周键[1]2004年在《蜂花粉中功能因子的提取、纯化及应用研究》文中研究表明本文采用不同的实验方法，从破壁油菜蜂花粉中分别提取了蛋白免疫因子、赤霉素以及环氧肟酸叁种功能因子。 采用浸泡72小时、盐析、超滤、DEAE Sephadex A-25离子交换、Sephadex G-50凝胶过滤、FPLC等方法处理破壁油菜蜂花粉，可以得到一种分子量约为9KDa，由叁个多肽链组成的蛋白免疫因子。该物质对环磷酰胺(CTX)抑制小鼠进行免疫功能提高试验显示，该蛋白质具有较强的促免疫活性作用，高剂量(0.645g／kg)可明显提高免疫低下模型小鼠体液免疫作用及细胞免疫功能。 将破壁油菜蜂花粉100g，在避光条件下用无水乙醇(料液比1：10)连续搅拌浸提2小时，浸提液经离心、洗涤、真空浓缩、pH值调节、阴阳离子树脂交换、乙酸乙酯萃取、吹干再冻干后用HPLC法分析，得冻干样品中赤霉素衍生物的含量为51.29％。 将破壁油菜蜂花粉100g，加14.5％乙腈(pH=2.0)(料液比1：10)在室温下萃取14小时；再经凝胶柱层析Sephadex G-10或SephadexG-25与G-10联用，可从中提取纯化出抗前列腺增生的主要成分环氧肟酸，含量为0.015％(150μg／g)。 此外，本文也对蜂花粉功能因子的应用进行了初步的研究和阐述。
王艳敏[2]2010年在《蜂花粉中有效成分的提取及功能性研究》文中研究指明花粉是植物的雄性生殖细胞,含有丰富的各种营养成分,在国际上有“天然完全营养素”的美誉。玉米花粉多糖具有抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力等功能,但坚硬的花粉壁阻碍了多糖成分的溶出,降低了提取效率。动态超高压微射流技术是一项新兴的高压均质技术,其剧烈的处理条件可导致植物细胞破碎,且对活性成分几乎无破坏。本研究侧重于应用动态超高压微射流技术对玉米花粉进行破壁,并与干法粉碎破壁、复合酶酶解破壁比较破壁效果和多糖得率,在此基础上对玉米花粉多糖抗氧化活性功能进行了评价,为今后玉米花粉多糖更深入的研究与开发奠定基础。同时对花粉中有助于治疗前列腺疾病的功能因子--环氧肟酸进行了定性和定量分析。本论文的主要研究内容与结论如下：1、以葡萄糖为对照,优选蒽酮-硫酸法测定玉米花粉多糖的含量。结果表明：玉米花粉多糖的吸收光谱与葡萄糖基本一致,标准曲线的线性关系良好(R2=0.9996),此法在回收率、精密度、稳定性方面均较好,可作为测定玉米花粉多糖含量较为理想的方法。2、采用正交试验优化干法粉碎花粉并提取多糖的条件,结果表明提取溶液pH值对多糖得率有极显着的影响,最佳条件为：取粉碎并过120目筛分的花粉,调节花粉乳液pH值7.0,料液比1：15,提取温度70℃,提取时间3 h,提取两次,此时多糖得率为7.239%。3、采用果胶酶和纤维素酶组成的复合酶对玉米花粉进行酶解破壁处理,通过正交试验优化酶解条件。结果表明果胶酶添加量是影响花粉多糖得率的最主要因素。最佳条件为：果胶酶添加量300U／g花粉,纤维素酶添加量150U／g花粉,20%花粉乳浓度,pH4.5,50℃酶解破壁5h,在此条件下多糖得率为7.194%。4、采用动态超高压微射流技术对玉米花粉进行湿法破壁处理,Box-Benhnken响应面设计优化条件参数。结果表明均质压力和提取温度对多糖得率的线性效应和曲面效应均显着。最佳提取条件为：微射流均质压力127MPa,均质处理一次,料液比1：20,72.4℃下提取1.7 h,提取2次,此时玉米花粉多糖得率达到理论最大值8.086%,与验证试验结果一致。与干法粉碎和酶解破壁提取结果相比,提取时间缩短了1.3 h,多糖得率提高了0.847%。5、红外光谱扫描的结果表明叁种破壁方式提取的多糖的红外光谱图基本吻合,主要官能团没有差异,说明使用高压微射流技术不会破坏玉米花粉多糖的结构。