【摘 要】目的：本研究采用小型猪皮作为透皮试验模型，比较利多卡因巴布剂自制品和市售参比制剂的体外透皮吸收效果。方法：建立高效液相色谱法测定利多卡因巴布剂中药物的体外透皮吸收量。色谱条件为：色谱柱为Elite Hypersil ODS2（5μm，4.6mm×150mm）；流动相为醋酸盐缓冲液（930ml水中加入冰醋酸10ml，以1mol/L的NaOH溶液调pH至6.0）-甲醇（50：50）；流速：1.0mL/min；检测波长为254nm；进样量为20μL。体外透皮实验采用改良的Franz扩散池，以小型猪皮作为透皮试验模型，分别在2h、4h、6h、8h、10h和12h取样测定透皮接收液中利多卡因的浓度，计算累积透过率。结果：自制品和市售参比制剂12h平均累积透过率分别为195.61μg/cm2和197.90μg/cm2，不同时段透皮吸收累积量差异无统计学意义。结论：利多卡因巴布剂自制品和市售参比制剂的体外透皮吸收效果基本一致。
【关键词】利多卡因；巴布剂；色谱法；高效液相；透皮吸收
Study on Percutaneous Permeability of Lidocaine Cataplasms in vitro
SHEN Chen1，2，WANG Qiang2，WANG Dong-kai1
（1 Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China；2 Hainan Bikai Pharmaceutical Co.，Ltd，Haikou 570311，China）
[Abstract] Objective：In this study，small pigskin was used as a transdermal test model to compare the transdermal absorption of lidocaine gel self-made products and commercial reference preparations in vitro. Methods：To establish a HPLC method for determination of transdermal absorption of lidocaine gel in vitro. The chromatographic conditions were as follows：the column was Elite Hypersil ODS2（5μm，4.6mm×150mm）；the mobile phase was acetate buffer（10ml glacial acetic acid was added to 930ml water and adjusted to 6.0 with 1mol/L NaOH solution）50：50）；flow rate：1.0 mL/min；detection wavelength was 254 nm；injection volume was 20μL. In vitro transdermal experiment using modified Franz diffusion cell，small pigskin as a transdermal test model，respectively，at 2h，4h，6h，8h，10h and 12h sample was measured transdermally received lidocaine concentration，calculated cumulative Through rate. Results：The average cumulative transmittivities of self-made and commercially available reference preparations at 12h were 195.61μg/cm2 and 197.90μg/cm2，respectively. There was no significant difference in transdermal absorption accumulation at different time points. Conclusion：The effects of transdermal absorption of lidocaine gel self-made products and reference formulations in vitro are basically the same.
[Key words] lidocaine；cataplasm；chromatography；high performance liquid；percutaneous permeability
