朱炫[1]2007年在《氯霉素及盐酸克伦特罗残留ELISA检测方法研究》文中提出氯霉素(chloramphenicol，CAP)是一种广谱高效的抗菌剂，它可以和大多数药物和饲料添加剂混用，在喂养过程中稳定，药效不会降低。由于该类药物的广泛使用，使其在动物源性食品上的检出率越来越高，氯霉素在食品中残留会引起严重的后果，如可能抑制人体骨髓造血功能从而引起再生性障碍性贫血症等。而盐酸克伦特罗(clenbuterol hydrochloride，CL)是一种β2一肾上腺素受体激动剂。最初在临床上主要用于防治人、畜支气管哮喘和痉挛。因其具有改变动物的营养代谢，降低胴体脂肪，提高瘦肉率，同时使动物增重，提高饲料使用率的作用被不法商人用于做饲料添加剂。然而β-激动剂在动物体内的蓄积性残留会对食用者的食用安全构成潜在威胁：人类食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心悸、肌肉震颤、呕心呕吐、发热寒战等临床症状，特别对心脏病、糖尿病、高血压等病人危害更大。因此，研究用于氯霉素和盐酸克伦特罗的ELISA检测试剂盒，对于保护消费者利益，对于食品安全检测以及国际贸易有重要的意义。本研究对盐酸克伦特罗和氯霉素的人工抗原的合成以及ELISA检测方法的建立等进行了研究，得出如下研究结果：盐酸克伦特罗和氯霉素分别与载体蛋白-牛血清白蛋白(BSA)通过重氮法合成了免疫抗原，经紫外、蛋白电泳实验证明半抗原与载体蛋白偶联成功，同时使用相同方法与载体蛋白卵白蛋白(OVA)合成了包被抗原。合作单位用合成的免疫抗原制备了氯霉素鼠单抗，盐酸克伦特罗兔多抗，用合作单位制备的氯霉素鼠单抗，盐酸克伦特罗兔多抗对氯霉素间接竞争ELISA检测方法进行了研究，得到上述ELISA检测方法的灵敏度、线性范围、线性拟合并对检测步骤、检测时间等因素进行了优化，结果显示较合适的检测条件为：鼠单抗使用浓度为稀释1600倍，包被抗原稀释100倍并且4℃包被12小时可获得较好的试验结果。其他条件通过优化实验，最终选择最佳包被时间为4℃12h，一抗最佳作用时间为60min，二抗最佳作用时间为60min，底物作用时间为15min。对底物配方进行优化，得到TMB和H202的最佳组合为450μLTMB(10mgTMB溶于2mLDMSO)+5μL的H202。用优化后的间接竞争ELISA检测方法测得氯霉素最低检测限0.3837ng/mL，接近到欧盟法规(EC-decisions 2003/181/EC and 2004/25/EC)规定的0.3ng/mL。同时，盐酸克伦特罗也采用间接ELISA方法其兔多抗浓度为稀释8000倍，包被抗原稀释100倍后，包被时间为4℃12h。其他条件通过优化实验，最终得到一抗最佳作用时间为60min，二抗最佳作用时间为40min，底物作用时间为15min。对底物配方进行优化，得到TMB和H202的最佳组合为400μLTMB(10mgTMB溶于2mLDMSO)+7μL的H202。用优化后的直接竞争EMSA检测方法测得盐酸克伦特罗最低检测限1.52ng/mL。
成亚宁[2]2007年在《生猪屠宰过程中盐酸克伦特罗检测方法研究》文中提出盐酸克伦特罗是一种β肾上腺素,长期或超标滥用盐酸克伦特罗,其危害不仅降低了动物产品品质,而且危害人体健康。国内外已建立了多种盐酸克伦特罗检测方法。目前常用的检测方法主要有酶免疫分析法、高效液相色谱法及气相-质谱联用分析法。对于复杂的生物体系,酶免疫分析法存在假阳性;高效液相色谱法灵敏度低且易受样品中其他组分的干扰;气质联用法灵敏度高,但需要衍生化,样品前处理复杂。因此,对于生猪屠宰加工过程中盐酸克伦特罗检测方法研究很有必要。