杨鲲[1]2004年在《环氧化酶与前列腺癌的关系及其临床意义的研究》文中指出背景前列腺癌是男性泌尿系统常见肿瘤,恶性程度较高。我国前列腺癌的临床发病率虽然低于欧美国家,但是近年来前列腺癌的发病率也迅速上升。长久以来各国在前列腺癌的诊断和治疗方面投入了大量的人力物力。前列腺特异抗原(PSA)的检测提高了前列腺癌的诊断水平,但是这一指标会受到多种因素的影响而产生偏差。目前药物治疗在前列腺癌的治疗中占了很大的比重,但由于激素非依赖性前列腺癌的存在,部分患者对雄激素阻断药物“耐受”,对这部分患者的治疗成为临床医师最头痛的问题。环氧化酶(cyclooxygenase,COX)是花生四烯酸向其代谢产物前列腺素的生物转化过程中的催化酶,存在着COX-1和COX-2两种异构酶。研究发现COX-2在消化系统肿瘤、头颈部肿瘤、非小细胞肺癌、皮肤鳞状细胞癌、乳癌等肿瘤发生发展中通过与其酶作用产物;通过与肿瘤血管生成促进因子、蛋白酶协同作用;通过促进内皮细胞迁徙和肿瘤血管结构生成;通过活化bcl-2抑制内皮细胞的凋亡等途径影响肿瘤的生物学行为。由于流行病学和大量的实验研究发现非甾体类消炎药(环氧化酶抑制剂)能够降低结肠癌发生的危险性,而且能有效治疗家族性结肠多发性腺瘤性息肉,美国FDA已经批准了环氧化酶抑制剂Celecoxib(Celebrex?)用于该病的治疗。此后,该药被用于结肠癌,食管癌,皮肤癌和膀胱癌等一系列的上皮肿瘤的研究中,并取得了理想的治疗效果。本课题研究的目的是为早期诊断和治疗前列腺癌,尤其是激素非依赖性前列腺癌,提供新的思路。课题从病理学,细胞生物学,实验动物学和临床医学的角度,通过运用免疫组化,分子生物学和医学统计学的方法,研究了环氧化酶与前列腺癌的关系及其临床意义。通过运用免疫组化的方法研究人正常前列腺组织、增生前列腺组织和前列腺肿瘤组织中环氧化酶的表达,探讨了环氧化酶-1和环氧化酶-2分别在前列腺癌诊断中的临床价值。通过运用分子生物学方法了解用环氧化酶抑制剂干预前后PC-3细胞和LNCaP细胞的生物学性状改变,并探讨环氧化酶影响肿瘤细胞生长的作用机制。通过建立裸鼠前列腺癌的动物模型,分析环氧化酶抑制剂干预后对于动物模型实体肿瘤生长的影响,并研究环氧化酶影响前列腺癌实体肿瘤生长的途径。通过对雄激素“抵抗”的前列腺癌志愿患者使用环氧化酶抑制剂后病情变化的随访研究,初步探讨用环氧化酶抑制剂治疗前列腺癌的临床价值。本课题只是对于这一领域研究的初步涉及,还有许多复杂的问题
姚文[2]2012年在《COX-2、p53在前列腺癌组织中的表达及其临床意义》文中认为研究背景：前列腺癌（prostatic carcinoma, PCa）在老年男性中发病率高，公认为是老年性疾病，其具有病因复杂、发病部位隐蔽、潜伏期长等特点，在欧美占男性生殖系统中恶性肿瘤的首位，死亡率排名第二，仅次与肺癌。。但随着人群平均寿命的延长导致我国人口老龄化比例增大、饮食结构的改变，加上医疗技术的不断完善进步，我国前列腺癌的发病率较以往呈明显上升的趋势。。目前治疗前列腺癌的手段包括：前列腺癌根治手术，放射治疗，内分泌治疗及化学药物治疗。早期手术治疗是根治前列腺癌的根本方法，但对于临床上诊断为晚期的前列腺癌，发现时肿瘤大多数已经发生了体内的远处转移，从而失去了最佳的手术治疗时机，大大增加了治疗的难度。因此，现阶段需要获得一种精确、有效的诊断方法或分子标记来早期筛查和诊断前列腺癌，指导临床诊断和治疗工作，已显得越来越重要。环氧化酶(Cycloxygenase，COX)，又称为前列腺素H合成酶(prostaglandin Hsynthase，PGHS)，它是一个在花生四烯酸生物合成前列腺素（PG）过程中发挥着重要作用的限速酶，它能够将花生四烯酸代谢成各种PG产物，从而参与机体的多种病理生理过程，如炎症、免疫应答、发热等。根据研究已证实，细胞中至少存在两种COX的编码基因，即COX-1及COX-2。在维持人体正常生理功能中COX-1起着重要作用，它参与了机体炎症反应、肾脏血流调节、胃肠道粘膜保护等生理过程。而COX-2则与人类许多癌前病变和恶性肿瘤的发生、进展有着密切联系。研究表明，COX-2与肿瘤间有着千丝万缕的联系。已有报道COX-2在人体多数恶性肿瘤和癌前病变高度表达，如在肺癌、结肠癌、胃癌、宫颈癌、卵巢癌等恶性肿瘤中有着40％—80％的高表达率；而在肿瘤血管内皮细胞和临近肿瘤浸润部位的正常组织也发现有COX-2表达；所以，COX-2已成为当前肿瘤研究的新靶点。P53基因被发现有野生型(wt-p53)和突变型(mt-p53)两种类别，其中wt-p53被认为是重要的抑癌基因，wt-p53可以通过抑制细胞复制和诱导细胞凋亡，从而保持细胞基因组数量的稳定性，它的突变与失活在肿瘤的生长、浸润过程中发挥着重要作用，在抑制细胞恶性增殖和维持细胞正常生长中起着关键作用。