高倍扫描电镜观察破壁效果的结果表明：干法粉碎和酶解破壁处理的花粉仍有少量未完全破壁的花粉颗粒,粒径不均匀,可见原材料的粉末特征；而经微射流均质处理的花粉均完全裂解为大量碎片,粒度明显变小,内容物全部溢出。因此,超高压微射流技术处理花粉的破壁效果最好。6、初步探讨超高压微射流技术使花粉破壁的机理是：高压均质过程中剧烈的处理条件使花粉细胞的组织结构完全破碎,原来颗粒比较粗大的花粉乳液被加工成颗粒非常细微的乳浊液,使花粉细微颗粒充分与提取溶剂相接触,从而提高提取效率。7、通过紫外扫描和HPLC-MS对舍尼通药片提取物进行定性分析,最终确定其为环氧肟酸,纯度约为94%。采用Sephadex G-25和G-10二者联用对玉米花粉DIBOA提取液进行纯化,经HPLC定量分析并计算得到玉米花粉中环氧肟酸的含量约为0.029%(290μg/g)。8、玉米花粉粗多糖和精制多糖组分PPMC对DPPH、O2和.OH自由基均有一定的清除作用,并且随着多糖浓度的增大清除作用增强。二者对DPPH的清除作用最大,对·OH和O2·-自由基的清除作用都比较弱。在同一浓度下,精制多糖组分PPMC对这叁种自由基的清除率都略高于粗多糖。
胡筱波[3]2007年在《油菜花粉谷蛋白酶解肽的制备及其抗肿瘤活性研究》文中研究指明油菜是我国的主要油料作物，因而油菜蜂花粉是高产价廉的蜂花粉。油菜蜂花粉中蛋白质含量高达20％-25％，足以与大豆、豌豆相媲美，其氨基酸组成比例合适，必需氨基酸含量较高。利用酶法水解蛋白质制备油菜花粉肽，目前还未见报道。我们以油菜花粉为原料，首次系统研究了油菜花粉蛋白各组分，对谷蛋白进行酶解，得到油菜花粉谷蛋白酶解肽(PRPG)，并采用现代分子生物学技术研究了PRPG的抗肿瘤作用及其作用机制。主要结果如下：1油菜花粉蛋白组分的研究新油菜花粉与陈油菜花粉的各营养素含量相差不大，而且陈油菜花粉更有利于破壁；破壁脱脂后的油菜花粉蛋白质含量为22.42％，破壁脱脂后的油菜花粉中谷蛋白和清蛋白为油菜蜂花粉中主要的蛋白组成，分别占总蛋白的55.7％和39.0％，其它依次为球蛋白(3.2％)和醇溶蛋白(2.1％)。2油菜花粉蛋白的营养价值评价油菜花粉蛋白的理化性质研究表明，清蛋白具有较好的吸水性、吸油性以及良好的乳化性和乳化稳定性等，可广泛应用于食品、饮料中。在清除·OH试验中，清蛋白对羟基自由基的抑制率为54.35％，而碱溶谷蛋白只有25.08％。氨基酸检测表明花粉蛋白氨基酸组成独特，平衡良好，必需氨基酸含量高。由氨基酸比值系数法(SRC)分析结果表明，四种蛋白中碱溶谷蛋白的SRC最高，故其营养价值最好，但由于它在人体胃酸性环境下生物利用率很低，所以我们以谷蛋白为后续实验材料，经酶法改性后，不仅生物利用率提高，且能使它的生物活性提高。通过单因素试验和正交试验分析确定了油菜花粉谷蛋白的最佳提取条件为：料液比为1∶20、温度70℃、pH11、浸提时间75分钟、氢氧化钠浓度0.3％。3油菜花粉谷蛋白酶解肽的制备以水解度为指标，选择碱性蛋白酶(alcalase)来水解制备花粉谷蛋白酶解物。通过对水解条件的系统研究发现，碱性蛋白酶(alcalase)能够有效地水解花粉谷蛋白，其最佳酶解条件确定为底物浓度6％，pH值9.0，水解温度50℃，酶底比1460U／g蛋白。在此条件下水解2h，酶解液水解度可达24.5％左右。以盐水作为洗脱液，用葡聚糖凝胶Sephadex G-25层析分离PRPG，获得叁个级分(P1、P2和P3)。经过层析分级后，总回收率为60.21％，叁个级分在总量中所占比例依次为15.7％、70.2％、14.1％。酶解肽粗品及经分离后得到的各组分在2mg／mL时对羟基自由基均有较好的清除作用，但只有含量最低的P3对羟基的清除能力高于同等浓度下的酶解肽粗品，P1和P2都没有酶解肽粗品的抗氧化能力强，P1甚至低于相同浓度时的清蛋白和球蛋白的活性。