本文比较了不同提取方法的提取效果,确定了用乙睛-盐酸溶液从样品中提取克伦特罗,用正己烷除去脂性及脂溶性杂质和用叁氯甲烷除去水相,再浓缩至近干用甲醇稀释后上机检测。这种前处理过程操作简便,同时回收率比较高,能够满足盐酸克伦特罗的测定要求。对高效液相色谱法和液相色谱-质谱联用法测定盐酸克伦特罗进行了比较。高效液相色谱法的检出限为20μg/kg,灵敏度低。液质联用仪器的检出限是2μg/kg,灵敏度高,分离效果好,可以大大的提高检测的稳定性、准确性、重现性、检出限。对色谱条件和质谱参数进行了优化,建立了一种准确、快速的盐酸克伦特罗检测方法。从检测时间、检测成本、检测限及仪器特点等方面对高效液相色谱法、液质谱联用法、酶联免疫试剂盒和快速检测卡四种方法进行比较。快速检测卡检测迅速快捷,但是检测限比较高,假阳性率较高,适合生猪宰前现场大批量检测。酶联免疫试剂盒可批量检测40多个样本,检测时间为3h,成本低,存在假阳性现象,适于生猪宰前尿检的筛选法。对于宰后组织样本的检测,液质谱联用法由于检测准确、快速,是盐酸克伦特罗定性、定量的确证方法。
刘萌[3]2014年在《盐酸克伦特罗在绵羊体内蓄积消除规律及残留预测模型的研究》文中认为本研究分为叁部分,第一部分为运用同位素内标法建立绵羊体液(血浆、尿液)及组织(肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉、毛发)中盐酸克伦特罗(CL)残留的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法；第二部分为研究绵羊体液(血浆、尿液、唾液)及组织(眼睛、肝脏、肺脏、肾脏、心脏、肌肉、毛发)中CL的残留与消除；第叁部分为研究血浆与组织(肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉)及组织间CL残留的预测模型。一、运用同位素内标法建立了绵羊体液(血浆、尿液)及组织(肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉、毛发)中CL残留的LC-MS/MS检测方法。样品在前处理过程中加入盐酸克伦特罗-D9(D9-CL)内标化合物,经过提取、净化、过滤,采用LC-MS/MS检测,检测结果通过内标定量法计算获得。优化后,血浆中CL的线性范围为0.05～200ng/mL,检测限为0.01ng/mL,定量限为0.03ng/mL,平均回收率为109.42%112.34%,RSD低于2.69%；尿液中CL的线性范围为0.15～200ng/mL,检测限为0.04ng/mL,定量限为0.13ng/mL,平均回收率为94.65%～104.37%,RSD低于8.76%；组织样品肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉中CL的线性范围相同,均为0.15～100ng/g,检测限为0.05ng/g,定量限为0.15ng/g,平均回收率为95.29%～132.03%,RSD低于13.90%；毛发中CL的线性范围为0.5200ng/g,检测限为0.17ng/g,定量限为0.5ng/g,平均回收率为100.71%～106.68%,RSD低于3.76%；线性范围的相关系数在0.9941～0.9999之间。本方法可准确地检测出绵羊体液(血浆、尿液)及组织(肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉、毛发)中CL的残留浓度。二、研究了绵羊体液(血浆、尿液、唾液、胆汁)及组织(眼睛、肝脏、肺脏、肾脏、心脏、肌肉、毛发)中CL的残留与消除规律。