【摘 要】为了确定健脑灵片的质量控制标准，使用薄层色谱方式对其中的白芍、酸枣仁、当归等进行鉴定，通过高效液相色谱来进行芍药苷的测量。鉴定结果表明薄层色谱鉴定的色谱斑点明显，高效液相色谱能够准确测量芍药苷的含量，所以在健脑灵片的质量测定中使用这两种方法能够起到有效作用。
【关键词】健脑灵片；薄层色谱；芍药苷
健脑灵片的成分包括五味子、酸枣仁、当归等多，种类多达134种，根据国家制定的卫生部药品标准中的中药药品成方的内容参考，健脑灵片的成分具有镇静和安神等效果，可以用来治疗由于肾阳缺乏引起的头晕、失眠、多梦等症状，使服用者能够改善状态。健脑灵片的治疗标准较为简单，在质量的管理上缺乏更加严格有效的方式，为了控制好其质量，采取试验来进行对药品进行薄层色谱鉴定，同时对芍药苷的含量进行测定，试验添加了白芍、当归、酸枣仁、川芎。
1使用仪器和药品
Waters高效液相色谱仪，包括515泵,2487紫外检测器,浙江智达N2000色谱工作站;岛津UV-2450紫外可见分光光度计;ZY-600U型薄层色谱自动成像分析系统。硅胶G(青岛C厂分厂)。芍药苷对照品、酸枣仁对照药材)、当归对照药材、川芎对照药材,购自中国药品生物制品检定所;乙腈(色谱纯)，水(超纯水),其他试剂(分析纯)，健脑灵片。
2 试验方法与结论
2.1 色谱鉴定过程
白芍11-31:取本品15 片,除去糖衣，研细，加甲醇50mL,超声处理( 功率250 W,频率40 kHz )20min,,滤过,滤液蒸干,残渣加水30 mL 使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3 次，每次30 mL,合并正丁醇液,用水洗涤2 次,每次30mL,弃去水液,将正丁醇液蒸干,残渣加甲醇2 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品适量，加甲醇制成5 mg/mL 的溶液,作为对照品溶液。按处方及制法制备缺白芍的阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。吸取供试品、对照品和阴性对照品溶液各5 uL,分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氣甲烷- 乙酸乙酯- 甲醇- 甲酸(40 :5 :10:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷10% 硫酸乙醇溶液,在105 C 下加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点,阴性对照品溶液无干扰。
酸枣仁的测定：取适量药品，将外层糖衣除去，研磨之后放入锥形瓶中，加入50ml的甲醇，经过提取过滤之后，在残留物质中加入适量甲醇继续溶解，完成供试品溶液的配制。将酸枣仁药材配制出对照药材溶液，再配制缺酸枣仁的对照样品以及阴性对照品溶液。选择5uL的供试品溶液和对照品溶液，1uL的对照药材溶液，使用薄层板，通过二氯甲烷甲酸来进行展开，然后晾干，再使用磷钼酸乙醇溶液，置于120摄氏度下观察，供试品溶液色谱和对照药材溶液色谱显示同样的斑点。
当归、川芎:取本品10 片,除去糖衣,研细，加乙醚30mL,超声处理( 功率250 W,频率40 kHz )20min ，滤过，滤液挥干,残渣加乙酸乙酯1mL 使溶解，作为供试品溶液。取当少对照药材0.5 g 及川芎对照药材1g,按供试品溶液制备方法,当归对照药材残渣加乙酸乙酯1mL 使溶解，川芎对照药材残渣加乙酸乙酯5 mL 使溶解，分别制成当归和川芎对照药材溶液。按处方及制法制备缺当归、川芎的双阴性对照样品,再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。吸取供试品溶液、当少对照药材溶液、川芎对照药材溶液和阴性对照品溶液各5 pL,分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正已烷- 乙酸乙酯(9: 1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 rnm) 下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点,阴性对照无千扰。
2.2 芍药苷含量测量
2.2.1 色谱条件和适用性试验
色谱柱:C18 柱(250mm x4.6mm,5 um); 柱温: 室温; 流动相;乙腈-0.1% 磷酸溶液(15:85);流速:1mL/ min; 测定波长: 230nmo进样量:20 uL。在此色谱条件下，供试品溶液中芍药苷峰达到基线分离，峰形对称，保留时间适中( 约17 min),分离度为5.0,理论塔板数为11000。
