解放军第251医院 河北张家口 075000
【摘 要】对肿瘤病人进行CIK细胞回输,结果病人接受CIK细胞回输,有部分病人出现发热,部分病人出现寒战后发热,部分病人有皮肤红疹,部分病人有过敏性休克前期反应,经过对症处理后症状好转。
【关键词】肿瘤病人；CIK；回输
【中图分类号】R47 【文献标识码】B 【文章编号】1764-8999（2015）7-0659-02
随着现代分子生物学技术和肿瘤免疫学的飞速发展,肿瘤生物治疗不断充实和更新,肿瘤生物治疗以安全、有效、副反应小等优点成为除手术、放疗、化疗后的第四种治疗模式,并已逐渐被医护工作者和病人所接受。免疫细胞疗法是在多种免疫活性分子的作用下,通过体外培养可以消除肿瘤患者体内的免疫抑制因素,有效活化和扩增免疫活性细胞,回输体内后直接杀伤或诱导免疫效应细胞杀伤肿瘤细胞。人们先后研究了淋巴因子激活的杀伤细胞、肿瘤浸润淋巴细胞、CD3单抗激活的杀伤细胞,但因体外增殖数量少,白细胞介素2(interleukin22,IL22)输注,取材困难及细胞毒力低下等原因,这些细胞的临床应用受到极大限制,细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine2inducedkillercells,CIK细胞)是将人外周血单核细胞在体外经过多种细胞因子共同诱导而获得的一群异质细胞。同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子,兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和自然杀伤细胞的非主要组织相容性复合物(majorhistocompatibilitycomplex,MHC)限制性杀瘤特点,被认为是肿瘤过继免疫治疗的新希望。
1 CIK细胞生物学活性
1.1增殖活性高 大部分研究者均通过干扰素C、rIL22和抗CD3McAb等因子诱导外周血或脐血中的 CIK细胞,经14~21d扩增的CIK细胞其比例可由0.10%~0.13%,上升至19.0%~20.5%,细胞数量平均增加25倍(2.2~525倍),CIK细胞的高增殖活性解决了体外扩增效应细胞 所获细胞数目少的难题。
1.2杀瘤活性强 CIK细胞很强的细胞毒活性源于其较高的存活率和较强的增殖能力。近期研究表明,CIK细胞不仅以非MHC限制杀伤靶细胞,而且以MHC限制的方式杀伤靶细胞,树突状细胞(dendriticcel,lDC)以MHC限制的方式呈递抗原给CIK细胞中的CD4+或CD8+T淋巴细胞,使其中的细胞毒T淋巴细胞大量扩增,激活CIK细胞中的MHC限制性杀伤功能,从而在抗肿瘤免疫治疗中,清除残存的肿瘤细胞,发挥更强大的细胞毒作用,更有效的阻止或延缓肿瘤的复发。Schimidt2Wolf等研究发现,CIK细胞对多药耐药肿瘤细胞同样敏感,对化疗敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞杀伤效果相似。Mehta等观察到CIK细胞杀瘤活性不受免疫抑制剂CsA、FK506等的影响。
1.3杀瘤谱广 CIK细胞又称自然杀伤细胞样T淋巴细胞,既具有T淋巴细胞强大杀伤活性,也具有自然杀伤细胞杀伤时的非MHC限制性。对于多种肿瘤细胞系,包括自然杀伤敏感的白血病细胞株K562和自然杀伤不敏感的宫颈癌细胞株Hela、人B淋巴瘤细胞系OCI2LY8等,均表现出强大的杀伤活性。
1.4对正常骨髓造血前体细胞毒性小Schmidt2 Wolf等 研究认为,CIK细胞对正常骨髓细胞毒性较小,可以保存>75 %的粒细胞2巨噬细胞集落形成单位集落。
2 CIK细胞作用机制
