(雅安职业技术学院基础医学部 四川雅安 625000)
【摘要】目的:探讨褪黑素对氯化汞所致家兔急性肾功能衰竭的影响。方法:随机将18只家兔分为正常对照(NC)组、急性肾功能衰竭(ARF)模型组、褪黑素治疗(M)组,ARF组和M组每天给予褪黑素20mg/kg灌胃,NC组给予等量生理。连续7天后,ARF组和Mel组给予1%氯化汞1.0ml/kg肌肉注射,NC组注射等量生理盐水。36h后各组家兔麻醉后取血,检测血浆尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)以及氧化应激指标MDA的水平和总SOD活力,取肾组织观察肾组织形态学变化及TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡指数(apoptosisindex,AI)的变化。结果:与NC组相比,ARF组家兔注射氯化汞后肾组织肾小管上皮细胞明显水肿,肾小球充血,血浆BUN、Scr,MDA及AI明显升高(P<0.05),SOD活力明显降低(P<0.05);与ARF组相比,Mel组家兔肾小管上皮细胞水肿减轻,肾小球充血减轻,血浆BUN、Scr,MDA及AI明显降低(P<0.05),SOD活力明显升高(P<0.05)。结论:预防性给予外源性的褪黑素可以有效的减轻汞中毒家兔的肾脏损伤,具有一定的保护作用
【关键词】褪黑素;氯化汞;急性肾功能衰竭
【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231(2016)32-0272-02
【Abstract】Objective To investigate the effect of melaton in acute renal failure rabbits was caused by mercuric chloride. Methods 18 rabbits were randomly divided into three groups,The normal control (NC) group, the acute renal failure (ARF) model group and the melatonin (Mel) group, ARF group and Mel group were given melatonin into stomach by 20mg / kg irrigation,the NC group was given the same amount of physiological. After 7 days, ARF group and Mel group was given inject 1% mercuric chloride by 1.0ml / kg, the NC group were injected with normal saline. after 36 hours later each group of rabbits were exsanguinated after anesthesiaed ,to detected the total urea nitrogen (BUN) and the creatinine (Scr) in plasma ,the level of SOD activity and the level of MDA , the kidney tissue was removed for viewing morphological changes in kidney and the changes apoptosis index (AI) with TUNEL staining. Results Compared with NC group, edema obviously in renal tubular epithelial cells in ARF rabbits was injected mercuric chloride and the glomerular hyperemia, the plasma BUN, Scr, MDA and AI was significantly increased (P <0.05), SOD vitality decreased significantly (P <0.05); compared with ARF group, after, the cell edema epithelial of renal tubular in Mel group, and the glomerular congestion. BUN, Scr, MDA and AI decreased significantly (P <0.05 ), SOD activity was significantly increased (P <0.05). Conclusions Give Prophylactic of exogenous melaton was effectively reduced the damage in kidney rabbits have a protective effect on mercury poisoning.
【Key words】Melatonin; Mercuric chloride; Acute renal failure
急性肾功能衰竭(acute renal failure ARF)是临床常见的危重病症,其发病机制较为复杂。研究表明ARF过程中存在着肾小管上皮细胞的凋亡[1]。细胞凋亡与肾组织内氧化应激水平又有着密切的关系[2]。褪黑素(Mel)是松果体分泌的一种神经内分泌激素,具有抗氧化、抗细胞凋亡作用,能有效地清除体内产生的自由基。本研究采用氯化汞诱导的家兔ARF模型,探讨外源性褪黑素对ARF家兔的肾脏的影响。