P53失活大部分表现为mt-p53过度表达。当wt-p53基因突变为mt-p53时,突变型p53蛋白就失去了正常的对细胞的抑癌作用，反过来促进正常细胞过度增殖向恶心肿瘤转化，研究表明，p53基因可能与多种人类恶性肿瘤的发生、发展密切相关。而最近研究表明，P53与COX-2表达关系密切,目前尚未有关于两者联合研究的文献报道，因此联合检测P53与COX-2在前列癌中的表达情况，对了解它们在前列腺癌发生发展、诊断预后中的作用有重要意义。目的：通过采用免疫组化、RT-PCR技术测定不同病理及临床分期中前列腺癌组织及癌旁前列腺组织中COX-2，p53蛋白的表达情况,并结合前列腺癌患者临床与病理因素，联合探讨COX-2、p53基因在前列腺癌诊断、预后等方面的意义。方法：选取广州市第一人民医院2004-2009经手术治疗的158例泌尿外科前列腺疾病患者，调取临床病历、组织标本，同时选取前列腺癌组织、瘤旁无瘤组织、前列腺增生组织，进行COX-2的免疫组化染色、RT-PCR检测，结合患者临床资料(年龄、血清PSA水平、Gleason评分、肿瘤分期、淋巴结转移、3年、5年生存率)，所得数据应用SPSS13.0统计软件包进行进行统计学分析。结果：免疫组化结果显示COX-2、p53在前列腺癌组织、前列腺增生组织、正常前列腺组织表达强度依次下降，且与前列腺癌患者Gleason评分、肿瘤分期、淋巴结转移、3年、5年生存率相关。在前列腺癌组织中COX-2mRNA、p53mRNA表达水平明显高于前列腺癌瘤旁无瘤组织通过RT-PCR得到验证，进一步验证在前列腺癌组织细胞中COX-2mRNA、p53mRNA呈特异性表达。结论：通过本课题研究，探求COX-2、 p53与前列腺癌的相关性，证实COX-2、p53与前列腺癌的发生、进展、侵袭、预后密切相关，对前列腺癌患者具有早期诊断、预防、治疗以及判定预后的价值，有望成为一种具有临床实用意义肿瘤标志物。COX-2、p53两种蛋白在PCa组织中的表达存在正性相关，二者联合检测可为前列腺癌发生发展及预后预测提供一定的参考价值。
吴训[3]2016年在《COX-2和SPARC在口腔鳞癌中表达的研究》文中研究指明口腔颌面-头颈鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC/Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck,HNSCC)占成人恶性肿瘤的8%[1],口腔颌面-头颈部肿瘤占全身恶性肿瘤的6.6%,而这其中鳞状细胞癌又占到55.8%,口腔和下咽部为高发部位(20.9%),并呈逐年递增的趋势[2]。2015年中国约有新发浸润性癌病例数429.2万,有281.4万癌症死亡病例,其中,唇、口腔、咽癌年新发病例4.81万,年死亡病例2.21万[3]。几乎22%的全球新发癌症病例出现在中国,27%的癌症死亡病例在中国[3]。OSCC大多临近重要的组织器官,使手术的范围受到严重的制约,而且由于头颈颌面组织血管、淋巴管丰富以及舌的频繁机械运动,常发生早期颈淋巴结转移,预后较差,死亡率高达50%[1],严重威胁着人们的生命健康。尽管肿瘤综合治疗的不断发展,口腔鳞癌的治疗取得了一定的进步,但是近20年,五年生存率没有明显改善。由于口腔颌面-头颈鳞状细胞癌患者总体生存率很低,其发病相关的分子机制尚未明确,关于它的诊断与治疗始终是恶性肿瘤治疗领域的研究热点。尽管众多与肿瘤发生发展相关的生物标志在多项前瞻性研究和Meta分析中得到反复确证,但仍缺乏足够的证据支持临床应用,因此,与OSCC/HNSCC发生发展相关的分子标志的研究仍需不断的探索。初步研究显示,环氧化酶-2(Cyclooxygenases,COX-2)与富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(Secreted Protein Acidic and Rich in Cysteine,SPARC)在OSCC/HNSCC组织中上调明显,提示其与OSCC/HNSCC发生和发展可能有相关性,可能是OSCC/HNSCC复发、转移和治疗指导方面有价值的关键节点基因[4-6]。目的:检测SPARC和COX-2基因在口腔鳞状细胞癌、癌旁、淋巴结以及正常组织中的表达,研究它们在肿瘤发生发展过程中的可能作用机制以及相互关系;对SPARC和COX-2的甲基化情况进行初步的探讨,验证甲基化修饰水平是否能够调控SPARC和COX-2在口腔鳞癌中的表达。方法:应用免疫组织化学、蛋白质免疫印迹、实时定量聚合酶链反应技术检测SPARC和COX-2基因在口腔鳞状细胞癌、癌旁、淋巴结以及正常组织中的表达。