2.1对肿瘤细胞的直接杀伤 CIK细胞对靶细胞的识别结合是非TCR和非MHC限制性的,可能是通过 淋巴细胞功能相关抗原1和细胞间黏附分子1相互 识别结合而发生作用。Mehta等研究认为,CIK细胞释放胞质颗粒入细胞外间隔,通过颗粒内含物发挥对靶细胞直接杀伤作用。
2.2活化后产生大量细胞因子的抑瘤杀瘤作用Linn等研究证实,培养的CIK细胞可以分泌多种细胞因子,如IL210、IL24、干扰素C等,不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用,还可通过调节机体免疫系统反应性间接杀伤肿瘤细胞。
2.3诱导肿瘤细胞凋亡Verneris等曾研究CD3+ CD56+ 细胞对Fas介导的凋亡系统的敏感性,与Fas结合可以导致一小部分CIK凋亡,但并不影响CIK对肿瘤细胞的杀伤毒性,说明CIK细胞对FasL高表达的肿瘤细胞具有耐受性,削弱肿瘤免疫逃逸机制。CIK细胞还能活化肿瘤细胞凋亡基因,使FLIP、Bcl22、Bcl2xL、DAD1及survivin基因表达上调,从而诱导肿瘤细胞凋亡。
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2.4促进T细胞增殖活化 任欢等认为,CIK细胞体内抗瘤作用可能与促进宿主体内T细胞增殖活化有关,并推测原始的CD3+CD56+ T细胞随CIK输注体内后,在宿主机体状态或肿瘤抗原刺激下转变成具有杀瘤活性的细胞毒性T细胞,发挥抗瘤作用。
3 CIK细胞目前研究现状
3.1联合抗原递呈细胞 CIK细胞表面不表达Fc受体,不能产生抗体依赖性的细胞毒作用。DC是目前发现的功能最强的专职抗原呈递细胞,在激发T细胞免疫应答及提高T细胞对DC所提呈肿瘤抗原的识别发挥着重要作用。将DC和CIK细胞进行混合培养,将使培养物的杀伤活性明显增加。Marten等将DC和CIK细胞一起培养后,二者所分泌的细胞因子及表面分子表达的改变促进二者增殖,提高细胞毒效应,使机体的先天和后天免疫均被激活。将DC、CIK和某些抗原肽共同培养,可以增强对某些缺乏特异性抗原的肿瘤细胞的杀伤能力。
3.2转染多药耐药基因 多药耐药被认为是影响化疗效果的主要障碍之一,与肿瘤细胞表面多药耐 药1基因的大量扩增和P糖蛋白的过表达有关。杨永红等实验证明了电穿孔转多药耐药l基因后,CIK细胞依然保持原有的杀伤肿瘤细胞的活性。转基因成功诱导CIK细胞产生多药耐药性并保持肿瘤杀伤活性不变,有可能使得CIK细胞免疫治疗和化疗同时进行,从而扩大CIK细胞治疗的应用范围。
3.3 CIK细胞活性的影响因素为进一步提高CIK细胞的增殖率和细胞活性,人们在逐渐改进CIK细胞的体外培养和处理方法。3.3.1 外源性细胞因子 CIK细胞的体外扩增及细胞毒活性依赖于外源性细胞因子,有实验比较了外源性IL22、IL27、IL212对CIK细胞的影响,发现在培养体系中IL27存在使标志细胞毒活性的淋巴细胞功能相关抗原1/CD11a的表达量相应增高,并产生了大多数的CD28+ 细胞,从而增强了T细胞受体的共刺激作用。IL212会降低CIK细胞表面细胞间黏附分子1表达,提高CD56的表达,可增加CIK细胞中坏死细胞的比例,发挥重要的抗恶性肿瘤组织的细胞毒活性。Qin等研究表明,在CIK细胞培养体系中,加入植物血凝素能增加CIK细胞的增殖能力和抗肿瘤活性。 3.3.2 培养基 蒋永新等研究发现,无血清培养基培养的CIK细胞增殖高峰较晚(14~17d),增殖倍数高,在细胞表型,不同的效靶比时对肿瘤细胞的生长抑制与诱导凋亡方面,与完全培养基无显著差别,可完全取代完全培养基。