1.实验材料与方法
1.1 实验动物与分组
选用普通家兔18只,雌雄不拘,体重2.0~2.5kg。家兔适应性喂养3天后,随机将家兔分为正常对照(NC)组、急性肾功能衰竭(ARF)模型组、褪黑素治疗(M)组。
1.2 动物模型的建立
Mel先用无水乙醇溶解再用生理盐水稀释,使之成为每毫升含有20mg Mel的溶液,其中ARF组和M组每天给予Mel 20mg/kg灌胃,连续7天;NC组给予等量生理盐水。7天后,ARF组和Mel组给予1% Hgcl 1.0ml/kg臀部肌肉注射,NC组注射等量生理盐水,正常饮食。
1.3 标本制备
36h后,各组家兔通过耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠进行麻醉,然后心脏采血10ml,用于血清指标的检测,解剖并取出双侧肾脏,用生理盐水洗净去除包膜,左肾脏用中性甲醛固定,制备石蜡切片;右肾-20℃冻存备用。
1.4 肾功能检测
血浆尿素氮(BUN)和血肌酐 (Scr)测定均采用全自动生化分析仪测定(由雅安职业技术学院附属医院完成)。
1.5 肾组织形态学检查
采用HE染色观察。
1.6 TUNEL法检测肾组织细胞凋亡
采用武汉博士德公司凋亡检测试剂盒(石蜡切片专用),对石蜡切片进行染色,在光镜下观察肾小管细胞凋亡情况,每张切片10个连续不重叠视野中的阳性细胞数计数,计算每100个细胞中平均阳性凋亡细胞数,即凋亡指数(apoptosis index,AI) ,AI(%)=阳性细胞数/视野所有细胞总数×100%。
1.7 肾组织氧化应激检测
检测血浆组织丙二醛(MDA)的水平和总超氧化物歧化酶(SOD)活力,试剂盒由南京建成生物工程公司提供试剂盒,并按试剂盒说明操作检测。
1.8 统计学处理
本实验数据以均值±标准差(x-±s)表示,结果用SPSS 19.0统计软件分析,数据处理采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 家兔一般情况
NC组家兔进食饮水均正常,精神状态好,反应灵敏,动作敏捷,毛色有光泽。ARF组家兔注射氯化汞后,进食和饮水明显减少,精神差,反应迟钝,动作迟缓,尿量明显减少。Mel组状况良好。
2.2 肾组织形态学改变
NC组肾脏外观正常,镜下观肾小球肾小管无明显的病理学改变;ARF组肾脏体积增大,肿胀,呈紫黑色,表面有出血点,镜下可见肾小管上皮细胞明显水肿,肾小球充血;Mel组肾脏颜色暗红,体积增大,出血点少见,镜下观病变较轻,水肿亦不明显。
2.3 肾功能检测结果
ARF组家兔血浆BUN、Scr水平较NC组明显升高(P<0.05);MEL组血浆BUN、Scr水平显著降低(P<0.05)见表1。
3.讨论
ARF是由多种病因引起短时间内肾功能急剧下降,水、电解质和酸碱平衡失调,体内毒性代谢产物蓄积的一种综合征。其发病机制主要是肾血流量减少,肾小球本身病变,肾小管阻塞、原尿回漏,其中在持续的肾脏毒物作用下,肾小管上皮细胞变性、坏死脱落,原尿回漏等使肾小球滤过率(glomerular filtration rate GRF)下降。细胞凋亡可导致肾小管上皮细胞的丢失,成为肾功能损伤的一个重要的因素[3]。
本研究表明给予家兔注射1% Hgcl以后,家兔出现明显少尿、无尿等ARF症状,血浆BUN、Scr明显升高,出现肾脏损伤的形态学改变,说明ARF模型复制成功;注射氯化汞的家兔其血浆中MDA含量显著增加及SOD活力显著降低,凋亡指数明显增加,证明急性肾功能衰竭家兔体内存在氧化应激和细胞凋亡等病理生理过程的发生;而预防性给予Mel的家兔有效改善了血浆BUN、Scr水平,病理改变减轻,同时部分逆转了SOD活性下降以及MDA的含量上升,且凋亡指数明显下降,表明Mel对氯化汞所致的ARF具有一定的保护作用。
在急性肾损伤中,氧化应激及其诱导的细胞凋亡在发病过程中起着重要的作用,氧化应激产生的大量活性氧分子(ROS)可通过不同的途径引起细胞凋亡[2、4]。MDA是脂质过氧化的代谢产物,其含量的高低能够反映组织脂质过氧化损伤程度;SOD是体内的抗氧化剂,活力的高低可间接反应体内脂质过氧化水平。研究表明,汞中毒所致家兔肾组织自由基损伤可引起ARF[5]。本研究中汞中毒家兔肾功能出现异常,体内MDA含量明显增加,SOD活性明显下降,凋亡指数增高,表明体内存在明显氧化应激状态。其可能由于氧化应激导致肾组织内产生了大量的ROS,ROS增多除能够使细胞凋亡主动发生外,也可以通过激活体内一系列信号传导通路来诱导细胞凋亡,导致细胞凋亡过度,从而促进了急性肾损伤等疾病的发生[2]。
褪黑素是一种强自由基清除剂,可以有效的减少体内自由基的生成并提高体内抗氧化酶的活性。本实验证实,在给予家兔预防性应用Mel后,可以有效改善肾功能,减轻体内氧化应激水平(MDA含量明显降低),提高抗氧酶(SOD)的活性,减少肾脏的细胞的凋亡,对急性肾功能衰竭具有一定的保护作用。
综上所述,汞中毒可增强家兔肾组织内氧化应激水平,通过一系列信号传导通路导致肾脏细胞过度凋亡,从而促进ARF的发生,而预防性给予外源性Mel可以有效的减轻肾脏损伤,对肾脏具有一定的保护作用,其机制可能是通过减轻体内肾组织氧化应激损伤,进而减少肾脏细胞的凋亡发挥其保护作用的。
【参考文献】
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论文作者:刘昌明,黄香尘,孙玉锦,邓良超
论文发表刊物:《心理医生》2016年32期
论文发表时间:2017/1/21
标签:家兔论文; 凋亡论文; 氯化汞论文; 细胞论文; 肾脏论文; 肾小管论文; 肾功能论文; 《心理医生》2016年32期论文;