甲基化特异性PCR(MSP)检测上述样本中这两个基因的甲基化状态。统计学方法分析上述实验结果。结果:1.免疫组化显示COX-2在癌组织高表达,在正常组织中几乎无表达;其表达含量随肿瘤分化程度降低而逐渐增高,与肿瘤的临床分期、病理分级、淋巴结转移存在明显正相关性。COX-2m RNA的表达量在癌、癌旁、转移淋巴结组织标本中均高于正常粘膜组织,其中在癌组织的表达量最高(P<0.01);除Ⅳ区与Ⅴ区淋巴结组织中COX-2m RNA的表达量相比不具有统计学意义以外,其余各组间COX-2m RNA的表达均具有明显统计学意义(P<0.01)。2.免疫组化显示SPARC在正常粘膜和癌旁组织呈现高表达,在癌组织中呈低表达或不表达。其表达与肿瘤分化程度和淋巴结转移呈负相关。与正常粘膜组的SPARC m RNA表达量相比,除癌旁组织和Ⅴ区淋巴结不具有统计学意义以外,其余各组表达均低于正常粘膜组织(P<0.05)。3.Western blot发现COX-2和SPARC在正常组织、癌旁组织、口腔鳞癌和淋巴结组织中有不同程度的表达,且蛋白表达水平与二者m RNA表达趋势一致。4.COX-2m RNA和SPARCm RNA的相对表达量在口腔癌组织、癌旁组织、颈部Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ区淋巴结中表现为显着的负相关性P=0.000。5.在头颈鳞癌多个细胞系中COX-2的表达强烈,SPARC表达沉默或低下,二者表达趋势与所测癌组织中表达结果一致。6.在OSCC组织样本中,在癌组织,淋巴结组织中SPARC基因启动子均出现了高甲基化,而COX-2基因启动子则出现非甲基化状态。在正常组织中,COX-2基因启动子则出现高甲基化,SPARC基因启动子则表现出了非甲基化状态。在癌旁组织中,COX-2和SPARC均表现为非甲基化。7.在头颈肿瘤Scc-9、Scc-25、Tca8113、HN13多个细胞系均发现SPARC基因启动子区出现甲基化修饰,而COX-2基因启动子区无甲基化条带。在正常上皮细胞系h OMK则发现COX-2甲基化和SPARC非甲基化。8.在舌癌细胞株中COX-2基因启动子23个Cp G岛仅有3~6个位点出现甲基化,甲基化率不足10%;SPARC的17个Cp G岛全部出现甲基化修饰。去甲基化处理后,SPARCm RNA的表达出现明显上调(P=0.000);COX-2m RNA的表达无明显变化,组间比较无统计学差异(P=0.064)。9.COX-2和SPARC蛋白表达状态与启动子区甲基化均存在着负相关关系,P=0.000。结论:1、COX-2在口腔鳞状细胞癌中高表达,与临床TNM分期的密切相关,可能是口腔鳞状细胞癌的促进因子。2、SPARC在口腔鳞状细胞癌中低表达,其表达缺失与临床TNM分期关系密切,可能是口腔鳞状细胞癌的抑制因子,可以作为口腔鳞状细胞癌诊断的分子生物学标志物。3、癌组织中SPARC启动子区甲基化和COX-2启动子区去甲基化是引起二者蛋白表达及m RNA表达异常的重要原因。4、COX-2和SPARC的表达沿纵形淋巴链呈梯度变化,且它们的表达存在着负相关关系,二者在OSCC的发生发展过程中可能存在着某种拮抗作用。
胡乃刚[4]2008年在《塞来昔布对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-C及bcl-2 mRNA表达的影响》文中研究表明目的探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对雄激素非依赖性人前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-C mRNA及bcl-2m RNA表达的影响,研究COX-2抑制剂抗肿瘤的作用机制。为临床治疗治疗前列腺癌,特别是雄激素非依赖性前列腺癌提供新的方法和理论依据。方法常规培养PC-3细胞株,取第叁代对数生长的细胞,用0.25%的胰蛋白酶消化。将培养的PC-3细胞分为四组:试验组(分别以10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L不同浓度塞来昔布处理)和对照组。在相同条件下接种于96孔培养板继续培养72小时,收集细胞标本进行实验。通过光学显微镜观察塞来昔布处理后培养的PC-3细胞生长和形态变化。通过MTT法了解不同浓度塞来昔布作用后PC-3细胞的生长抑制曲线。采用RT-PCR的方法检测四组中VEGF-C及bcl-2mRNA的表达。用凝胶图像分析系统对VECF-C和Bcl-2mRNA的表达量进行分析。结果经40μmol/L塞来昔布处理的PC-3细胞生长明显受到抑制。