3.4不同来源CIK细胞的研究 目前,常用的CIK细胞主要来自异体正常供者,而CIK细胞应用于临床,就要保证避免意外感染的机会,许多学者在研究寻找更有效的前体细胞。3.4.1 自体CIK细胞 用患者自身的CIK细胞经体外扩增回输,可避免由于交叉感染引发的其他疾病,安全性得到了极大提高。Shi等将自体CIK细胞回输原发性肝细胞癌患者体内后,外周血DC1和DC2的比例显著升高,提高了患者机体的免疫应答水平,改善了肝脏功能,患者的症状减轻,无不良反应。3.4.2 脐血CIK细胞 脐血采集方便,来源广泛,输注脐血CIK细胞不易引起严重移植物排斥反应, 对其研究不断深入。王稼祥等实验发现,脐血CIK细胞体外扩增快,杀伤活性强,对肿瘤细胞的作用显著优于外周血CIK细胞。大量体外实验已为进一步临床应用奠定基础,而脐血CIK细胞输入患者后的疗效还有待进一步的临床实验去检验。3.4.3 骨髓CIK细胞有研究者发现,骨髓来源CIK细胞增殖能力较外周血来源的CIK细胞稍差,但仍具有相当高的增殖能力,且在细胞毒方面与外 周血CIK细胞相似。
4 CIK细胞临床应用
为安全推广自体CIK细胞过继免疫治疗,必须用自体血浆或无血清培养基取代传统的添加牛源性血清或人AB型血清的培养方法,以减少患者意外感染疾病的机会。目前国内外制备的用于过继免疫治 疗的CIK细胞,实际是体外扩增出的CD3+CD8+ ,CD3+ CD56+ 为主的一类异质细胞群。李思毅通过DC和CIK共培养获得大量舌鳞癌患者外周血自体DCCIK细胞,局部注射这些细胞,发现能够延长裸鼠Tca8113移植瘤的成瘤时间,这对于人口腔舌鳞癌的临床治疗有重要的意义。
5 不良反应的观察
5.1寒战、发热 寒战、发热是最常见的不良反应,我科曾有3例病人出现寒战,2例病人出现发热,经过对症处理后症状消失。
5.2皮肤红疹 要求病人避免刺激皮肤的某些习惯,如剪指甲、阳光下暴晒,使用刺激性大的洗涤剂或化妆品等;保护皮肤的完整性,提倡水浴,必要时遵医嘱给予钙剂、氯苯那敏或激素制剂等。
5.3变态反应 严重的变态反应可出现过敏性休克,对于一些过敏体质的病人需在输前使用抗过敏药物,可用苯海拉明、异丙嗪等。本组中有1例病人在回输2min后出现呼吸困难、面色潮红、心跳加快等过敏性休克前的症状,立刻停止输液并同时采取抗过敏的一系列措施,使病人转危为安。
5.4神经系统改变 病人会出现头痛、高血压、精神恍惚等,应密切观察血压及意识的变化,回输期间与病人交谈,分散病人的注意力,使病人在轻松的环境中做治疗。
5.5其他不良反应 生物因子治疗过程中还可能产生一些特殊的较少见的副反应,如味觉变化、腹泻、黄疸、情绪变化、肺水肿、性功能紊乱、胃炎、脱发、贫血、代谢紊乱、肾中毒或血小板减少症等,护士要严密观察并做相应的处理。
6 讨论
CIK细胞被喻为是一种直攻肿瘤病灶的细胞导弹,它对肿瘤细胞的识别能力特别强,能精确点射肿瘤细胞,但不会伤及无辜的正常细胞,尤其对手术后或放化疗后病人效果显著,能消除残留微小的转移病灶,防止癌细胞扩散和复发,提高机体免疫力,因此,CIK细胞被认为是新一代的过继细胞免疫治疗的首选方法。作为免疫治疗的方法之一,应用CIK细胞因其可大量扩增,细胞毒活性强,可杀伤自体和异体多种肿瘤细胞,CIK细胞副反应少,CIK细胞回输有良好的应用前景。本组病人经CIK细胞治疗后有部分病人主诉有食欲、体力、睡眠改善、疼痛减轻等,这些体征的改善可能与输入CIK细胞在体内分泌的一些细胞因子如白介素2(IL-2)的催眠作用,干扰素(IFN)和IL-2的镇痛等作用有关,这些有利于提高病人的生活质量。CIK细胞在其培养的第15天左右体外细胞毒活性最强,所以,如果CIK细胞能够得到新鲜回输,及时观察到临床上的副反应,并制止其发生,可以增加CIK细胞的疗效,提高病人的生活质量。
论文作者:张润萍,赵增虎,刘娜
论文发表刊物:《中医学报》2015年7月
论文发表时间:2015/10/20
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