.5、1.0、5、10、25、50μmo1/L）作用于人肺腺癌H1975细胞株24、48、72h的增殖抑制率。结果 康莱特注射液作用于人肺腺癌H1975细胞株48h的（IC50）为40μl/ml。康莱特注射液联合吉非替尼作用于H1975细胞的增殖抑制率高于两单药组和对照组，且呈时间和浓度依赖性（P<0.05）。两者的联合作用在一定浓度范围内呈现出协同的抗瘤效果。
关键词：康莱特注射液；吉非替尼；肺腺癌；增殖
肺癌是目前发病率和死亡率最高的恶性肿瘤[1]。肺癌中非小细胞肺癌（NSCLC）约占80-90%。由于肺癌早期大多无特异性症状，而大多数患者确诊时已是失去手术治疗机会的中晚期。传统上肺癌的治疗以化疗为基石，但随着分子生物学的不断发展，分子靶向治疗应运而生。吉非替尼是最早应用于治疗非小细胞肺癌的靶向药物之一。康莱特注射液是一种由薏苡仁提取物制成的中药制剂，研究表明其对多种肿瘤细胞均能有较强的杀伤及抑制作用。本研究通过检测吉非替尼与康莱特注射液联合作用于人肺腺癌H1975细胞株，分析其对细胞增殖抑制作用的影响。
1 材料与方法
1.1 细胞株及试剂
人肺腺癌H1975细胞株由中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库提供。康莱特注射液（100ml：10g/瓶）由浙江康莱特药业有限公司提供；吉非替尼（250mg/片）由英国阿斯利康制药公司提供。上述药品均按说明书的保存方法保存，现用现配。
1.2 细胞培养
将H1975细胞置于终浓度为10%胎牛血清、青霉素100U/ml、链霉素100U/ml的RPMI-1640培养液中，于37%，5%CO2饱和湿度条件下培养。倒置显微镜下观察细胞呈贴壁生长，形态良好无退化，待其铺满瓶壁70%～80%时，以0.25%胰蛋白酶消化传代培养，每日或隔日换液。
1.3 吉非替尼原液制备
吉非替尼250mg/片置于无菌瓶中制成粉末，并溶于22.37ml二甲基亚飒（DMSO）中，于摇床震荡至完全溶解，此时配成25mmol/L的药物原液，过滤摇匀后，实验前取0.1ml母液，加入100ml无血清RPMI-1640培养液稀释成25μmol/L备用，置于-20℃保存，每次实验中DMSO的最高终浓度<0.03%。
1.4 MTT法检测细胞增殖
取已制备好的单细胞悬液，接种于96孔培养板内，每孔100ul。标准条件培养过夜后，加入相等体积的培养液或含实验药品的培养液，实验药物浓度分别为：吉非替尼：0.1μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、25μmo1/L、50μmol/L；康莱特注射液：5μl/ml、10μl/ml、20μl/ml、40μl/ml、80μl/ml、100μl/ml、160μl/ml，对照组不加任何药物处理。每孔100ml，各组均设6个复孔。置于37℃恒温，5%C02的饱和湿度培养箱中继续培养24h、48h、72h，于培养结束前4小时，各孔加入（5mg/ml）的MTT溶液（MTT溶于磷酸盐缓冲液）20μl，培养结束后，弃上清，每孔加入DMSO150μl，避光震荡10分钟，于全自动酶标仪检测492nm处各孔吸光值（A），每组独立实验均至少重复5次。按公式1计算抑制率（IR）；按公式2计算联合指数（Q）。
3.讨论
当今，呼吸系统恶性肿瘤发病率占到了我国恶性肿瘤发病率的首位。非小细胞肺癌（NSCLC）占总数约80%-90%，因其早期症状隐匿，就医确诊时已处于局部晚期或出现了远处转移。随着分子生物学的发展，分子靶向药物逐渐成为了临床治疗晚期非小细胞肺癌的首选药物。其中表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）类药物最为典型如（吉非替尼、厄洛替尼等）。
吉非替尼其作为分子靶向治疗的药物，更是近年来非小细胞肺癌靶向治疗的代表性药物之一[2]。中医中药一直是我国瑰宝之一，其独特的辨证论治的理念更是在多种疾病治疗中拥有一席之地。康莱特注射液为薏苡仁的提取物，具有渗湿利水、健脾止泻、清热排脓之功效[3]。其已被证实在原发性非小细胞肺癌、原发性肝癌以及多药耐药细胞等的治疗上有其独特作用。在赵娜4]等人进行的康莱特注射液联合吉非替尼对晚期NSCLC患者疗效的研究中显示，联合组在有效率和疾病控制率以及Karnofsky评分改善率和稳定率上均优于吉非替尼单药组，且联合治疗组患者腹泻、皮疹和肝肾功能损害等毒性反应的发生率与单药吉非替尼组相比未见明显差异，表明康莱特注射液与吉非替尼联合用药是较为安全的。
参考文献
[1]Chen W，Zheng R，Zhang S，et al. Annual report China，2010[J].Chinese journal of cancer research，on status of cancer in 2014，26（1）：48-58.
[2]Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics[J].CA：a cancer journal for clinicians，2011，61（2）：69-90.
[3]张明发，沈雅琴.薏苡仁油治疗肺癌的临床研究进展[J].中国执业药师，2009，（07）：22-25.
[4]马超，崔学军，张铭.吉非替尼联合康莱特注射液治疗晚期非小细胞肺癌系统评价[J].辽宁中医药人学学报，2013，15（4）：73-76.
论文作者:高欣1,白静慧2通讯作者
论文发表刊物:《航空军医》2017年第19期
论文发表时间:2017/11/22
标签：注射液论文; 莱特论文; 肺癌论文; 细胞株论文; 细胞论文; 腺癌论文; 作用论文; 《航空军医》2017年第19期论文;