10μmol/L塞来昔布组VEGP-C/GAPDH值及bcl-2/GAPDH值分别为0.509±0.057、0.444±0.034,与对照组相比差别均无统计学意义(P＞0.05);20μmol/L及40μmol/L塞来昔布组VECF-C/GAPDH值分别为0.370±0.063、0.263±0.062,bcl-2/GAPDH值分别为0.339±0.047、0.272±0.042,两组中上述两项指标均较对照组明显下降(P均＜0.01)。结论塞来昔布对雄激素非依赖性人前列腺癌细胞株PC-3的生长有抑制作用,并且抑制作用与剂量有关。塞来昔布可能通过对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-C及bcl-2mRNA表达的抑制发挥其抗肿瘤作用。这可能为临床治疗前列腺癌提供新的方法。
李莉[5]2005年在《乳腺癌中环氧化酶2的表达及其临床意义的研究》文中研究说明目的 研究环氧化酶2、c-erbB-2、P53在乳腺癌中的表达与乳腺癌生物学特性间的相互关系,探讨COX-2在乳腺癌发生发展中的作用及临床意义。方法 98例患者手术切除标本分乳腺癌、乳腺纤维腺瘤、乳腺良性增生、正常乳腺组织4组,分别制石蜡切片,SP法免疫组化染色,检测COX-2、c-erbB-2、P53蛋白表达情况。结果COX-2表达阳性率在乳腺癌中60.4%,乳腺纤维腺瘤中30%,乳腺良性增生中15%,正常乳腺组织中未见表达,差异显着。乳腺癌中COX-2表达在肿块大于2cm、淋巴结转移阳性、ER阴性、PR阴性、c-erbB-2阳性、P53阳性组,明显增高,而与患者年龄、肿瘤病理类型及肿瘤分期无明显关系。结论COX-2在乳腺癌的发生、发展和转移中起重要作用。由于P53及c-erbB-2是典型的癌基因和抑癌基因,而乳腺癌中COX-2高表达与P53及c-erbB-2密切相关,提示乳腺癌中COX-2高表达可能是抑癌基因失活与癌基因激活同时作用的结果。联合检测COX-2、c-erbB-2、P53的表达,有望更好地评价乳腺癌的进展和预后。
赵纪宇[6]2010年在《塞来昔布诱导前列腺癌细胞凋亡及其机制的研究》文中研究表明背景与目的:随着我国逐步进入老龄化社会加之人民饮食结构的变化,前列腺癌的发病率也随之提高。大多数前列腺癌患者经过常规治疗方法治疗后会转化为激素非依赖性前列腺癌和难治性前列腺癌。上述两型前列腺癌尤其是难治性前列腺癌对目前任何常规治疗均不敏感,为临床预防和治疗工作带来极大的困难。因此,在临床实际工作中迫切寻找新的防治手段解决目前难题。近年来,众多流行病学研究显示,非甾体类药物(NSAIDs)对乳腺癌、呼吸系统肿瘤、消化道肿瘤及泌尿系统肿瘤等有一定的预防治疗作用,其主要机制可能与其抑制肿瘤细胞中环氧化酶-2(COX-2)和脂氧合酶的表达有关。选择性COX-2抑制剂对肿瘤新生血管生成及其对肿瘤细胞生长、转化、增殖和凋亡的影响取得了重大进展,为肿瘤的预防和治疗开辟新的有效途径提过了理论依据和实验基础。目前,国内外关于选择性COX-2抑制剂对前列腺癌细胞影响的研究并不多。本文的研究目的在于研究选择性COX-2抑制剂—塞来昔布(Celecoxib)对前列腺癌DU-145细胞凋亡及侵袭力的影响,并探讨其可能作用机制,为非激素依赖型前列腺癌及难治性前列腺癌的防治提供新的思路和实验的理论基础。内容:本实验以非激素依赖性前列腺癌DU-145细胞株为研究对象,与实验药物塞来昔布作用后,观察其是否有凋亡现象同时检测其凋亡率,并检测塞来昔布作用后,细胞中凋亡相关基因和肿瘤细胞侵袭力相关基因表达情况,从而初步探讨塞来昔布在前列腺癌凋亡发生中的作用。方法:1、使用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养非激素依赖性前列腺癌DU-145细胞,适时进行细胞换液、传代。实验所用细胞为状态良好的对数生长期细胞。2、将浓度为50μmol/L实验药物塞来昔布加入细胞培养作用24小时后进行Hoechst 33342/PI双染色处理,在荧光显微镜下观察并拍照进过染色剂处理的细胞,观察其凋亡形态,并与空白对照组对比;3、根据塞来昔布的浓度将培养细胞分为5组,即0,25,50,100,200μmol/L组。根据组别将塞来昔布加入对应培养细胞中作用24小时,进行FITC-AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测不同浓度塞来昔布诱导细胞凋亡率大小。实验重复叁次。