4油菜花粉谷蛋白酶解肽的抗氧化活性经体内体外试验，从不同层次水平系统研究了PRPG的抗氧化活性，对PRPG的抗氧化作用与机理进行了研究。测定了油菜花粉酶解物PRPG在化学模拟体系、小鼠肝线粒体、小鼠红细胞以及小鼠肝匀浆中的抗氧化作用。结果显示：在化学反应体系中，PRPG具有较强的还原能力以及清除·OH羟基自由基的能力。在体外实验中，PRPG能抑制小鼠肝线粒体膜的肿胀，抑制小鼠红细胞自氧化溶血，抑制小鼠红细胞、肝组织匀浆中MDA的生成。在体内实验中，灌胃PRPG组小鼠(150mg／kg·bw·d)与对照组相比，肝匀浆和红细胞中MDA的降低显着。以上实验表明，PRPG在体内外均具有明显的抗氧化作用，高的还原能力是PRPG抗氧化的机制。5油菜蜂花粉谷蛋白酶解肽的抗肿瘤活性研究通过体外抑瘤试验表明，不同浓度的油菜花粉蛋白的酶解产物对S180以及Hela肿瘤细胞都有一定的抑制作用。其中，终浓度为1mg／mL的抑瘤效果最明显，对S180以及Hela肿瘤细胞的抑瘤率分别为35.72％和31.70％。体内抑瘤实验中，PRPG对S_(180)肿瘤细胞有较强的抑制作用，当灌胃剂量为100mg／Kg·d时，抑瘤效果较好，抑瘤率达45.44％。PRPG对荷瘤小鼠有较好的免疫增强作用，它可以提高荷瘤小鼠免疫器官的重量，增强荷瘤鼠巨噬细胞吞噬能力、脾淋巴细胞转化能力、NK细胞杀伤力、DNFB诱导的迟发性超敏反应，还可显着增强荷瘤鼠脾细胞抗体生成能力，表明PRPG对荷瘤鼠的特异性和非特异性免疫功能均有明显增强作用。PRPG能显着提高荷瘤鼠体内抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性，降低荷瘤小鼠血清LDH活性，减少脂质过氧化产物MDA的含量，揭示PRPG可提高机体抗氧化能力而发挥抗肿瘤作用。小鼠接种S180细胞后对其外周血象有明显影响，白细胞明显增多，红细胞、血红蛋白数降低。经灌服PRPG后可使外周血象基本恢复至正常状况。PRPG与环磷酰胺合用有一定协同作用，PRPG(50mg／kg·d)可使环磷酰胺的抑瘤率提高至55.06％，且对环磷酰胺的毒副作用有一定的拮抗作用，可在一定程度上缓解环磷酰胺对荷瘤鼠机体免疫器官的伤害。采用动物抑制性肿瘤法，以环磷酰胺为对照，观察PRPG对荷瘤鼠肿瘤、肝、肾、脾组织形态的影响，结果表明PRPG有较好的抗肿瘤效果，对荷瘤鼠肝、肾等组织无明显毒副作用，且能缓解环磷酰胺对机体组织器官的伤害。6 PRPG对荷瘤鼠脾细胞因子分泌及其mRNA表达的影响采用双抗夹心ELISA法检测结果表明PRPG可明显促进荷瘤鼠脾细胞TNF-a、IL-2和IL-6的分泌，逆转录-聚合酶链反应检测结果表明PRPG可显着提高TNF-a和IL-6 mRNA的表达，且在一定浓度范围内存在较好的浓度依赖关系，说明PRPG可通过提高荷瘤鼠细胞因子mRMA表达来达到抗肿瘤的目的。
张奕敏[4]2007年在《油菜蜂花粉多肽分离纯化及免疫活性研究》文中研究指明蜂花粉含有特殊的多肽和蛋白质，其中有许多是功能性蛋白。这些蛋白和多肽具有重要的营养和保健作用，能起到保护肝细胞，使损伤的肝细胞再生，提高机体免疫功能，抗肿瘤等作用。因此，蜂花粉中的多肽所具有的生物活性有很高的研究价值。本文采用硫酸铵盐析法(60-80％浓度)对油菜蜂花粉中的蛋白进行提取，再通过Superose 12凝胶层析、DEAE Sepharose F．F．离子交换层析、Q Sepharose F．F．离子交换层析以及Sephacryl S-100凝胶层析等进行分离，从油菜蜂花粉中纯化得到一种具有高免疫活性的多肽，命名为BPP，并对其部分理化性质、免疫活性进行研究。将多肽BPP进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和HPLC分析，发现分离得到的多肽为单一条带和单一峰，确定这种活性多肽为单一组分。