24只绵羊体重为30±5kg,以15μg/kg BW剂量连续灌胃给药21d,停药21d。在给药期与停药期内的规定采样时间点采集绵羊体液及组织样品。试验结果显示,绵羊血浆样品中CL的残留浓度在给药1h后即可检到,说明动物体吸收CL迅速。在给药期间的第7d与第20d血浆中CL出现两个浓度峰值,分别为6.35±3.28ng/mL、4.61±0.79ng/mL。血浆中CL的消除为二相消除,在停药8～24h血浆中CL的残留浓度下降迅速,半衰期为13.72h,在停药24～505h期间,血浆中CL的残留浓度下降缓慢,半衰期为108.28h；动物体主要是通过尿液来排泄CL,给药后2h可在尿液中检测到CL,浓度为80.19±60.33ng/mL,尿液中CL的残留浓度较血浆中的浓度高。尿液中CL的消除亦为二相消除,停药第0-3d的半衰期为12.23h,停药第3-21d的半衰期为145.64h；唾液中CL浓度在停药第0-48h呈下降趋势,但是受多方面因素影响,不能确定唾液中CL消除规律的拟合方程及消除半衰期；CL在绵羊的各个组织中的残留情况不相同,CL普遍残留在绵羊的眼睛、肝脏、肾脏、心脏、脾脏与肌肉中,其中在眼睛中CL的残留浓度最高,消除最慢；肝脏中CL残留浓度次高,然后为脾脏、肺脏、肾脏,心脏与肌肉残留浓度最低；肝脏、脾脏、心脏中CL消除较眼睛慢,肺脏、肾脏、肌肉中CL消除较快；CL在毛发内的蓄积量较高、消除慢,在停药后仍能保持上升或稳定；停药第18天,毛发中CL的残留浓度为9.29±6.34ng/g,而停药第21d,视网膜与肝脏中CL的残留浓度分别为51.24ng/g(眼睛样品有限,无法计算标准差)、6.46±1.72ng/g。毛发、眼睛、肝脏均可作为监测CL非法使用的理想靶标。叁、研究了血浆与组织器官(肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉)及各组织器官之间CL残留浓度的预测模型。模拟了血浆与组织及组织间CL残留浓度关系的方程,模型方程R2均大于0.9,方差分析结果P值均小于0.01。预测模型可通过血浆或某种组织中CL的残留浓度对其他组织中CL的残留浓度进行预测,避免了依靠血浆检测对组织中CL残留情况的误判。若已知某种组织食品中CL的残留浓度可预测其他组织中CL是否超出最高残留限量,对追溯与其来自同一动物体的富含CL的动物食品起到帮助。
杨静[4]2011年在《肉羊组织中盐酸克伦特罗检测方法及代谢残留规律的研究》文中研究指明本研究应用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)研究建立了肉羊血清、尿液、肝脏、肌肉和被毛等基质中盐酸克伦特罗(CL)残留的检测方法。样品经提取、浓缩及净化后,采用HPLC-MS/MS检测,应用基质补偿消除样品基质对CL测定的影响。在优化条件下,血清和尿液中CL的线性范围为0.2~200ng/mL,肝脏和肌肉中CL的线性范围为0.1~100ng/g,被毛中CL的线性范围为0.5~100ng/g,线性相关系数(r)均高于0.99。羊血清和尿液中CL的检测限为0.06 ng/mL,定量限为0.2 ng/mL;肝脏和肌肉中CL的检测限为0.03ng/g,定量限为0.1 ng/g;羊毛的检测限为0.1 ng/g、定量限为0.5 ng/g。在样品基质中添加不同浓度水平的CL(浓度范围为5～20ppb),血清中CL的平均回收率为71.50%～86.25%,相对标准偏差(RSD)低于17.63%;尿液中CL的平均回收率为81.54%～113.61%,RSD低于14.23%;肝脏中CL的平均回收率为70.78%～94.20%,RSD低于3.18%;肌肉中CL的平均回收率为100.06%～117.00%,RSD低于7.28%;被毛中CL的平均回收率为88.54%~103.12%,RSD低于8.10%。