数据详细记录并归纳后进行统计分析;4、将浓度为50μmol/L的塞来昔布作用于前列腺癌DU-145细胞24小时后,应用RT-PCR法检测Bcl-2、E-cadherin、ICE及COX-2基因的mRNA表达水平并与空白对照组相对比,取PCR产物于体积分数为2%的琼脂糖凝胶中电泳30min,紫外灯下观察并拍照,使用Gel-proAnalyzer 4.0软件分析扩增产物的光密度(optical density,OD)。详细记录数据并归纳后进行统计学分析。结果:1、Hoechst 33342/PI双染色可观察到药物作用后,与空白对照组相比,实验组细胞呈现明显凋亡现象。2、FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞术证实,塞来昔布能有效诱导细胞凋亡,0、25、50、100、200μmol/L塞来昔布诱导细胞凋亡率分别为(1.10±0.15)%,(3.87±0.79)%,(10.59±1.58)%,(22.50±3.30)%,(33.85±2.71)%,实验组与空白对照组凋亡率差异经统计分析均有统计学意义(P<0.05)细胞凋亡率呈现浓度依赖性递增。3、RT-PCR显示塞来昔布作用后,细胞中Bcl-2 mRNA表达水平下调, E-cadherin mRNA表达水平上调,ICE mRNA表达水平无明显变化,而COX-2 mRNA未检测到。结论:1、通过Hoechst 33342/PI双染色实验,我们可以观察到明显的细胞凋亡现象,可以推断,塞来昔布作为选择性COX-2抑制剂能够有效地诱导非激素依赖型前列腺癌DU-145细胞凋亡。2、通过FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞术实验,我们对细胞凋亡进行了定量测量,证实了塞来昔布诱导前列腺癌细胞凋亡时,其凋亡率为药物浓度依赖性,即凋亡率与药物浓度成正相关关系。3、通过RT-PCR实验我们检测了四种细胞凋亡相关基因及肿瘤侵袭力相关基因的mRNA表达情况。在实验过程中并未检测出COX-2表达,推断塞来昔布诱导非激素依赖型前列腺癌的细胞株DU-145可能通过“COX-2非依赖”途径实现,而不是传统理论所指“COX-2依赖”途径,这为我们对塞来昔布这一选择性COX-2抑制剂有了新的认识。经过实验药物塞来昔布作用后,实验组细胞Bcl-2基因表达水平下调,Bcl-2家族为细胞程序性死亡的重要调节因子,具有抑制细胞凋亡的作用,参与细胞凋亡中线粒体介导的通路,通过本实验我们证实Bcl-2基因mRNA水平下调,提示塞来昔布可能参与线粒体凋亡通路。同时我们选择另一凋亡相关基因ICE,它也是细胞凋亡重要的调节因子,是细胞凋亡另外一条重要通路—Fas凋亡通路的核心,是凋亡中心控制和凋亡发生效应的调节因子。本实验结果显示ICE基因在实验组和空白对照组中没有明显差异,因此我们推断塞来昔布诱导前列腺癌细胞凋亡可能独立于Fas凋亡途径。E- cadherin是调节细胞与细胞之间,细胞与基质之间粘附反应的重要媒介,对维持细胞及组织形态起重要作用。在多种肿瘤细胞生长过程中,其侵袭行为与E-cadherin功能丧失有关。本实验结果显示塞来昔布作用后前列腺癌细胞中E-cadherin mRNA表达水平上调,提示塞来昔布提高了前列腺癌细胞间粘附作用,从而达到降低前列腺肿瘤细胞的侵袭转移的能力。综上所述,我们在实验中证实了,塞来昔布作为选择性COX-2抑制剂可以诱导激素非依赖性前列腺癌DU-145细胞凋亡并首次对肿瘤的侵袭能力做了进一步探讨,证实塞来昔布降低了肿瘤细胞侵袭能力,从而增加其抗肿瘤的作用,这为治疗激素非依赖性前列腺癌提供了实验依据,对前列腺癌的化学预防及治疗具有潜在的应用前景。
陈裕生[7]2008年在《前列腺癌组织中COX-2、bFGF的表达和MVD测定的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:通过测定环氧化酶-2(COX-2)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在前列腺癌组织中的表达及前列腺癌组织中微血管密度(MVD)情况,探讨COX-2与bFGF在前列腺癌中的发生、发展过程中表达的意义,以及二者对血管生成的作用。方法:应用免疫组化SP法检测35例正常前列腺(NP)、76例良性前列腺增生症(BPH)和58例前列腺癌(PCa)组织中COX-2、bFGF蛋白表达及微血管计数,分析其意义。结果:(1)在NP组中COX-2蛋白表达率为0%,在BPH组中COX-2蛋白表达率为9.21%,在PCa组中COX-2蛋白表达率为72.41%,PCa组中COX-2蛋白表达率较前二组升高(p<0.01)。bFGF蛋白在NP、BPH、PCa组织中表达率分别为0%,63.04% ,81.03% ;bFGF蛋白表达率依次增高(p<0.01)。