通过SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为36.3kDa。用聚丙烯酰胺等电聚焦法测定组分等电点，得到BPP多肽pI=6.0。将BPP组分进行220-400nm波长扫描，发现在278nm处有最大吸收峰。苯酚硫酸法对其糖含量测定，确定其为非糖蛋白。采用MTT比色法测定该多肽对小鼠脾脏淋巴细胞的增殖作用，结果发现浓度范围在0.0625—2mg／mL内均可促进小鼠脾淋巴细胞增殖。在浓度为0.25mg／mL时即终浓度为51.25μg／mL时效果最佳。与空白对照组相比较达到极显着性差异，可见所分离得到的BPP多肽可显着促进小鼠脾淋巴细胞的增殖，有较高的免疫活性。
黄兰[5]2012年在《蜂花粉核苷类成分研究》文中研究表明本文旨以蜂花粉为原材料，探索蜂花粉核苷类成分的种类及含量。通过薄层色谱法(thin-layer chromatography，TLC)对油菜蜂花粉核苷类成分进行初步分析，并探讨了TLC展开条件；以提取时间、提取温度及料液比作为蜂花粉核苷类成分提取的影响因素，探讨了其对蜂花粉核苷类成分提取总量的影响，并优化提取条件；建立了一种能同时分离检测多种核苷类成分的有效高效液相色谱法(highliquid chromatography，HPLC)，并对9不同蜂花粉核苷类成分的种类及含量进行分析(high liquid chromatography，HPLC)；通过大孔树脂柱层析、有机萃取、LH-20凝胶树脂柱层析、TLC、HPLC等手段分离纯化样品得单体化合物，经液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(liquid chromatography-quadrupole-time of flightmass spectrometer，LC-Q-TOF)及HPLC法测定。研究得出以下结果：1. TLC法初步分析油菜蜂花粉核苷类成分此处采用15%乙醇提取样品，经TLC法对油菜蜂花粉核苷类成分进行初步定性分析，其薄层条件为：展开剂为氯仿-甲醇-氨水(6.5：8.0：1.5)，展距8cm，点样间隔1cm，饱和30min，254nm下检视。经与标准品对照，得油菜蜂花粉可能含尿苷及鸟苷成分。2.蜂花粉核苷类成分提取工艺的优化采用纯水超声波提取样品，以胞苷、尿苷、鸟苷及腺嘌呤四种核苷类成分为指标测定油菜蜂花粉中核苷类成分总量。经单因素试验得影响因子提取时间、提取温度及液料比范围分别为40~50min、45~65℃及1:60~1:80g/mL时对提取最有利。最终优化条件为提取时间53min、提取温度60℃、提取料液比1:70g/mL，蜂花粉四种核苷类总提取量为705.2±0.006mg/100g花粉。3.蜂花粉核苷类成分含量HPLC检测本研究最佳的HPLC检测条件：Agilent1200HPLC色谱仪，UltimateAQ-C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相：水(A)-甲醇(B)；梯度洗脱：0~3min，8%B；3~15min，8~15%B；15~20min，15~20%B；20~30min，20~40%B；30~35min，40~8%B；35~50min，8%B；检测波长：254nm；柱温：30℃；流速：1mL/min；进样量：5μL。通过HPLC检测，9种蜂花粉均未检出肌苷、胸苷，但该9种蜂花粉均含胞苷、尿苷、鸟苷及腺嘌呤4种核苷类成分，且含量随蜂花粉种类的不同而异；总含量大小为油菜>虞美人>荷花>茶花>菊花>玉米>荞麦>益母草>玫瑰，其中油菜蜂花粉含量明显高于其它蜂花粉。4.分离纯化条件D101大孔树脂柱层析：3BV(柱体积)超纯水平衡层析柱材，1.0BV/h的流速上样，吸附完毕后用0%及5%乙醇以3BV/h流速洗脱。