2.2.2 溶液配制
取本品20 片，去糖衣,精密称定,研细,取药品粉末约0.5g,精密称定,置磨口锥形瓶中,精密加入无水甲醇50 mL,置水浴中回流1.5 h,取出,放冷,摇匀,滤过,将滤液蒸干,残渣以10mL 无水甲醇溶解，加到预先处理好的中性氧化铝柱上(4 g,内径10 mm，柱高30cm,100~200目),用无水甲醇80 mL 洗脱，收集全部洗脱液，蒸干,残渣以无水甲醇溶解并转移至5 mL 量瓶中，以无水甲醇定容后,摇匀,过0.45um的微孔滤膜,取续滤液即得供试品溶液。精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1mL 含0.2 mg的溶液,即得对照品溶液。按处方及制法制备缺白芍药材的阴性对照样品,取相当于供试品的量,按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。
2.2.3方法考察
精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10uL,分别注入液相色谱仪,依法测定。结果阴性对照品溶液对试验无干扰。线性关系考察:精密吸取对照品溶液(取芍药苷对照品10.58mg,加甲醇50mL,制成0.2mg/mL的溶液)1,4,7,10,13,16uL,注入液相色谱仪，依法测定。以进样量(uL)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线,回归方程为Y=318245.37X-862.99,r=0.9998(n=6)。结果表明,芍药苷进样量在0.2116~3.3856ug范围内与峰面积线性关系良好。重现性试验:取同一批号的供试品6份，依法测定含量。结果含量的RSD 为2.2% (n= 6)，表明方法重现性良好。
中间精密度试验:取同一批的供试品6 份，分别由甲、乙、丙3人在不同的时间用同一台设备依法测定。结果含量的RSD 为2.9%(n=6)，表明仪器精密度良好。
稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在配制0,1,2,3,4,5,6h时进样,依法测定芍药苷峰面积。结果的RSD 为0.6% (n= 7),表明供试品溶液制备后6h 内稳定性较好。
色谱柱比较试验: 取同一批供试品2 份，分别用Phenomenx Gis柱、Thermo ODS- 2 Hypersil 柱和Apollo Cis 柱3 种品牌的色谱柱依法测定芍药苷峰面积，并计算芍药苷的含量。结果的RSD 为1.3%(n=6)。表明3 种品牌的色谱柱所得结果无明显差别。
加样回收试验: 取同一批已知含量( 批号为050701,含量为1.03 mg/g)的供试品6 份，分别精密加入不同量的芍药苷对照品溶液,按供试品溶液制备方法制备溶液,依法测定,计算回收率。结果见表1。
表1 芍药苷加样回收率试验结果
2.3 结论
鉴别酸枣仁采用二氯甲烷甲醇作为展开剂，这时通过观察酸枣仁的斑点，Rf的值较大，和溶剂的前沿过于接近，同时斑点拖尾非常明显，在多次的试验之后，使用甲酸进行改善，能够使酸枣仁的斑点的Rf的值处于正常范围，还能够避免拖尾的现象，所以试验使用的展开剂应该延长其预饱和时间。
根据相关资料中记载的当归等药材的信息，当归和其他药材的成分相似，对其中的川芎进行鉴定的时候无法将干扰排除，即使采用氯仿、乙醚等进行提取，使用正己烷和正丁醇等作为展开剂，也不能将干扰彻底排除，所以在鉴定的过程中，将当归等药材放在一起效果较好。芍药苷的鉴定在使用紫外可见分光光度计的时候，当波长在200-400nm的范围内对对照品进行扫描能够得到最大吸收的波长，根据这个参考值进行鉴定能够提高准确性，在对药品进行流动的改善之后可以得到更加有效地图谱。供试品的配制经过试验并且对提取方式进行对比发现，回流的效果更好，时间在1.5h时最好，提取剂使用无水甲醇能够得到更好的提取效果，供试品过柱分离的效果较好，应采用中性氧化铝柱。
参考文献
[1]李劲松. 健脑灵片质量标准中的成分鉴别和芍药苷含量测定研究[D]. 湖北工业大学, 2017.
[2]黄清玲, 李宏伟. 综述健脑灵片临床应用[J]. 医药, 2016(11):00291-00291.
论文作者:童艳
论文发表刊物:《世界复合医学》2018年第06期
论文发表时间:2018/7/31
标签：溶液论文; 色谱论文; 芍药论文; 药材论文; 甲醇论文; 阴性论文; 当归论文; 《世界复合医学》2018年第06期论文;