(2)COX-2蛋白在PCa组中阳性表达率为72.41%,与肿瘤的分级、临床分期密切相关,随病理分级、临床分期升高阳性表达率升高(p<0.01),高、中、低分化组间两两比较差异均有统计学意义(p<0.0125);bFGF蛋白在Pca组织中阳性表达率为81.03%,与肿瘤的分级无明显相关性(p>0.05),但与肿瘤临床分期密切相关(p<0.05)。COX-2、bFGF两种蛋白在PCa组织中的表达存在正相关(r=0.536, p<0.01)。(3)MVD的测定:NP组(17.02±3.71),BPH组(28.06±2.32),PCa组(58.80±15.54)。NP、BPH组中MVD差异有统计学意义(p<0.01),NP、BPH二组与PCa组MVD差异有统计学意义(p<0.01),前列腺癌组织中MVD随病理分级、临床分期升高而增高,并与COX-2表达成正相关(r=0.697, p<0.01),MVD与bFGF表达成正相关(r=0.705,p<0.01)。结论:1、COX-2的表达与Pca的发生、发展密切相关。检测COX-2可以协助Pca的病理分级,临床分期和为临床Pca的诊断提供参考价值。2、bFGF的表达与Pca的临床分期相关,bFGF在判定Pca临床进展方面具有一定价值。3、COX-2与bFGF共同参与了肿瘤微血管的形成,从而促进了Pca的进展和转移。
杨雪玲[8]2013年在《前列腺癌冷冻消融后免疫微环境改变的实验研究》文中提出前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤之一。随着我国社会的发展和进步，人口老龄化、城市化、膳食结构西方化、检测技术进步与诊断水平的提高，我国前列腺癌发病率呈迅速上升趋势。由于缺乏有效的筛查机制，我国前列腺癌病例构成以中晚期为主。目前对于中晚期前列腺癌，临床尚无有效治疗方法，如何控制其转移，延长患者生存时间和提高生存质量，是当今国内外亟待解决的重大课题之一。随着临床冷冻外科技术的发展和直肠超声的应用，冷冻消融已成为治疗前列腺癌的有效方法。冷冻消融在局部控制原位肿瘤的同时，释放大量肿瘤抗原，诱导机体产生特异性抗肿瘤免疫反应。深入探讨冷冻免疫反应相关机制，寻求增强冷冻免疫反应的有效方法，有望为中晚期前列腺癌的综合治疗提供新的线索。多不饱和脂肪酸—花生四烯酸（AA）作为一种促炎物质参与肿瘤发生与发展。环氧化酶-2（COX-2）是花生四烯酸代谢过程中的关键酶，前列腺素E2（PGE2）是其重要代谢产物之一，二者在前列腺癌的发生发展中发挥着重要作用。近年来，研究认为COX-2/PGE2在肿瘤免疫逃逸中发挥了重要作用，有望成为免疫调节的分子靶点。因此，COX-2/PGE2是否介导和调节冷冻免疫反应，从而影响肿瘤免疫微环境，是值得我们深入研究和探讨的重大课题之一。本研究集营养与食品卫生学、卫生毒理学、肿瘤学、免疫学、基础医学等多学科理论和方法，以多不饱和脂肪酸—花生四烯酸代谢通路为切入点，观察了花生四烯酸代谢在肿瘤免疫微环境调节中的作用。在深入探讨冷冻免疫反应相关机制的基础上寻找新的线索，观察冷冻消融后COX-2/PGE2变化及肿瘤免疫微环境的改变，分析相关分子机制，进一步丰富冷冻免疫反应相关理论，为单一冷冻治疗模式向综合治疗模式的转变提供理论基础，为寻求冷冻免疫调节的分子靶点提供新的思路，试图为前列腺癌的综合治疗和早期预防提供新的理论和实践依据。
牛玉明[9]2011年在《COX-2基因单核苷酸多态性与头颈部鳞状细胞癌易感性的相关性研究》文中研究表明恶性肿瘤是目前导致人类死亡的最主要的致病因素之一,头颈部鳞状细胞癌(Head and Neck Squamous Cell Carcinoma,HNSCC)泛指发生于口腔颌面部,咽喉及上呼吸消化道等部位的鳞状细胞癌,在恶性肿瘤的死亡因素中列第八位,严重威胁着人类的健康和生命。头颈部鳞状细胞癌的发病原因尚不明确,随着流行病学和分子生物学的发展,目前认为头颈部鳞状细胞癌的发生发展是外界环境与个体遗传因素共同作用的结果。遗传生物学的研究结果表明,个体遗传背景的差异往往导致了患者罹患头颈部鳞状细胞癌易感性的不同,因此,对于易感基因的鉴别可能是筛查患头颈部鳞状细胞癌高危人群和预防其发生的关键。环氧化酶(cyclooxygenase,COX)是一类前列腺素合成过程中重要的限速酶,COX有两个亚单位:COX-1和COX-2。COX-1在正常组织中稳定表达并且合成前列腺素以维持正常的生理功能。而COX-2在大多数组织中不表达或低表达,可被生长因子、内毒素及肿瘤促进因子诱导产生。研究已经证实COX-2在多种恶性肿瘤(包括食管癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、喉癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌、肝癌等)中高表达。