Sephadex LH-20凝胶树脂柱层析：上样量1mL，洗脱流速0.6mL/min，接样1份/1min，检测波长254nm。5.单体化合物检测条件HPLC条件：岛津LC-20HPLC色谱仪，AQ-C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相：甲醇(A)-水(B)，梯度洗脱：0~5min，5%~9%A；5~24min，9%A；24~25min，9%~10%A；25~27min，10%~40%A；27~37min，40%A；37~40min，40%~5%A；40~50min，5%A；流速1.0mL/min；柱温30℃；检测波长：254nm；进样体积：5μL。LC-Q-TOF分析条件：LC条件：Agilent6510Q-TOF，SB C18(2.1mm×150mm，3.5μm)色谱柱；流动相：0.1%的甲酸水溶液-乙腈(70:30)；流速：0.2mL/min；柱温：30℃；检测波长：254nm；进样体积：5μL。质谱条件：电离方式：ESI+；雾化气压力：30psi；干燥气流速：9L/min；干燥气温度：350℃；毛细管电压：4000V；碎裂电压：135V；扫描方式：全扫描；扫描质量范围：60~1000；采集速率：1spectra/s。6.单体化合物检测经D101大孔树脂柱层析、有机萃取、LH-20凝胶树脂柱层析、HPLC及TLC等方法，从油菜蜂花粉提取物中分离得到3种化合物H、I、J。化合物H在213nm及259nm处有最大吸收，经HPLC-Q-TOF检测为腺嘌呤。化合物I、J的最大吸收分别为264nm和257nm，有可能为核苷类化合物，但因信息不完整，未能得出具体结果，有待再次检测。
刘伟[6]2008年在《山茶蜂花粉多糖的提取及生物活性的研究》文中研究表明蜂花粉是纯天然的保健品之一,被誉为全能营养库。随着植物多糖研究的不断深入,蜂花粉多糖也逐渐引起研究人员的关注。多糖是蜂花粉重要的有效成分之一,具有较好的潜在开发价值。本文对山茶蜂花粉多糖的提取、分离、初步纯化及生物活性进行了研究,结果如下:1.采用超声波辅助提取花粉多糖,通过正交实验设计优化提取工艺条件,考察超声预处理时间、提取温度、提取时间、料液比对山茶蜂花粉多糖提取得率的影响。实验结果表明,提取温度、超声预处理时间和提取时间对多糖提取得率影响最大,均达极显着差异。确定山茶蜂花粉多糖的最佳提取条件是:超声预处理30 min,提取温度100℃,提取时间2 h,料液比为1:8。2.不同体积乙醇沉淀山茶蜂花粉多糖试样效果的研究表明,乙醇体积为多糖液体积的3.5倍时,沉淀效果最好。不同体积叁氯乙酸沉淀上清液蛋白质效果的研究表明,多糖液中加入等倍体积的10%叁氯乙酸时,脱蛋白效果最佳。多糖经Sephadex G-75的洗脱,出现两个洗脱峰,其中分子量较大的含量少于分子量较小的。3.山茶蜂花粉多糖抗凝血功能的研究表明,多糖能延长家兔体外凝血时间。同时,腹腔注射300 mg/kg·d山茶蜂花粉多糖14 d,能有效延长小鼠体外凝血时间和小鼠出血时间。说明山茶蜂花粉多糖具有较好的体外抗凝血作用。4.山茶蜂花粉多糖对小鼠免疫功能影响的研究表明,腹腔注射300 mg/kg·d山茶蜂花粉多糖14 d,能显着提高正常小鼠的脾脏指数、肝指数和胸腺指数。腹腔注射低(75 mg/kg·d)、中(150 mg/kg·d)、高(300 mg/kg·d)叁个剂量的山茶蜂花粉多糖,均能有效提高实验性糖尿病小鼠的体重、脾脏指数和胸腺指数。表明山茶蜂花粉多糖具有提高小鼠免疫功能的作用。5.山茶蜂花粉多糖降血糖作用的研究表明,腹腔注射低(75 mg/kg·d)、中(150 mg/kg·d)、高(300 mg/kg·d)叁个剂量的山茶蜂花粉多糖,均能有效降低实验性糖尿病小鼠的血糖值。表明山茶蜂花粉多糖具有一定的降血糖功效。