该方法的灵敏度高,准确度好,能够满足肉羊不同组织中CL的测定。试验研究了CL在肉羊血清、尿液、肝脏及肌肉中的代谢残留规律。18头健康去势杂交公羊(30kg±5kg)每头每天灌胃50μg/kg BW的CL,连续给药21d。给药及停药期间,在规定时间点采集羊的血清和尿液,停药后于0、1、2、3、7、14d分别随机选3只羊屠宰,采集肝脏和肌肉测定CL含量。结果显示,CL在肉羊体内吸收迅速,给药0.4h就能在血清中检测到CL为0.72±0.54 ng/mL,2h后达到第一次血药峰值23.30±18.42 ng/mL,第21d达到药峰值为143.32±7.51 ng/mL;停药后血清中药物浓度下降,半衰期为16.5h,第14d下降到3.14±1.86 ng/mL。尿液是CL的主要排泄途径,给药后2h尿液中就能检测到CL,浓度高达423.50±253.72 ng/mL,给药第21d达最高浓度2070.00±49.71 ng/mL。CL在肉羊体内吸收迅速而且代谢消除缓慢,表明该药物在羊体内易于蓄积残留。肉羊肝脏中有高浓度的CL残留,停药0d为193.33±6.61 ng/g,CL在肝脏中消除较慢,半衰期为25.2h,停药第14d肝脏中CL的浓度为9.16±0.44 ng/g;肉羊肌肉中CL残留浓度较低,停药0d为14.65±0.64 ng/g,CL在肌肉中消除较快,半衰期为15.8h,停药第3d降到方法定量限0.1 ng/g以下。CL在羊肝脏中的高残留严重威胁着消费者的健康,肌肉在停药初期也威胁着消费者的健康。肝脏可用作检测CL在肉羊生产上非法使用的靶标。试验研究了CL在羊毛发中的残留规律,研究结果表明:(1)CL易在羊被毛中蓄积,以100μg/kgBW的剂量给药4d后,白色羊毛中CL的含量为6.12±0.14ng/g,黑色羊毛中CL的含量为18.11±6.52 ng/g;(2)不同颜色的羊毛对CL的蓄积不同,给药的第16~28d及停药期间黑色羊毛中CL的含量显着高于白色羊毛(P<0.05);(3)CL在羊毛中能够稳定存在,在停药0～10d内,黑色羊毛和白色羊毛中CL的残留浓度均保持稳定不变,在停药的第15d,CL的残留开始出现下降趋势。被毛是活体检测CL非法使用较为理想的靶标,建议采集肉羊背部的被毛进行整根检测。
冯敬敬[5]2012年在《盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立及其纳米抗体的筛选》文中研究表明随着人们生活水平的不断提高，食品安全问题越来越受到人们的关注。一定剂量的盐酸克伦特罗喂养动物以后能够明显增加动物的瘦肉率，因此受到不良商家的追捧。人在食用了含有盐酸克伦特罗的肉及肉制品后会出现不同程度的中毒情况，严重的可导致死亡。酶联免疫吸附检测技术(ELISA)在检测盐酸克伦特罗残留方面具有可定量、灵敏度高、操作方便等优点。抗体制备是ELISA检测方法建立中的关键。传统的多克隆抗体制备虽然简单，但抗体纯度不够高，特异性差，易发生交叉反应。而单克隆抗体生产成本高、生产周期长、操作繁琐、技术难度高，需要真核细胞进行表达。纳米抗体是来源于骆驼科动物体内重链抗体的最小的完整功能性抗原结合片段，分子质量仅为15KDa，具有亲和力高、稳定性好、筛选周期短、易于耦合成多价抗体等优点。本实验首先采用重氮法合成了OVA与CL偶联比为1：28.7的完全抗原。通过rProteinA对兔抗盐酸克伦特罗的多克隆抗体进行了纯化，纯化后的抗体效价为1:80000，浓度为0.667mg/mL，用于盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立其特异性有所提高。