湛江中心人民医院儿科 524037
【摘 要】目的：探讨在CTLA-4Ig 体外诱导作用下，毛细支气管炎（capillary bronchitis，以下简称毛支）患儿外周血中Th17/Treg 细胞的变化。方法：随机选取30例2 岁以下毛细支气管炎患儿作为毛细支气管炎观察组，同期住院的同年龄段毛细支气管炎患儿25 例作为对照组，采用流式细胞术检测2组患儿外周血中Th17/Treg 细胞变化。结果：CTLA-4Ig体外诱导下，毛细支气管炎患儿与无诱导的对照组患儿的外周血Treg/Th17细胞比例有统计学差异（P＜0.05）。毛细支气管炎患儿外周血加入CTLA-4Ig后致炎因子IL-17水平与对照组患儿有统计学意义（P＜0.05）。结论：CTLA-4Ig 应用于毛细支气管炎的临床治疗，会逆转毛细支气管患儿外周血Thl7/Treg 细胞间的失衡，使其向Treg 型细胞偏移，有助于下调炎症反应并防止气道重塑，从而减少毛细支气管炎的发病。
【关键词】CTLA-4Ig；毛细支气管炎；Th17；Treg
毛细支气管炎（Capillary bronchitis，以下简称毛支）是2岁以下婴幼儿特有的呼吸道感染性疾病，近年来发病日益增多。迄今毛细支气管炎的发病机制尚不清楚，但免疫学发病机制-毛细支气管炎患儿Th 细胞功能紊乱是导致患儿发生喘息的免疫学机制已经得到证实[1]。本研究通过对毛支炎患儿外周血Thl7/Treg细胞的变化，来探CTLA-4Ig 体外诱导的作用，为毛细支气管炎的临床诊治提供理论依据。
1.对象与方法
1.1研究对象 2014 年1—12 月我院儿科收治55例毛细支气管炎患儿，符合以下标准［2］：年龄＜ 2岁，以喘憋为主要临床表现，可有发热或无热，双肺可闻及较多喘鸣音，亦可有湿啰音，胸片显示两肺纹理增粗、斑点状或小片状模糊阴影或透亮度增高，均为首次发作感染性喘息。随机选取30例为观察组，其中男18 例，女12例；年龄6～18个月，平均7.2个月。毛细支气管炎对照组25例其中男14 例，女11例；年龄5～15个月，平均6.8个月。两组年龄、性别比较无显著性差异（P＞ 0.05，表1）。
1.2材料与方法
1.2.1标本采集 清晨6：00 空腹抽取入选对象外周静脉血4mL（肝素抗凝），离心后冷冻保存备用。用流式细胞仪检测外周血Treg细胞百分率。流式细胞仪为Beckman－Coulte ALTRA，所有试剂均由苏州生物基因有限公司提供。
1.2.2流式细胞仪检测外周血Treg、Th17 细胞百分率 室温下取2支流式管，分别标记观察管、对照管。观察管内加入CTLA-4Ig 10μL，然后加入抗凝血50μL混匀，室温避光孵育15min。对照管只加50μL抗凝血。孵育后在标本制备仪上溶血、固定上机，以CD4 + T细胞设门，然后调节电压使细胞位于阴性区。检测Treg 细胞占CD4 + T 细胞百分率。
取另外2 mL抗凝血，利用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC），将其细胞密度调整至2×106 /mL，悬浮于培养液中，置培养箱中培养4 h。同型对照管取1×106 PBMC悬液2mL，分别加入FITC-CD4 10μL，避光室温孵育40 min。洗涤去上清后加入破膜剂静止15 min，离心弃上清，重悬细胞。加CTLA-4Ig 20μL 于实验管，同型对照管不加入任何试剂，室温孵育1 h。洗涤后重悬，FCM 检测Th17 细胞占外周血单个核细胞百分率，方法同上。
1.3统计学方法
本研究使用SPSS16.0统计软件进行数据处理，计数资料以百分比表示，组间比较采用检验，正态分布计量资料用（）表示，组间比较采用t检验；以P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 外周血Treg、Th17 细胞百分率
经流式细胞仪对细胞表面标记分子的检测，CTLA-4Ig体外诱导下，毛细支气管炎患儿外周血Treg 细胞百分率显著高于同期对照组的百分率（P＜0.05）；而CTLA-4Ig体外诱导下的毛细支气管炎患儿外周血Th17细胞百分率则显著低于同期对照组的百分率（P＜0.05）；CTLA-4Ig体外诱导下的毛细支气管炎患儿与无诱导的对照组患儿的外周血Treg/Th17细胞比例有统计学差异（P＜0.05，表2）。
2.2血浆IL-17 水平 ELISA 法检测IL-17 水平见表2，统计学分析表明，毛细支气管炎患儿外周血加入CTLA-4Ig后，致炎因子IL-17水平与对照组患儿有统计学意义（P＜0.05）。
3.讨论
Th17细胞的标志性细胞因子IL-17，一直被认为是促炎因子，在各种自身免疫病中都检测到了IL-17的高表达。在毛细支气管炎症时，Th17细胞能够趋化中性粒细胞从而参与气道局部炎症。而Treg细胞是一类具有免疫抑制作用的T细胞亚群，通过抑制单核细胞和巨噬细胞产生细胞因子来减轻机体的炎症反应和组织损伤[3]。毛细支气管炎患儿外周血Treg水平提示Treg 细胞可能参与毛细支气管炎的发生发展[4]。促炎因子Th17 细胞与抑炎Treg 细胞之间平衡状态的打破，是很多炎症及自身免疫性疾病发病的是一个关键因素[5]。
通过观察组和对照组的试验数据的比较，我们可以看出：毛细支气管炎患儿Th17细胞的比例明显多于Treg细胞，Treg/Th17 细胞间的平衡明显向Th17细胞偏移，Treg与Th17 之间的平衡在毛细支气管炎的发病机制中可能起着重要作用[5]。在患儿外周血中加CTLA-4Ig 会降低Th17细胞的促炎因子IL-17的表达水平，从而改变Thl7/Treg 细胞的比例，使其向Treg型细胞偏移，具有统计学意义。
将CTLA-4Ig 应用于毛细支气管炎的临床治疗，可能逆转毛细支气管患儿的Thl7/Treg细胞间的失衡，使其向Treg型细胞偏移，有助于下调炎症反应并防止气道重塑，从而减少毛细支气管炎的发病。
参考文献：
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论文作者:陈冠华,吴爱文,关宇凤
论文发表刊物:《航空军医》2015年16期
论文发表时间:2016/3/15
标签：细胞论文; 支气管炎论文; 毛细论文; 患儿论文; 百分率论文; 外周血论文; 统计学论文; 《航空军医》2015年16期论文;