朱晓丽[7]2007年在《油菜蜂花粉中活性肽的制备及其抗氧化性的研究》文中研究表明油菜蜂花粉是自然界中存在的营养丰富的一种纯天然食品，营养成分搭配合理，并且富含蛋白质和功能因子，能够加强人体的免疫系统和生理功能，已经日益受到人们的青睐。但是由于油菜蜂花粉本身带有青涩味，口感较差，使得蜂花粉的利用率较低。油菜蜂花粉中蛋白约占干重的30％，成分较为复杂，难以提取和分离。本文利用叁种不同蛋白酶将油菜蜂花粉水解，以水解度为标准，选择对油菜蜂花粉水解效果较好的蛋白酶，其中碱性蛋白酶在适宜的条件下水解效果最佳。故用碱性蛋白酶水解油菜蜂花粉，并通过不同的渗透滤膜对酶解物进行分离纯化，按照相对分子质量分成4种样品：200Da～1000Da、1000Da～5000Da、5000Da～10000Da和10000Da以上不同分子量段的样品，应用清除超氧阴离子自由基、清除羟自由基和脂质过氧化叁种抗氧化模型对油菜蜂花粉水提物、酶解物及酶解物分段后样品进行抗氧化能力评估。试验结果表明：油菜蜂花粉酶解物清除超氧阴离子和羟自由基的能力得到显着的提高，在50mg／mL的浓度下抑制能力分别提高20％和30％左右，而且酶解物经渗透膜过滤后能进一步提高样品的抗氧化能力。
李云捷[8]2005年在《玉米花粉多糖的分离、纯化、结构鉴定及抗氧化活性的研究》文中进行了进一步梳理近年来,花粉作为优良的全营养食物被全世界广泛关注,掀起一股“花粉研究热”。多年来我国花粉的基础研究和应用研究已全面深入地开展,并取得多方面的可喜成果,有些方面已进入国际研究的前沿。我国的花粉研究是从不同角度、多学科、多领域的参与、综合开展研究的,从花粉资源、花粉有效成分和物质组成,花粉的保健、药理、药效、花粉的扩大应用,花粉的生产技术,加工工艺,新产品开发利用等都展开了广泛而深入的研究,获得了大量的研究成果。 玉米花粉是中国产量最大的花粉之一,受到很大的重视。从八十年代开始,玉米花粉从采收到营养成分的分析到功能因子的研究诸见报端。对玉米花粉多糖的报道主要集中于免疫活性、抗肿瘤等,而关于玉米花粉多糖分离提取及纯化技术,对其各个组分的组成和结构特点的研究未见报道。故,本文侧重于优化玉米花粉多糖提取的技术条件,对玉米花粉多糖的结构进行解析,并在此基础上,用玉米花粉多糖进行体外试验,对其抗氧化的活性功能进行了评价。为今后玉米花粉多糖的更深入的研究与开发奠定了基础。 1、通过对玉米花粉多糖分离纯化的系统研究发现,玉米花粉经水提醇沉,脱脂,Sevage法除蛋白,冷冻干燥后,玉米花粉粗多糖的得率高达8%。玉米花粉粗多糖经乙醇分级,得到叁个级分,分别为PPMA、PPMB、PPMC,冻干后样品呈淡黄色絮状固体,得率依次为18.83%、15.36%、60.28%,取PPMC经DEAE-Sephadex A-25柱层析得到级分PPMC-1,其中多糖含量达77%;经Sephadex G-200等方法鉴定和理化分析表明PPMC-1为均一多糖。 2、经氨基酸组成分析,多糖PPMC-1中蛋白质由天门冬氨酸、谷氨酸等16种氨基酸组成,其氨基酸总含量为22.17%,其中赖氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸的相对含量较高,而蛋氨酸和半胱氨酸的相对含量较低。 通过薄层及气相色谱法测定玉米花粉多糖PPMC-1的单糖组成,研究表明玉米花粉多糖PPMC-1由葡萄糖、木糖、鼠李糖组成,其摩尔比为:7.08∶5.53∶1。 采用高效液相色谱法测定玉米花粉多糖的摩尔质量,得到PPMC-1的数均分子量和重均分子量分别为2.1317×10~5和2.2008×10~5。 经红外光谱分析,可以确定多糖中存在的特征官能团,且本研究表明PPMC-1中存在呋喃和吡喃两种糖环,且紫外和红外图谱表明玉米花粉多糖PPMC-1中含有蛋白质。 3、通过对小鼠组织及体液的体外试验,研究了不同体系中玉米花粉粗多糖及级分的体外抗氧化活性。对羟基自由基的清除试验表明,不同玉米花粉多糖级分对羟基自由基的清除作用均具有较好的量效关系,复合一元二次方程模型;其半数浓度分别为146.98、172.56、149.98和104.99μg/ml;对超氧阴离子自由基的清除试验表