采用合成的完全抗原和亲和纯化后的抗体建立CL的ELISA检测方法，通过对合成抗原包被浓度、一抗工作浓度、封闭液工作浓度等条件的优化，最终检测灵敏度可以达到6.4ng/mL。最后利用噬菌体展示技术，从天然的纳米抗体噬菌体文库中筛选盐酸克伦特罗的纳米抗体，经过叁轮“吸附-洗脱-扩增”、ELISA阳性鉴定后，从96个单菌落中挑选出了3株阳性克隆。本课题最终有望为ELISA检测盐酸克伦特罗残留提供一种新的效价高、稳定性好、成本低的小分子抗体。
刘士杰[6]2006年在《盐酸克伦特罗在动物组织中的残留分布及代谢规律》文中认为本文系统研究了盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CL)在猪尿液、血液和组织中的残留分布及代谢规律。并通过放射性同位素~3H标记试验,研究了CL在小白鼠体内的残留分布及代谢规律,进一步验证CL在猪体内残留分布及代谢规律。初步建立了猪眼睛中CL的高效液相色谱(HPLC)检测方法。 本实验选用24头健康育肥猪(平均70kg左右,公母各半),随机分成两组,分别饲喂CL日粮(5mg/kg和10mg/kg),连续30天。在用药的第1、2、3、4、6、8、10、14、20和29天,每剂量组任选3头,采集尿样和血液样品;10mg/kg剂量组于用药的第2、4、6、10、14天分早(8:00～9:00)、中(12:00～1:00)、晚(5:00～6:00)叁点,每点随机采集6份尿样;在停药的第0、3、7、14天每剂量组任选3头猪屠宰,采集尿液、血液、眼睛、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏和肌肉(叁角肌、第1～3腰椎肌、股二头肌)样品。采用高效液相色谱法测定样品中的药物残留。检测结果显示:①CL口服吸收很快,饲喂第1天即可从尿液中检出,用药期有两个残留高峰分别是饲喂第3天和第20天,残留浓度随用药剂量增加升高;同一天不同时间点尿液中CL残留不同,中午、傍晚尿液中CL残留浓度显着高于早上尿液中的残留浓度,中午和傍晚尿液中残留差异不显着,但中午有高于傍晚的趋势。②猪饲喂CL后第1天即可从血液中检出CL,给药期血液中CL残留浓度总体呈上升趋势,尿液中残留浓度随用药剂量增加而升高。③停药0天,CL在尿液、血液、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏和肌肉(叁部分)中残留分别为338.6ng/g、54ng/g、243 ng/g、514.7ng/g、116.8ng/g、66.5ng/g、13.8ng/g、11.5ng/g、12.1ng/g(5mg/kg剂量组),1417ng/g、104ng/g、352ng/g、825.7ng/g、183.8ng/g、135.2ng/g、19.4ng/g、18.7ng/g、18.1ng/g(10mg/kg剂量组)。④不同组织中CL代谢速度不同,除肌肉停药第7天不可检出外(低于检测限0.5ng/g),其它组织停药14天仍可检出,残留浓度分别为15.1ng/g、1.2ng/g、16.1ng/g、17.1ng/g、4ng/g、4.6ng/g(5mg/kg剂量组),21.8ng/g、5.5ng/g、41.2ng/g、39.6ng/g、9.6ng/g、8.3ng/g(10mg/kg剂量组)。研究表明:CL易在猪体内残留,分布广泛且代谢较为缓慢,不同组织代谢速率不同。 另外,本文还对~3H标记的CL在小白鼠体内的残留分布及代谢规律进行了研究,试验结果表明:CL在小白鼠体内分布广泛,在所取的13种样品中,均有CL总残留,不同的组织残留浓度不同,代谢速度也不相同。