此外,我们前期的研究发现COX-2的高表达与头颈部鳞状细胞癌( head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)的发生发展密切相关。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),是一种常见的遗传变异(genetic variation),发生在DNA编码区(coding region)的SNP,可引起所翻译蛋白质的一级结构的变异,进而可能改变蛋白质结构域的功能。如果SNP发生在DNA的非编码区(non-coding region),特别是基因上游的启动子区域(promoter region)及5’和3’端的非翻译区域(untranslated region),则可能影响该基因的转录过程,而改变mRNA的转录及表达,进而影响下游蛋白质的表达和功能,从而可能造成个体对肿瘤易感性的差异。本课题采用分子流行病学“病例—对照”的研究方法,运用分子生物学实验技术,进行COX-2基因遗传变异与头颈部鳞状细胞癌发生易感性的流行病学研究。第一部分COX-2基因单核苷酸多态性与头颈部鳞状细胞癌易感性的相关性研究环氧化酶2(COX-2)是前列腺素(PGs)合成过程中一个主要的限速酶,可将花生四烯酸(AA)代谢成各种前列腺素产物,从而参与机体的多种病理生理过程。COX-2过度表达能够促进细胞增殖、抑制凋亡和促进血管新生,从而导致肿瘤的形成。许多癌前病变和恶性肿瘤中均有COX-2基因的扩增及其蛋白质的高表达。COX-2的表达及其稳定性受基因启动子区及5’和3’非翻译区的多种转录因子调控,在这些区域内的多态性改变可能会影响基因的表达,从而改变个体对肿瘤的易感性。研究表明,在中国人群中COX-2基因启动子区-1195A>G(rs689466),-765G>C(rs20417)位点等位基因的变异可以导致发生食管癌的危险性显着性升高,1759G>A(rs3218625)位点SNP改变将导致COX-2蛋白质中587位的Gly被Arg取代,从而使COX-2催化花生四烯酸的活性增加约1.5倍;而3’端非翻译区8473T>C(rs5275)位点的SNP改变与则可能肺癌及乳腺癌等疾病的发病发生有关。本研究通过病例—对照研究(260例新发头颈部鳞状细胞癌患者:包括169位口腔癌患者、91位喉癌患者和1047例健康对照),探讨①COX-2启动子区域SNP变异位点:-1195A>G,-765G>C;②COX-2编码区SNP变异位点:1759G>A;③3’端非翻译区(3’UTR)SNP变异位点:8473T>C四个变异位点与头颈部鳞状细胞癌易感性的关系。采用Taqman-MGB及PCR-RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制性片断长度多态性)技术进行基因分型,运用多因素Logistic回归,分析基因型及烟酒等危险因素与头颈部鳞状细胞癌发生风险的关系。结果表明:(1)-1195A>G位点SNP改变与头颈部鳞状细胞癌的发生不存在显着统计学关联,与携带野生型纯合子AA的个体相比,携带杂合子AG的个体发病风险:调整OR= 0.87(95%CI=0.63-1.20);携带变异型纯合子GG的个体发病风险:调整OR=1.02(95%CI=0.69-1.50)。(2)-765G>C位点SNP改变与头颈部鳞状细胞癌的发生没有显着的相关性,与携带野生纯合型GG的个体相比,携带杂合子GA的个体发病风险:调整OR=1.01(95%CI=0.61-1.67)。(3)1759G>A位点SNP改变未能发现与头颈部鳞状细胞癌的发生有显着的相关性,与携带野生纯合型GG的个体相比,携带杂合子GA的个体发病风险:调整OR=0.42(95%CI=0.16-1.07)。(4)8473T>C位点SNP改变与头颈部鳞状细胞癌的发生没有显着的统计学关联,与携带野生纯合型TT的个体相比,携带杂合子TC的个体发病风险:调整OR=0.90(95%CI=0.66-1.22);携带变异型纯合子CC的个体发病风险:调整OR=1.48(95%CI=0.68-3.25)。本研究结果提示,-1195A>G,-765G>C,1759G>A,8473T>C位点的SNP改变与中国汉族人群中头颈部鳞状细胞癌发生的易感性之间不存在显着的统计学关联。第二部分COX-2基因启动子区域单核苷酸多态性与启动子活性改变的功能性研究COX-2基因启动子区域含有与多种转录因子相互结合的位点,比如PEA3、IL6、NFKB、SP1和c-MYB等。在COX-2基因的转录过程中,这些转录因子与启动子区域密切结合。