疱疹后遗神经痛（Post-Herpetic Neuralgia，PHN）是带状疱疹最常见的并发症，目前局部用药包括5%利多卡因巴布剂和辣椒素等[1]。利多卡因是一种酰胺类局部麻醉剂，其通过抑制冲动引发和传导所产生的离子通量，从而稳定神经元膜[2]。将利多卡因制成巴布剂用于局部给药治疗带状疱疹后遗神经痛时，利多卡因穿透进入完整皮肤，穿透量足以产生镇痛作用但不足以产生完整的神经阻滞[3]。1999年，美国FDA批准了5%利多卡因巴布剂用于治疗PHN[4]。本实验中，我们建立了高效液相色谱法测定利多卡因巴布剂中药物的体外透皮吸收量，进行了方法学研究，并采用小型猪皮作为透皮试验模型，采取市售制剂对照的方法进行了利多卡因巴布剂体外透皮吸收研究。
材料
LC-2010AHT型高效液相色谱仪（SPD-20A紫外吸收检测器，日本岛津公司）；TK-20K透皮扩散实验仪（上海偕凯科技贸易有限公司）；AUW22OD电子分析天平（日本岛津公司）；S220型酸度计（瑞士METTLER TOLEDO公司）。
小型猪皮（第三军医大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK（渝）2012-0003）；利多卡因对照品（购自中国食品药品检定研究院，批号：100342-201003，纯度：99.9%）实验药：利多卡因巴布剂（自制品，批号：20121205），对照药：市售利多卡因巴布剂（Lidoderm，美国Endo公司，批号：Y1098）；甲醇（色谱纯，美国Tedia），冰醋酸（分析纯，广州化学试剂厂），氢氧化钠（分析纯，广州化学试剂厂）；其它试剂均为分析纯。
方法
1 分析方法的建立
1.1 色谱条件
色谱柱：Elite Hypersil ODS2（5μm，4.6mm×150mm）；流动相：醋酸盐缓冲液（930ml水中加入冰醋酸10ml，以1mol/L的NaOH溶液调pH至6.0）-甲醇（50：50）；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；检测波长：254nm；柱温为室温。
1.2 专属性实验
对照品溶液的制备：精密称取利多卡因适量，用pH7.4磷酸盐缓冲液稀释成每毫升含利多卡因约10μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：取凝胶膏1贴，裁剪成2.5cm×2.5cm大小，贴于裁剪成相同大小的小型猪皮角质层侧，固定在装有磁力搅拌子的立式Franz扩散池上，猪皮的真皮侧朝向接收池，12h取接收液适量，经0.45μm孔径滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
空白基质液的制备：取空白基质膏1贴，同供试品溶液制备方法，12h取接收液适量，经0.45μm孔径滤膜滤过，取续滤液作为空白基质液。
分别取上述对照品溶液、供试品溶液、空白基质液20μL进样，记录色谱图。结果表明空白基质及小型猪皮不干扰测定。
1.对照品溶液；2.供试品溶液；3.空白基质液
图2 专属性色谱图
1.3 线性与范围
精密称取利多卡因对照品约200mg，至20ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度；精密量取1ml至100ml量瓶，加入pH7.4磷酸盐缓冲液稀释至刻度，制成每1ml中约含利多卡因100μg的溶液，摇匀，作为对照品储备液；分别精密量取上述储备液0.8ml、1ml至100ml容量瓶，0.5 ml、1ml、5ml、10ml、20ml至25ml 容量瓶中，加pH7.4磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为0.8、1、2、4、20、40、80μg/ml的系列溶液。精密量取各溶液20μl，进样测试。按峰面积（A）对浓度（C）进行回归。线性范围为0.83～83.07μg/ml。标准曲线方程为A=2146C-849.1，相关系数r=1.000。
表1 线性关系结果
图2 线性关系曲线
1.4 精密度试验
取线性与范围项下浓度为2.08、20.77、83.07μg/ml的低、中、高浓度溶液，精密量取20μl，分别连续测定6次，计算主峰面积的RSD值。结果显示，低、中、高浓度主峰面积的RSD值分别为1.42%、0.54%和0.20%，该检测方法精密度良好。
1.5 待测溶液稳定性试验
取小型猪皮透皮试验12h溶出液作为供试品溶液，于室温放置0h、4h、8h、12h、16h、24h后分别精密量取20μl注入液相色谱仪，考察主峰峰面积变化。结果显示，待测溶液在室温下放置24小时所含的药物浓度基本不变（RSD为0.32%）。
1.6 回收率
对照品溶液配制：同线性与范围项下对照品溶液。