与对猪进行的实验相比,基本一致。在小鼠实验中CL在毛发残留较高,代谢最慢,而且药物在毛发中存在稳定,所以是检测CL非常理想的靶器官(组织)。小白鼠是色素缺乏性动物,但在眼睛中CL残留仍然较高,代谢较慢,仅次于毛发,所以眼睛也是检测CL较为理想的靶器官(组织)。 最后,初步建立了猪眼睛中CL高效液相色谱(HPLC)检测方法,制作了标准曲线,线性范围为0.01μg/ml-10μg/ml,方法的检测限为2.5ng/g,定量限为5ng/g,回收率为70%～110%,变异系数3.95%～8.42%,用该方法检测猪眼睛中CL残留结果如下:①停药0天,猪眼睛中CL残留浓度远远高于其它组织,两剂量组CL残留浓度分别高达1716.1ng/g和2981.5ng/g。②CL在猪眼睛中代谢较为缓慢,停药第14天两剂量组残留浓度仍高达107.2ng/g和385.2ng/g。由此可知,CL在眼睛中具有高残留、慢消除的特点,进而表明眼睛是
王喜萍[7]2007年在《盐酸克伦特罗在肉鸡体内的残留消除规律的研究》文中研究表明本文系统研究了盐酸克伦特罗(Clenbuterol, HCL CL)在肉鸡体内的残留分布及消除规律。本实验选用100只健康鸡雏,随机分配2个处理组。从29日龄开始,分别在日粮中添加1mg/kg和3mg/kg的CL,连续饲喂21d,50日龄停喂CL。在用药的第1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、21d和停药后的第4 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d,每组任选3只鸡,采集血液,分离血清,用HPLC法测定血清中的CL含量。在停药的第4 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d,每组任选3只鸡,进行屠宰,宰杀后,立即取出肝脏、肺脏、肾脏、脂肪和肌肉组织,用HPLC法分别测定盐酸克伦特罗的残留量。在用药的第1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、21d和停药后的4 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d、21d,每组任选3只鸡,采集羽毛,用GC-MS法测定羽毛中的CL含量。检测结果显示:①CL在体内吸收很快,饲喂第1 d即可从血清中检出,用药期有两个药物残留高峰,1mg/kg剂量组CL在血清中的残留高峰分别是给药后的第5d和第21d,残留量分别是33.4ng/mL和46.4ng/mL;3mg/kg剂量组CL在血清中的残留高峰分别是给药后的第5d和零休药期(停药后4h),残留量分别是40.1ng/mL和69.1ng/mL,残留浓度随用药剂量增加而升高;停药期CL在血清残留浓度逐渐降低,但前3d降低较快。②CL在肉鸡不同组织中的残留量有很大差异,在零休药期各组织残留浓度大小的顺序为:肺脏>肝脏>肾脏>血清>脂肪>肌肉。在停药4 h ~2d消除的最快,在停药3~14d消除的较缓慢。CL在血清中代谢的最快,在肺脏、肝脏残留较多,而在脂肪、肌肉中残留量较小。因此肌肉中CL残留可作为禽类产品安全评价的依据。③肉鸡羽毛中CL残留浓度最高出现在停药的第3d,两个添加剂量组(1mg/kg、3mg/kg)分别为56.9ng/g和114.6ng/g,在停药期的0 ~3 d,盐酸克伦特罗残留量会依次增高。停药21d,两个添加剂量组(1mg/kg、3mg/kg)肉鸡羽毛中CL残留浓度分别为49.6ng/g和95.3ng/g。羽毛中盐酸克伦特罗残留与其他组织有所不同,CL容易在羽毛中蓄积,同时CL在羽毛中代谢比较缓慢,且含量比较稳定。通过以上研究表明,CL易在肉鸡体内残留蓄积,分布广泛,且代谢较慢,不同组织(器官)中CL的代谢速率不同。羽毛是检测CL残留非常理想的靶器官,肺脏、肝脏也可作为检测CL较好的靶器官。
