（川北医学院第二附属医院 四川绵阳四0四医院 621000）
【摘 要】探讨菌阳肺结核患者治疗前后及转阴与未转阴肺结核患者血清TNF-α、IL-2、 IL-4、IL-6、IL-8水平变化及细胞凋亡率变化及临床意义，阐明细胞因子在结核发病中作用及与细胞凋亡相关性。方法：采用ELISA法检测80例菌阳肺结核患者和20名正常人及菌阳肺结核治疗后65例转阴及15例未转阴肺结核患者血清TNF-α、IL-2、 IL-4、IL-6、IL-8水平变化及CD4+T细胞凋亡率改变，并检测各组肺结核患者细胞凋亡率变化。结果：菌阳肺结核组治疗前后血清及转阴肺结核组与未转阴肺结核组TNF-α等细胞因子水平及CD4+T细胞凋亡率有统计学意义，且上述患者临床症状改善，痰菌阴转，胸片病灶吸收好转、空洞缩小。结论：细胞因子TNF-α、IL-2、 IL-4、IL-6、IL-8在菌阳肺结核发病、转阴中起重要作用，与CD4+T细胞凋亡相关。
【关键词】肺结核；细胞因子；细胞凋亡
【中图分类号】R521 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）8-0584-02
To study Clinical Immunology changes in sputum positive pulmonary tuberculosis patients before and after treatment
Zhong-weigao Chen-aiqin Liu-bin
（Second Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College）
【Abstract】To study the TNF-α, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8 levels and apoptosis rate in sputum positive pulmonary tuberculosis patients before and after treatment and serum negative and not negative tuberculosis, Result：There were significant differences for the values of five cytokines in TB group before and after treatment and the control group，and also the same as CD4+ T cell apoptosis；There were significant differences for the values of five cytokines in TB group before and after treatment and the control group，and also the same as CD4+ T cell apoptosis. after 2 months of standard treatment in the TB group. and the above improvement in clinical symptoms, sputum conversion, chest lesions improved absorption, reduced empty. Conclusion: the cytokine plays an important role in the sputum positive pulmonary tuberculosis, tuberculosis was negative, clearly associated with CD4+ T cell apoptosis.
【Key words】tuberculosis ; cytokines ; apoptosis
结核病是由T细胞参与与免疫反应密切相关慢性呼吸道传染病，是全球关注公共卫生和社会问题。细胞免疫反应在结核发病过程占主导地位。IL及TNF-α等细胞因子(CK) 参与结核病免疫应答及发病过程[1]。一定程度上CK可反映患者免疫状态，对预后，药物疗效评估有重要意义。IL、TNF-α等CK有广泛生物学活性，在肺结核发病中起重要作用。另研究表明肺结核发病、发展与CD4+、CD8+细胞凋亡密切相关，且参与细胞免疫过程[2、3]。本研究通过检测初治肺结核菌阳患者标准强化治疗前后IL - 2、IL-4、IL-6、IL-8及TNF-α水平变化及细胞凋亡情况，揭示CK、细胞凋亡在肺结核发病中作用机制及二者相互关系，为更好有效防治肺结核及耐药结核提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选取我科2013年1～11月肺结核患者80例。年龄分布范围20～65岁。中青年结核患者52例，年龄20～45岁；老年结核患28例，年龄60～70岁。正常对照组80例，其中中青年健康献血员50例年龄20-45岁，老年健康献血者30例年龄60-70岁。
入选标准：肺结核菌阳住院患者经临床、X线、细菌学、纤支镜刷检或经皮肺穿刺涂片检查确诊。剔除标准：①合并急慢性感染疾病者；②对某一种或几种抗结核药物过敏；③合并严重肺、脑、肝、肾等脏器疾病；④ 合并甲状腺功能异常、结缔组织病、恶性肿瘤及血液系统疾病；⑤ 排除妊娠、哺乳期妇女[4]。
疗效判断标准：住院治疗后胸部影像学检查肺部空洞缩小30%以上或闭合，病变范围缩小，病灶密度增加或钙化，痰菌阴转标准指连续3次痰抗酸染色均阴性，或者痰菌培养1次阴性[4].