供试品溶液配制：取利多卡因对照品约160mg三份，精密称定，分别至20ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度；精密量取1ml至50ml量瓶中，加入含小型猪皮溶出物的pH7.4磷酸盐缓冲液稀释制成每1ml中含利多卡因约160μg的溶液，摇匀，作为对照品储备液；分别精密移取对照品储备液0.5ml至50ml量瓶，2.5ml、10ml至25ml量瓶中，分别加入含小型猪皮溶出物的pH7.4磷酸盐缓冲液稀释并定容至刻度，即得含利多卡因约1.6、20、80μg/ml的低、中、高浓度的供试品溶液共9份。按标准曲线法以峰面积计算上述样品浓度。结果显示，其中所含利多卡因的平均回收率为99.9%（RSD为1.10%）。
2 体外透皮吸收实验
采用立式改良Franz扩散池，容积18mL，扩散面积1cm2，将小型猪皮固定在装有磁力搅拌子的Franz扩散池上，角质层侧朝向供给池，真皮侧朝向接收池，再将剪裁好的凝胶膏剂贴于角质层侧上，将供给池与接收池连接并固定好。在接收池内加入预热至37℃的pH7.4磷酸盐缓冲液，开动恒温37℃水浴和磁力搅拌，开始计时。分别于2h、4h、6h、8h、10h和12h从接收池中取样2mL，同时及时补充等量37℃的pH7.4磷酸盐缓冲液。接收液经0.45μm微孔滤膜过滤，以HPLC法测定，通过标准曲线法计算各样品溶液中利多卡因的含量，再计算各时间点（t）的单位面积累积释放量（Q，μg/cm2）。根据下列公式计算药物的累积释放量。
Qn=
式中Cn为第n个取样点测得的药物浓度（μg/mL），V为接收液体积（18mL），Ci为第i（i≤n-1）个取样点测得的药物浓度（μg/ml），Vi为取样体积（2mL），A为扩散面积（3.14cm2）。
3 统计学方法
采用软件SPSS19.0，对利多卡因巴布剂实验药和对照药各时间点的药物单位面积累计释放量进行方差分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。
结果
实验药物与对照药各时间点及单位面积平均累计释放量对比结果，以制剂中利多卡因单位面积平均累积释放量-时间曲线图表示（见图3）。方差分析各时间点利多卡因单位面积累积释放量差异均无统计学意义（P＞0.05）（见表2）。
讨论
文献报道，5% 利多卡因巴布剂仅有3%±2% 会被系统吸收，降低了系统毒性风险，减低了潜在的药物相互作用[4]。本实验中，采用小型猪皮作为透皮试验模型，自制品和市售参比制剂12h平均累积透过率分别为195.61μg/cm2和197.90μg/cm2，按药物700mg/140cm2的总含药量计算，上述自制品和市售参比制剂12h平均累积透过百分比为3.91%和3.96%，与文献报道数据相符。
在本实验中所用小型猪皮由专人制备，虽然材料的来源稳定，但手工备皮的过程亦会存在差异，而且制备的时间季节不同，透皮试验模型的均匀性有差异，可能会对单次实验结果产生影响[5]。通过多次平行实验，基本可以剔除系统误差。实验中，虽然不同时间点的实验药和对照药的释药曲线有所差异，但是释药累积量经方差分析，均差异无统计学意义，表明利多卡因巴布剂自制品和市售参比制剂的体外透皮吸收效果基本一致，对今后本品开展临床试验提供数据支持。
参考文献：
[1]林志淼，杨勇，李若瑜．带状疱疹及后遗神经痛[J]．临床皮肤科杂志，2010，（06）：393-395
[2]郑连文．利多卡因的临床应用 [J]．中国现代药物应用，2010，4（17）：105-106
[3]Galer Bradley S，Jensen Mark P，Ma Tina，et al. The lidocaine patch 5% effectively treats all neuropathic pain qualities：results of a randomized，double-blind，vehicle-controlled，3-week efficacy study with use of the neuropathic pain scale [J]. The Clinical Journal of Pain，2002，18（5）：297-301
[4]Baron R，Mayoral V，Leijon G，et al. 5% lidocaine medicated plaster versus pregabalin in post-herpetic neuralgia and diabetic polyneuropathy：an open-label，non-inferiority two-stage RCT study [J]. Current Medical Research & Opinion，2009，25（7）：1663-1676
[5]张峰，杨媚，毛德香．月桂氮酮对利多卡因喷雾剂中利多卡因透皮吸收的影响[J]．医药导报，2010，29（1）：31-33
论文作者:沈晨1，2,王强2,王东凯1※
论文发表刊物:《中国蒙医药》2017年第15期
论文发表时间:2017/12/28
标签：利多论文; 溶液论文; 卡因论文; 猪皮论文; 缓冲液论文; 精密论文; 巴布论文; 《中国蒙医药》2017年第15期论文;