李励军[8]2014年在《盐酸克伦特罗在肉牛体内残留消除规律》文中研究指明本研究通过给杂交西门塔尔肉牛饲喂盐酸克伦特罗(clenbuterol hydrochloride, CL),研究了其在尿液、血浆和毛发等肉牛活体组织以及眼、肝、肾、肺、肌肉等肉牛屠宰器官组织中的残留消除规律,为执法部门在监管盐酸克伦特罗在肉牛中的非法使用提供了理论基础和技术支撑。研究分为两个试验。试验一：选取6头身体发育良好,平均体重213±9kg,毛色为红白花的杂交中国西门塔尔肉牛,随机分成2组,每组3个重复。低剂量组和高剂量组分别饲喂16和48μg/kg BW/d的CL,共21d,随后停药70d。在给药第1、7、14、21d(休药零点),和停药第1、3、7、14、21、28、42、70d分别采集尿液、血浆和毛发样品(在停药0-42d,毛发每14d采集一次),利用LC-MS/MS方法检测其中的CL残留量。试验二:选取5头身体发育良好,平均体重237±2kg的杂交中国西门塔尔肉牛,饲喂16μg/kg BW/d的CL,共21d,随后停药28d。在休药零点(距离最后一次给药后6-8h),停药3、7、14和28d分别屠宰1头试验牛。采集眼、肝、肾、肺、肌肉等器官组织,通过LC-MS/MS方法检测其中的CL残留量。结果表明：(1)CL易在肉牛组织中残留,连续21d给肉牛饲喂16μg/kgBW/d的CL,休药零点所有组织中的CL残留量均大于0.5gg/kg;(2)CL在不同组织中的残留量和消除速率不同,其中眼组织残留多且消除速度慢；(3)CL在机体组织中的残留量随着停药期延长逐渐减少,但停药28d,眼组织、房水、肝脏、脾脏组织中的CL量仍超过0.5μg/kg,停药14d,臀中肌中CL残留量大于0.1μg/kg；(4)CL在尿液、血浆和毛发中的残留量与给药剂量成正比,高剂量组中的残留量均显着高于低剂量组中的残留量(P≤0.05)；(5)CL易在毛发组织中残留,从用药第7d到停药第14d,毛发中的CL残留量逐渐增加,在停药14d到停药第70d,红色毛发CL残留量保持较为稳定的趋势(P>0.05)；(6)尿液、血浆和毛发均可以作为肉牛使用CL的监测靶标,但监测的时间长度(监测窗)差异较大：在给肉牛使用16-48μg/kg BW/d的CL,血浆能监测到停药后14-24d,尿液能监测到停药后30-42d,白色毛发能监测到停药后70d,而红色毛发监测时间可能更长,与血浆和尿液相比,毛发样品更适合作为屠宰前的监测靶组织。
王秋平, 哈婧, 刘硕, 张佳丽, 苏萌[9]2013年在《盐酸克伦特罗检测方法的研究进展》文中进行了进一步梳理对盐酸克伦特罗的分析检测方法进行了概述,比较了免疫分析法、色谱分析法及各种联用技术分析法的区别,指出各种方法的优缺点,并提出研究开发更快速、高效、操作简单、费用低廉的现场检测方法是今后的发展方向。
杨传波[10]2005年在《盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立》文中研究表明克伦特罗(Clenbuterol,CL)是一种常被非法用作促生长添加剂的β_2-受体激动剂,彻底查禁CL的非法滥用,必须要有高效、灵敏、特异的残留检测方法。本研究利用偶氮化法制备出克伦特罗人工抗原,用杂交瘤技术研制出克伦特罗特异性单克隆抗体并将之作为检测试剂建立克伦特罗固相抗体竞争ELISA残留检测方法,试验结果如下: 在阴暗避光4℃的条件下,用亚硝酸钠使CL发生偶氮化反应,偶氮化CL与载体蛋白酪氨酸残基上的酚羟基反应,从而生成“CL-载体蛋白”偶联物。