COX-2基因启动子区域SNP改变将直接影响其与特定的转录因子的结合能力,导致基因的转录能力的改变,进而引起蛋白质表达水平发生变化。本研究通过PCR技术扩增从-1940核苷酸到+201核苷酸的COX-2基因启动子序列,片段长度共2141bp,产物纯化后直接进行测序确认,然后利用定点突变技术获得含有-1195A>G,-765G>C位点等位基因突变的DNA片段。通过双酶切消化及连接反应与pGL3-Basic载体相结合,成功构建含有COX-2基因启动子区域-1195A>G和-765G>C SNP位点的3种含有COX-2基因启动子的报告基因质粒:pGL3-A_-1195-G_-765,pGL3-G_-1195-G_-765,pGL3-A_-1195-C_-765。通过瞬时转染Tca-8113,Hela和MG-63细胞系并结合双荧光素酶检测发现:pGL3-A-1195-G-765质粒的荧光素酶活性均显着高于pGL3-G-1195-G-765质粒(P<0.001);而pGL3-A_-1195-G_-765质粒与pGL3-A_-1195-C_-765质粒的荧光素酶活性无显着性差异。本研究结果表明,-1195A→G的SNP改变可导致启动子区域转录活性的改变,降低启动子的转录活性;而-765G→C的SNP改变未能导致启动子区域转录活性的变化。
陈俊熹[10]2007年在《E-钙黏附素与环氧化酶-2在胃癌中表达的相关性及其临床意义》文中指出目的:研究E-cadherin(E-钙黏附素)与COX-2(环氧化酶-2)在胃癌组织中的表达和相关性及其临床意义。方法:应用链霉素抗生物素蛋白—过氧化物酶免疫组织化学(S-P)染色法,分别检测63例胃癌组织、56例癌旁组织及15例胃正常组织中E-钙黏附素与环氧化酶-2的表达情况。统计学分析采用χ~2进行检验,E-钙黏附素与COX-2在胃癌中的表达用Spearman法进行相关性分析,以P＜0.05水平为差异具有统计学意义。结果:E-cadherin在胃癌组织、癌旁组织、胃正常组织中的阳性表达率分别为30.15%(19/63)、85.71%(48/56)、100%(15/15),E-cadherin在胃癌组织中的表达率与在癌旁组织及胃正常组织中的表达率的差异有统计学意义(P＜0.05)。E-cadherin表达与淋巴结转移、分化程度和TNM分期密切相关(P＜0.05),与性别、年龄、肿瘤生长部位、肿瘤直径、浸润深度差异无关(P＞0.05)。COX-2在胃癌组织、癌旁组织、胃正常组织的阳性表达率分别为73.01%(46/63)、14.28%(8/46)、0%(0/15),COX-2表达与淋巴结转移和TNM分期密切相关(P＜0.05),与性别、年龄、分化程度、肿瘤生长部位、肿瘤直径、浸润深度差异均无关(P＞0.05)。相关性检验显示了E-cadherin和COX-2之间呈负相关(r_S=—0.302,P=0.016＜0.05)。结论:胃癌组织中E-cadherin表达下调,COX-2表达上调,共同参与了胃癌的侵袭和转移,E-cadherin与COX-2有协同表达关系。联合检测胃癌组织中E-cadherin和COX-2的表达对判断预后和指导治疗有一定意义。
参考文献：
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[2]. COX-2、p53在前列腺癌组织中的表达及其临床意义[D]. 姚文. 广州医学院. 2012
[3]. COX-2和SPARC在口腔鳞癌中表达的研究[D]. 吴训. 广西医科大学. 2016
[4]. 塞来昔布对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-C及bcl-2 mRNA表达的影响[D]. 胡乃刚. 青岛大学. 2008
[5]. 乳腺癌中环氧化酶2的表达及其临床意义的研究[D]. 李莉. 第二军医大学. 2005
[6]. 塞来昔布诱导前列腺癌细胞凋亡及其机制的研究[D]. 赵纪宇. 中国人民解放军军事医学科学院. 2010
[7]. 前列腺癌组织中COX-2、bFGF的表达和MVD测定的实验研究[D]. 陈裕生. 南华大学. 2008
[8]. 前列腺癌冷冻消融后免疫微环境改变的实验研究[D]. 杨雪玲. 吉林大学. 2013
[9]. COX-2基因单核苷酸多态性与头颈部鳞状细胞癌易感性的相关性研究[D]. 牛玉明. 南京医科大学. 2011
[10]. E-钙黏附素与环氧化酶-2在胃癌中表达的相关性及其临床意义[D]. 陈俊熹. 广西医科大学. 2007
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