实验室检查：流式细胞仪测血中T细胞亚群（CD4/CD8）治疗前后变化，ELISA检测血中IL-2、IL-4、IL-6、IL-8 及TNF-α水平，试剂盒均购买于Sigma公司，测定方法按说明书进行试剂配制与加样，结果由放射免疫计数器读出。
1.2 方法
采外周静脉血3ml，注入试管中、分离血清，冻存待测。测定前置室温或冷水中复融， 4℃3000r／min离心5min。取上清液测定。
治疗方案：肺结核患者入院后按照标准化疗方案治疗。
1.3 人外周血单个核细胞(PBMCs)分离
抽取结核患者和志愿者静脉血，抗凝、稀释，离心，洗涤获取PBMCs后，用RPMI1640完全培养液调整PBMCs浓度为2×106细胞／ml。
1.4 淋巴细胞体外培养：将PBMCs培养在96孔培养板中，每孔200ml，加入anti-CD3和anti-CD28，每组设3个复孔，37℃培养箱培养72h，收集细胞培养。
1.5 凋亡检测 按照说明书进行。
1.6 统计学处理：采用spss13.0软件对实验数据进行统计学处理，齐性检验，计量资料采用t检验，P<0.05具统计学意义
2 结果
菌阳肺结核组治疗前后血清IL-2等CK水平比较有明显统计学意义（P<0.05），对照组与结核组血清细胞因子比较有明显统计学意义（P<0.05），而对照组与结核组治疗后比较血清细胞因子无统计学意义（见表1）。80例菌阳肺结核患者，转阴为65例，未转阴15例，转阴与未转阴肺结核患者血清细胞因子水平差异显著（见表2）。细胞凋亡检测结果表明菌阳肺结核组治疗前后细胞凋亡率比较有统计学意义（P<0.05），菌阳肺结核组治疗前与对照组比较有统计学意义。
3 讨论：
肺结核是结核分枝杆菌引起慢性传染病；细胞因子是机体多种细胞分泌小分子蛋白质，在结核发病过程起重要作用，IL-2、IL-4、IL-6、IL-8及TNF-α是体内重要细胞因子，在结核发病、发展及愈后发挥重要作用[6]。凋亡是机体清除感染、变异以及衰老细胞维持正常生理状态调节方式之一。结核病时CD4 、CD8 T细胞、中性粒细胞等均可发生凋亡。本研究检测结核治疗前后细胞因子水平变化及细胞凋亡率及结核治疗转阴与未转阴细胞因子水平及凋亡率变化，为进一步揭示结核发病机制提供实验依据。
研究发现，肺结核发病到进展期、出现空洞可能与Th1/T h 2失衡有关。Thl主要为细胞介导保护性免疫反应促进机体向自愈方向发展；Thl细胞主要分泌IL-2和干扰素等细胞因子，激活单核巨噬细胞，杀灭结核杆菌，在结核分枝杆菌感染中起保护性作用，本研究发现初治涂阳结核患者IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、TNF-α值与正常人及强化治疗2个月后水平差异有显著性，IL一2水平偏低，表明机体细胞免疫机能受到一定抑制。初治涂阳肺结核患者血清IL-4等CK增高，提示体液免疫活化，Th l/T h 2失衡，与有关研究较一致[7]，说明IL-4等CK参与肺结核发病过程，释放与表达失调可能是肺结核病理变化发生发展重要因素。随着肺结核强化治疗有效，痰菌转阴患者IL-4等CK水平接近对照组，表明免疫机能向正常方向转变，Thl/Th2失衡得到纠正。另CD4+T细胞在细胞免疫中起主要作用[7]，未转阴结核组细胞CD4+T细胞凋亡率明显比转阴组高，表明CK不但参与免疫过程，也与CD4+T细胞凋亡、愈后密切相关,具体机制待进一步研究。
参考文献：
[1]Andrea M,etc.The role of cytokines in the initiation, expansion, and control of cellular immunity to tuberculosis Immunol Rev.2008 Dec;226:191-204.
[2]Mulongo M1.In vitro infection of bovine monocytes with Mycoplasma bovis delays apoptosis and suppresses production of gamma interferon and tumor necrosis factor alpha but not interleukin-10.Infect Immun.2014 Jan;82(1):62-71.
[3]Chakraborty P1,etc.Drug resistant clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis from different genotypes exhibit differential host responses in THP-1 cells.PLoS One.2013 May 7;8(5):
[4]中华医学会结核病学分会.肺结核诊断和诊疗指南[J].中华结核和呼吸杂志，2001，24（2）：70-74
[5]Cooper AM1. The role of cytokines in the initiation, expansion, and control of cellular immunity to tuberculosis. Immunol Rev. 2008 Dec;226:191-204.
[6]Kidd P. Th1/Th2 balance: the hypothesis, its limitations, and implications for health and disease. Altern Med Rev. 2003 Aug;8(3):223-46.
[7]O'Garra A1. The immune response in tuberculosis.Annu Rev Immunol.2013;31:475-527.
论文作者:仲维高,陈爱琴,刘冰
论文发表刊物:《河南中医》2015年8月供稿
论文发表时间:2016/6/1
标签：肺结核论文; 细胞论文; 结核论文; 细胞因子论文; 患者论文; 凋亡论文; 转阴论文; 《河南中医》2015年8月供稿论文;