分别制备出CL-KLH、CL-BSA和CL-OVA叁种偶联物,CL-BSA经过200nm～360nm波长紫外扫描,BSA在279nm波长吸收最大,最大吸收波长A值为0.0381,此时CL-BSA的A值为0.1501,CL的A值为0.2502。在CL-BSA溶液中蛋白质的浓度与BSA溶液相同的条件下,CL-BSA的A值明显比BSA的高。初步说明CL与BSA已偶联形成CL-BSA。经SDS-PAGE电泳CL-BSA比BSA分子量增加,进一步说明CL分子与BSA分子结合了。用CL-KLH与CL-BSA分别免疫小鼠制备抗血清,用CL-OVA包被酶标板,检测到的抗体可以和游离的CL发生特异性的结合反应。 用CL-KLH免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合与克隆筛选出4株稳定分泌CL抗体的杂交瘤细胞株1D6、1H5、1H7和2F10,用间接ELISA方法测得四株杂交瘤培养上清液效价分别达到1:1100、1:1200、1:900和1:700,四株腹水单抗的效价介于1:3.6×10~4～1:3.2×10~5之间。对CL亲和力从强至弱依次为1D6>1H5>1H7>2F10。单抗1D6、1H5、1H7和2F10都属于IgGl亚类抗体。对沙丁胺醇交叉反应性测定,结果最小的是1D6,只有3.98%的交叉反应性。1H5、1H7和2F10交叉反应性依次为12.9%、26%和<5%。抗原识别位点分析结果表明,这四株McAb至少识别两个不同的抗原位点。 在单抗腹水纯化的基础之上,将兔IgG与CL偶联得到兔IgG-CL偶联物,作为桥梁,与样品中的游离的CL竞争,建立了竞争ELISA方法,并对各实验参数进行优化,筛选出试验最佳反应体系:纯化单抗最佳包被浓度是5ug/ml,4℃作用24h;兔IgG-CL偶联物最佳工作摩尔比1:128,最佳工作浓度8ug/ml,37℃作用1h;羊抗兔酶标二抗的最佳稀释浓度1:5000,37℃作用1h;底物溶液(TMB+H_2O_2)37℃作用15min。通过对已知标准液样品的检测绘制出标准曲线,并且通过重复对已知标准液样品的检测结果表明:不同板间F=0.833,
参考文献：
[1]. 氯霉素及盐酸克伦特罗残留ELISA检测方法研究[D]. 朱炫. 浙江大学. 2007
[2]. 生猪屠宰过程中盐酸克伦特罗检测方法研究[D]. 成亚宁. 西北农林科技大学. 2007
[3]. 盐酸克伦特罗在绵羊体内蓄积消除规律及残留预测模型的研究[D]. 刘萌. 中国农业科学院. 2014
[4]. 肉羊组织中盐酸克伦特罗检测方法及代谢残留规律的研究[D]. 杨静. 中国农业科学院. 2011
[5]. 盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立及其纳米抗体的筛选[D]. 冯敬敬. 天津大学. 2012
[6]. 盐酸克伦特罗在动物组织中的残留分布及代谢规律[D]. 刘士杰. 中国农业科学院. 2006
[7]. 盐酸克伦特罗在肉鸡体内的残留消除规律的研究[D]. 王喜萍. 中国农业科学院. 2007
[8]. 盐酸克伦特罗在肉牛体内残留消除规律[D]. 李励军. 中国农业科学院. 2014
[9]. 盐酸克伦特罗检测方法的研究进展[J]. 王秋平, 哈婧, 刘硕, 张佳丽, 苏萌. 河北工业科技. 2013
[10]. 盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立[D]. 杨传波. 西南农业大学. 2005