1.泸州医学院附属医院风湿免疫科 四川泸州 646000；2.四川大学华西医院风湿免疫科 四川成都 610041
摘要：目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）FcγRⅡa的表达与辅助T细胞亚型（Th1/Th2）漂移在SLE发病机制中的作用。方法 检测了129 例SLE患者和30名健康对照者PBMC FcγRⅡa、Th1、Th2细胞；FcγRⅡa的检测采用流式细胞术，Th1、Th2细胞的检测采用免疫组化染色方法。结果 SLE患者与健康对照者相比，PBMC FcγRⅡa的表达以及Th1细胞明显降低（P<0.01），Th2细胞显著升高（P<0.01）。结论 PAMC FcγRⅡa表达的变化以及Th1/Th2细胞漂移与SLE发病机制有关。
关键词：FcγRⅡa；Th1/Th2细胞；系统性红斑狼疮
Abstract：Objective To explore the contribution of the peripheral blood mononuclearcells（PBMC）expression of FcγRⅡa and T help cells（Th1/Th2）in the systemic lupus erythematosus（SLE）.Methods The PBMC expression of FcγRⅡa and Th1/Th2 cells were measured in 129 SLE patients and 30 healthy controls；FcγRⅡa was detected by flow cytometry，Th1/Th2 cells were detected by immune histochemical stainings.Results Comparing with healthy controlgroup，the expressions of FcγRⅡa and Th1 cells were significant lower in SLE patients（P<0.01）.However the level of Th2 cells were significantly higher in SLE patients than that of healthy controls（P<0.01）.Conclusions The variation of FcγRⅡa and Th1/Th2 cells drift of peripheral blood PBMC is related with SLE.
Keywords：FcγRⅡa；Th1/Th2 cell；Systemic lupus erythematosus
系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种累及多系统、临床表现复杂、病程迁延反复的自身免疫性疾病。SLE的发病机制尚不完全清楚但SLE患者存在着严重的免疫功能异常，表现在淋巴细胞减少、淋巴细胞亚群异常、B细胞异常活跃，使得患者体内产生多种自身抗体如抗核抗体、抗双链DNA抗体和抗盐水可提取性核抗原抗体（ENA）。自身抗体形成的免疫复合物（IC）沉积以IgG抗体为主，可引起器官损伤，而IgG的Fc受体（FcγR）在IC的形成、吞噬中起关键作用，FcγR属免疫球蛋白超家族成员，参与免疫功能的调节[1]，本研究探讨SLE患者FcγRⅡa、Th1/Th2细胞以及sCD30的变化及相互关系，从细胞免疫的角度探讨SLE的发病机制。
材料和方法
1.研究对象 我院2009年4月～2013年8月的住院SLE患者共129例，SLE的诊断均符合1997年美国风湿病学院（ACR）修订的SLE诊断标准。其中稳定期SLE78例，男9例，女69例，年龄21～48岁；活动期SLE患者51例，男5例女46例，年龄19～48岁；正常对照组为健康体检者30名，均为女性，年龄24～48岁。
2.标本的采集和保存 对照组和患者均空腹采血6ml，其中3ml以3000r/min离心10 min分离血清，于-70℃保存待测；另3ml乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝血用密度梯度离心分离PBMC，如不能及时分析，PBMC放入含20%小牛血清和10%二甲基亚砜的RPMI1640细胞保存液中液氮冻存，用于Th1/Th2细胞和FcγRⅡa的检测。
3.FcγRⅡa的检测 用流式细胞仪（德国PartecPAS）检测FcγRⅡa（羊抗人FcγRⅡa抗体购自Santcrue公司）。以相应兔抗羊荧光二抗为同型对照抗体。
4.Th1、Th2细胞的检测 Th1、Th2细胞分别以PBMC中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）阳性细胞所占百分比表示。
5.统计学方法 用SPSS10.0统计软件包对实验数据进行统计学处理，两标本均数之间的差异显著性用独立标本均值比较的t检验，应用相关分析对2个变量之间的相互关系进行检验。
结 果
1.活动期SLE患者PBMC FcγRⅡa的表达明显低于健康对照组（P<0.01）；活动期SLE患者与健康对照组相比，Th2细胞明显增加（P<0.01），而Th1细胞则显著降低（P<0.01），稳定期SLE患者与健康对照组比较，Th2细胞明显升高（P<0.05），Th1细胞明显减少（P<0.05），稳定期SLE与活动期相比，Th1细胞差异无显著性（P>0.05），Th2细胞减少（P<0.05），见表1。