李飞[9]2009年在《山楂蜂花粉多糖提取、分离纯化、结构鉴定和生物活性的研究》文中研究表明近年来,花粉作为优良的全营养食物被全世界广泛关注,掀起一股“花粉研究热”,而且国内对花粉的基础研究和应用研究也已经全面开展,并取得可喜成果,有些方面已进入国际研究的前沿。山楂蜂花粉在中国北方产量巨大,充分利用我国山楂蜂花粉资源,对山楂蜂花粉进行深入系统研究,使这一丰富资源的开发和利用提高到一个新的水平,将会产生极大的经济效益和社会效益。本论文以山楂蜂花粉(bee pollen of Crataegus pinnatifida Bge.)为原料,采用复合破壁法即采用机械破壁、冷冻破壁和酶法破壁叁种方法进行分花粉破壁,以此达到较为理想的破壁效果。同时通过(Box-Benhnken)试验设计对热水浸提、乙醇沉淀的工艺进行了优化,最后经过脱蛋白、透析得到多糖粗品(CPP)。CPP通过DEAE Sepharose CL-6B凝胶柱层析进一步纯化得到CPP-1和CPP-2两种组分。经红外光谱检测证实具有多糖类物质的特征吸收峰。然后通过Sephadex G-100凝胶柱层析检测为单一对称峰,并通过高效凝胶色谱测得两者分子量分别为3.7×10~5Da和7.8×10~4Da。通过气相色谱测得CPP-1由L-鼠李糖、L-果糖、D-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖七种单糖组成,其摩尔比为0.67:0.44:10.16:0.66:1.03:5.51:9.94;CPP-2由L-鼠李糖、D-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖五种单糖组成,摩尔比为2.12:9.82:3.60:0.89:5.56。经部分酸水解甲基化分析,结合气质联用仪,推断出CPP-1和CPP-2是由1,5-L-Araf残基组成的还原性多糖。最后,本论文从清除DPPH自由基、抑制羟基自由基的产生和还原力、清除超氧阴离子自由基4个方面研究了CPP、CPP-1和CPP-2的体外抗氧化效果,结果表明粗多糖CPP和纯化组分CPP-1、CPP-2对DPPH自由基的清除作用和羟基自由基的抑制作用明显,与Vc接近,而还原力和清除超氧阴离子自由基的能力低于Vc。免疫活性研究主要通过对巨噬细胞吞噬功能的影响、T淋巴细胞增殖功能的影响和NK细胞毒活性的影响来测定,相对CPP-1而言,CPP-2能显着提高小鼠的非特异性免疫和细胞免疫功能。
参考文献：
[1]. 蜂花粉中功能因子的提取、纯化及应用研究[D]. 周键. 浙江工业大学. 2004
[2]. 蜂花粉中有效成分的提取及功能性研究[D]. 王艳敏. 南昌大学. 2010
[3]. 油菜花粉谷蛋白酶解肽的制备及其抗肿瘤活性研究[D]. 胡筱波. 华中农业大学. 2007
[4]. 油菜蜂花粉多肽分离纯化及免疫活性研究[D]. 张奕敏. 浙江工业大学. 2007
[5]. 蜂花粉核苷类成分研究[D]. 黄兰. 福建农林大学. 2012
[6]. 山茶蜂花粉多糖的提取及生物活性的研究[D]. 刘伟. 福建农林大学. 2008
[7]. 油菜蜂花粉中活性肽的制备及其抗氧化性的研究[D]. 朱晓丽. 中国农业科学院. 2007
[8]. 玉米花粉多糖的分离、纯化、结构鉴定及抗氧化活性的研究[D]. 李云捷. 华中农业大学. 2005
[9]. 山楂蜂花粉多糖提取、分离纯化、结构鉴定和生物活性的研究[D]. 李飞. 北京化工大学. 2009
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