鸡西市人民医院 158100
摘要：目的：研究急性早幼粒细胞白血病患者微小残留病的检测与临床效果，探索其对预后判断的临床指导意义。方法：建立逆转录用以检测APL患者的PML/RAR。结果：RT-PCR方法敏感而可重复。治疗前APL患者的RT-PCR阳性率为90.63%（29/32），而维甲酸或化疗诱导完全缓解后MRD阳性率为43.75%（14/32）。MRD阳性可以作为缓解后预测APL患者复发的指标，且有助于减少复发。结论：RT-PCR是检测APL患者的MRD和作为预测复发的指标。
关键词：急性早幼粒细胞白血病；微小残留病；RT/PCR
急性早幼粒细胞性白血病是以特异的染色体易位为特征。其主要是通过染色体上的PML基因和染色体上的RARα基因并列而导致融合基因PML/RARα形成。根据PML断裂点的位置不同产生2个主要的PML/RARα异构体。断裂点的外显子3和RARα外显子3之间形成短型融合mRNA产物，而位于PML内含子6于RARα外显子（r3）形成长型融合体。RT-PCR法的建立有助于扩增PML/RARαmRNA异构体。另外，RT-PCR的高度敏感性使得MRD有效预防患者的白血病的复发。白血病患者完全缓解后的微小残留病已被证实与复发有关。MRD的检测成了指导缓解后进一步化疗的重要指标。在目前血液病的应用实践中，MRD检测的最好例子是骨髓移植后RT-PCR法检测慢性粒细胞白血病（CML）的BCR-ABL融合基因。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆本文采取1999~2001年发病的32例患者为研究对象，特将研究结果报道如下：
1资料与方法
1.1 一般资料
本研究中的32例患者均为1999~2001年发病，男15例，女17例，年龄13~71岁，根据FAB标准诊断为APL。所有病例均经全反式维甲酸治疗而得到诱导缓解。巩固化疗方案后处于缓解期的患者，利用全国维甲酸协作治疗组建议的ATRA与化疗联合治疗方案维持治疗。
1.2研究方法
1.2.1RNA提取
10ml淋巴细胞分离液加于试管中，然后2ml骨髓细胞缓慢加入试管中，离心4000r/min 20min。取单个核细胞移入另一试管中，再用异硫氢酸胍-酚-氯仿一步法抽提RNAs。提取时注意避免样品间的交叉污染。
1.2.2筑巢式RT-PCR检测
APL的PML/RARα检测方法：6个寡核苷酸引物用于逆转录、扩增，检测其长或短型异构体的检测。
2 结果
2.1 RT-PCR阳性百分率
用全反式维甲酸治疗前APL患者PML/RARα的检测，27例为L型阳性，5例为S型阳性。L型、S型或2型的总阳性百分率分别为84.38%（27/32）、15.62%（5/32）.
2.2复发与MRD之间的关系
在2年和3年内，MRD阳性APL患者的复发百分率高于MRD阴性的APL患者复发百分率。缓解2年和3年内，MRD阳性患者的第一次复发平均时间高于MRD阴性患者第一次复发的时间（月）。随访4或6年，MRD阳性患者的无病生存率低于MRD阴性患者的无病生存率。3年之内的两组存活率差异无显著性（P>0.05），而4年后时两组的存活率差异有显著性（P<0.05）。
可见，MRD检测的意义在于指导此病的治疗，尤其是当MRD阴性转为MRD阳性时。CR后7例中有4例再一次转阴。他们均无病状态存活超过6年。另有3例存活2年无复发。相反，4例转为阳性无巩固治疗的MRD检测4~12个月复发。其中1例没有获得第2次缓解而死亡。
3 讨论
已经证实 ATRA可以有效地诱导APL 患者完全缓解，患者约90%以上对于足够疗程的ATRA有效。然而，单独应用ATRA的患者在6个月内复发，究其原因是ATRA在大多数患者中它不能充分消除白血病细胞克隆。因为 APL患者应该采用化疗与ATRA治疗相结合才能将体内存留的东西完全清除掉。MR很难通过外周血的常规形态学检测到，只有因为采用化疗与ATRA治疗相结合，才能消除MRD和预防复发。
尽管化疗或ATRA能诱导APL患者的临床缓解，但少量的恶性细胞仍在体内存留或成为MRD状态。MRD很难通过外周血的常规形态学检测到，而只能通过特异和敏感的PCR或RT-PCR方法检测到。在目前的研究中，RT-PCR检测APL中的MRD是有应用价值的。因为其敏感度高足以检测MRD。子啊检验科中经常应用RT-PCR方法进行PML/RARα融合用于检测APL缓解后的MRD。2年和3年内，MRD阳性患者缓解后第一次复发的平均时间高于APL患者，因此MRD阳性患者易复发。MRD检测随着CR后的时间延长而减低。数据表明，初诊时L型异构体、S型异构体或总异构体阳性百分率是84.38%（27/32），而APL患者CR后MRD阳性率为15.62%（5/32）。MRD百分率明显减低，主要是与敏感度大小或选择的不同病例有关。
参考文献：
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论文作者:林玉华,刘绪鑫,闫波
论文发表刊物:《健康世界》2017年第5期
论文发表时间:2017/5/4
标签：患者论文; 阳性论文; 百分率论文; 粒细胞论文; 白血病论文; 甲酸论文; 阴性论文; 《健康世界》2017年第5期论文;