注：与健康对照组比较，＊ P<0.05、＊＊ P<0.01；与SLE稳定期患者组比较，#P<0.05、##P<0.01
2.稳定期SLE患者FcγRⅡa、Th1及Th2与SLEDAI评分的相关系数：-0.62，-0.35，0.41；活动期SLE患者FcγRⅡa、Th1及Th2与SLEDAI评分的相关系数：-0.75，-0.38，0.47。PBMC FcγRⅡa与SLEDAI评分呈明显负相关；Th2细胞与SLEDAI评分呈明显正相关，提示PBMC FcγRⅡa表达的降低与SLE疾病活动程度密切相关。
3.稳定期SLE患者FcγRⅡa、Th1、Th2细胞的相关系数：0.54，-0.55，0.48；活动期SLE患者FcγRⅡa、Th1、Th2细胞的相关系数：0.52，-0.58，0.5。FcγRⅡa与Th1细胞呈明显正相关，与Th2细胞呈明显负相关。
讨 论
Th1/Th2细胞效应在生理情况下保持着相对的平衡，机体的细胞免疫和体液免疫也保持着正常的稳定关系[2]。但是，一旦Th1/Th2的平衡状态被打破，2类细胞因子相互失去控制，机体则处于Th1占优势或Th2占优势的Th1/Th2漂移状态，机体就会发病，如SLE、移植反应、风湿性关节炎等疾病[3]。我们的研究结果表明，SLE患者Th2细胞明显增多，Th1细胞明显减少，处于以Th2细胞为主的体液免疫占主导地位的漂移状态，导致机体产生自身免疫性抗体。现在认为，胞内细胞因子测定是区分Th1和Th2的最佳方法，已有的胞浆内细胞因子测定技术主要包括流式细胞术、酶联免疫斑点法和免疫组化法[4]。本实验所用的细胞是PBMC，其中不仅有Th细胞，也有抑制性T（Ts）细胞等细胞，由于细胞因子的产生是多源性的，Ts等细胞也能产生IFN-γ、IL-4等细胞因子，会对本试验结果有一定的影响。FcγR属免疫球蛋白超家族成员，根据其结构和分布分为FcγRI、FcγRⅡ、FcγRⅢ，其中FcγRⅡ又可进一步分为FcγRⅡa、FcγRⅡb和FcγRⅡc。FcγRⅡa的胞质区含有抑制小体免疫受体酪氨酸抑制性基序（ITIM），可抑制细胞活化，FcγRⅡa可表达于B淋巴细胞表面[5]，我们的结果表明，SLE患者PBMCFcγRⅡa表达下降与SLE疾病活动有关，我们推测可能是FcγRⅡa表达下降对B淋巴细胞的抑制作用减弱，进而促进B细胞抗原受体激活，上调B细胞的生发中心，使其产生的抗体明显增多，从而促进SLE发生。CD30是肿瘤坏死因子受体超家族中的一员，是相对分子质量为120000的跨膜糖蛋白，1982年在Hodgkin和ReedSternberg细胞表面被发现，现已知CD30因子在一些正常淋巴细胞、病毒感染的淋巴细胞、淋巴系统来源的肿瘤细胞表面表达，但主要表达在Th2型细胞上，Th1型细胞没有或仅呈低表达[5]。在CD30的T细胞激活的状态下，其胞外部分能被蛋白酶切断而形成并释放一个相对分子质量为88000的可溶性的sCD30，血清sCD30含量与细胞表面的CD30呈正相关。SLE患者血清sCD30的水平明显升高，且升高的程度与疾病的活动程度呈正相关。DC可以直接参与机体免疫反应和免疫耐受之间平衡的调节。SLE的特点就是机体对自身结构之免疫耐受性的丧失，从而导致针对某些特殊器官的破坏性的过程。由于DC具有介导免疫性和耐受性的双重功能，所以自身免疫性疾病治疗的进展目前集中于试图提升患者DC的致免疫耐受特性，改善过强的免疫激活状态，达到控制器官特异性免疫损伤的目的。所谓的“DC疫苗疗法”就是利用了DC的致免疫耐受性的特点，为这类疾病的治疗提供一个非常有吸引力的策略。
我们通过对SLE患者和健康对照组PBMC FcγRⅡa、Th1、Th2细胞以及血清sCD30的检测，发现SLE患者Th2细胞和sCD30的表达增多，而FcγRⅡa的表达减少，三者在SLE发病过程中都起着重要作用。其作用机制可能是，Th2细胞表面的CD30与B细胞表面的CD30配体结合，同时和CD3-TCR复合体发生交联，在IL-2存在的情况下激活Th2细胞，产生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等Th2类细胞因子，进而诱导B细胞分化和产生自身抗体，而B细胞表面的FcγRⅡa表达下降，使B细胞的抑制作用减弱，促进B细胞抗原受体激活，产生抗体的能力进一步增强。在SLE发生发展过程中激活型和抑制型FcγR s的平衡可能通过影响DC的致耐受活性进而干扰了机体免疫网络的平衡，导致多克隆B细胞的激活和自身免疫攻击的产生。如果通过人为重建激活型和抑制型FcγR s的平衡，有可能恢复DC的致免疫耐受性，达到改善免疫失控状态、免除自身免疫攻击和治疗SLE的目的。FcγRⅡa的表达与SLE的发病密切相关，可以作为SLE疾病活动的指标，用于SLE的诊断、疗效观察及预后判断。
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基金项目：泸州医学院附属医院科研课题（编号200723）
论文作者:陈洁,何成松, 刘毅
论文发表刊物:《健康世界》2015年29期供稿
论文发表时间:2016/4/8
标签：细胞论文; 免疫论文; 患者论文; 抗体论文; 细胞因子论文; 淋巴细胞论文; 机体论文; 《健康世界》2015年29期供稿论文;