（原阳县疾病预防控制中心；河南 原阳县 453500）
【摘要】目的 建立一种快速测定乳与乳制品中蛋白质含量的办法。方法 用双缩脲反应测定蛋白质含量。结果 工作曲线在（０—0.20）g/100ml蛋白质浓度范围内遵守朗伯比尔定律，线性关系良好。曲线的回归方程为：Y＝0.004868+3.018Ｘ，相关系数r=0.9993，加标回收率（95.00－104.00）%。方法的检出限0.02g/100ml。结论 该方法操作简便、快捷、准确，灵敏度和精密度高，适用于乳与乳制品中蛋白质含量的快速测定。
【关键词】乳与乳制品；双缩脲－分光光度法；蛋白质测定。
【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】2095-9753（2018）09-0283-01
乳与乳制品是人体所需蛋白质的重要来源，近年来因乳与乳制品频频出现问题，蛋白质含量测定的国标方法是将样品消化后测定总氮量，再由总氮量计算蛋白质的含量，测定的结果不完全是蛋白质，还包括一些非蛋白质类的含氮物质；并且这些检测方法检测时间长，用酸量大，能源消耗大，不适合批量样品测定。本文基于蛋白质的分子结构，拟定出双缩脲分光光度法快速测定乳与乳制品中蛋白质含量的新方法，并探讨了样品的预处理方法。
１、材料与方法
１.１ 原理 双缩脲在碱性条件下，能与硫酸铜结合生成红紫色的络合物。具有两个以上肽链的化合物与双缩脲结构相似，也有此反应。其色泽深度与蛋白质含量成正比，可以比色定量[1]。
１.2 试剂与仪器
１.2.1 仪器 ７２２分光光度计，ＦＡ2104型1/万电子天平。
1.2.2试剂[2](１）双缩脲试剂 称取①硫酸铜（CuSO4H2O）3.0g；②酒石酸钾钠（NaKCH4O 64H2O）9.0g;③碘化钾（KI）5.0g，各溶于25ml水中,将②③倾入1000ml容量瓶中，加入100ml240g/L的NaOH溶液，混匀。加①液最后加水至1000ml。(2)氨水、乙醇、乙醚、石油醚（沸程300C－600C）。
1.2.3 标准品制备[3] 取纯正乳粉（未添加非蛋白质类的含氮物质）适量于1000C±50C干燥2 h，至前后两次相差不超过2mg。按GB/T5009.46-2003中凯氏定氮法测定8次，求得标准值和不确定度。
1.2.4 标准溶液制备 称取适量乳粉标准品配制成浓度为1.0g/100ml的蛋白质标准溶液（临用前配制）。
1.3测定方法
1.3.1标准曲线的绘制 分别吸取标准溶液（0，0.50，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0）ml于10ml具塞的比色管中，各取双缩脲试剂5.0ml,摇匀，加蒸馏水至刻度[相当于（0，0.020，0.040，0.080，0.120，0.160，0.200）g/ml]，混匀后放置10min，用定量滤纸过滤，取透明液比色测定。以试剂空白管（0管）作为参比，在波长540nm下，用1ml比色杯测定吸光度。
1.3.2 样品测定 称取1.00g固体样品，液体样品取10.0ml。按照GB/T5009.46中测定脂肪的方法提取脂肪，弃去醚层。将蛋白质残液于400C－500C水溶中挥发干残余醚层。用蒸馏水定容至25ml.取1.0ml按1.3.1操作。
1.3.3 结果计算 X（g/ml）＝A×10×25/V。A为标准曲线上查得的含量。V为取样量（ml）。
1.3.4 允许差 同一样品的两次测定结果之差不得超过平均值的5.0%。
2、结果与分析
2.1 吸收波长的选择 在（350－800）nm波段进行扫描，在540nm处有最大吸收峰。本文选择540nm为测定波长。
2.2 双缩脲试剂用量的选择 双缩脲试剂用量在（3.0－10.0）ml时，吸光度稳定，本文选择5.0ml.
2.3 反应条件的选择 当反应温度较高时溶液会形成氧化铜，使颜色加深而干扰测定。经实验，该反应在150C－300C时显色比较稳定。在反应5min-2Hm内稳定，本文选择在反应10min后比色测定。
2.4 工作曲线 按1.3.1配制标准溶液进行测定，结果见表1。
表1 蛋白质测定工作曲线
2.5 线性范围和检出限 工作曲线的蛋白质浓度在（0－0.20）g/ml范围内，符合朗伯比尔定律，线性关系良好。以试剂空白值的三倍标准偏差计算检出限，检出限为0.02g/100ml。
2.6 精密度试验 取1份含乳饮料、1份液态奶、1份乳粉三份样品测定7次进行精密度试验，结果见表2.
表2 精密度试验结果（n=7）
2.7 加标回收试验 取1份含乳饮料、1份液态奶、1份乳粉进行加标加标回收试验，每个样品做2个，结果见表3.
表3 样品加标回收试验结果
2.9 分析 该方法在测定方法和样品的前处理上进行了一些探讨，与国标法相比，节省了大量时间，简略了步骤，适合于批量样品的检验。取7份样品检测蛋白质，对本法检测结果与凯氏定氮法检测结果进行配对t检验，t=0.433，p>0.5，两种检测方法差异无统计学意义。
3 讨论
本文建立了用双缩脲比色法测定乳与乳制品中蛋白质含量的方法。该方法操作简便，灵敏度高，精确度好，对仪器要求不高，省去了样品消化的过程，减少了污染，检测结果准确可靠。适用于乳与乳制品中蛋白质的快速测定。
参考文献：
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[4]方积乾，孙振球，卫生统计学[M]。北京：人民卫生出版社，2004.86－89
[5]段光顺，王浩，曹惠婕，纳氏试剂分光光度法测定乳与乳制品蛋白质[J]。中国卫生检验杂志，2006.16（2）：238.
作者简介：王书斌（1958－），男，主管医师。
张淑波（1970－），女，副主任医师。
作者单位；原阳县疾病预防控制中心，河南，原阳县 453500
论文作者:王书斌,张淑波
论文发表刊物:《中国医学人文》2018年第9期
论文发表时间:2018/11/13
标签：蛋白质论文; 样品论文; 乳制品论文; 原阳县论文; 比色论文; 试剂论文; 含量论文; 《中国医学人文》2018年第9期论文;