（1金华职业技术学院医学院 浙江 金华 321000；2金华食品药品检验所 浙江 金华 321000）
【摘要】 目的：腹腔注射40%四氯化碳加食用白酒制备肝硬化大鼠模型。方法：40只雄性SD大鼠随机分为模型组(n=30)和对照组(n=10)。模型组按2ml/kg剂量腹腔注射40%四氯化碳食用油溶液，每周2次，连续7周，对照组注射等量生理盐水，分别于4周末和7周末检测模型组大鼠肝功能及组织病理学变化。结果：模型组大鼠血清肝功能丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶显著增高，至第7周时可观察到大鼠肝组织出现结节状增生的假小叶，为典型肝硬化病理表现。模型组动物成活率为75%，造模成功率为81%。结论：该方法可成功地建立大鼠肝硬化实验模型，可用于相关实验研究。
【关键词】 四氯化碳；腹腔注射；大鼠；肝硬化；食用白酒
【中图分类号】R965.3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）03-0077-02
肝硬化是临床最常见的慢性肝病，在欧美等发达国家，因肝硬化致死人数仅次于恶性肿瘤、心血管病、脑血管病和意外事故，居死亡原因第5位，在美国中年人中则为位居第4位的死亡原因。国内每年死于肝硬化及并发症的患者达50万，主要原因是病毒性肝炎肝硬化导致[1-2]。四氯化碳是重要的化工原料和有机溶剂，对肝、肾有严重损害作用，其可在体内转变为自由基，扰乱肝细胞膜上类脂质的代谢，引起肝细胞坏死，是经典的实验性肝损伤动物模型所用外源性化合物。本实验通过腹腔注射四氯化碳加食用白酒制备肝硬化大鼠模型，以期为研究治疗肝硬化的药物提供实验动物模型。
1.实验材料与方法
1.1 实验材料
健康雄性SD大鼠40只，清洁级，体质量200～250g，由浙江省实验动物中心提供(许可证号：SCXK(浙)20140001)，随机分成2组，模型组30只，对照组10只；四氯化碳（上海化学试剂厂）、生理盐水（浙江医药新昌制药厂）、金龙鱼食用调和油、市售品牌白酒等。
1.2 实验方法
取四氯化碳和金龙鱼食用调和油按体积比为4:6配制，充分摇匀，制备成浓度40%四氯化碳溶液。大鼠适应性喂养一周后开始造模，40%四氯化碳食用油溶液腹腔注射，每周2次，按2ml/kg标准给药，连续7周；同时稀释市售白酒作日常饮品，前2周用含乙醇5%饮品，以后每周乙醇浓度递增5%，直至第7周达30%浓度。对照组每周2次腹腔注射生理盐水，剂量同模型组，自来水饮用。在第4周时，取模型组和对照组各2只，采用脊椎脱臼法处死大鼠，开腹暴露肝脏，取一小块肝左叶，切下1小块置于10%福尔马林溶液中，HE 染色进行组织病理学检查。第7周末，随机抽取模型组和对照组大鼠各8只，眼眶取血1.5ml测定肝功能，处死模型组所有大鼠，HE染色检查成模率[3]。
1.3 统计学分析
采用SPSS13.0软件进行统计学处理，肝功能实验数据以均数±标准差（x-±s）表示，两组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.实验结果
2.1 一般情况
在造模过程中，模型组大鼠在造模第二周时即出现活动减少，精神萎靡，食欲不振，易激怒、暴躁、撕咬等现象，前期体重有所下降，后期体重增长缓慢。对照组大鼠活动如常，饮食量正常，反应机警，体重均明显增加。在整个实验过程中，模型组大鼠共死亡7只，前2周共死亡4只，第3周时死亡1只，第5周时死亡2只。对照组均健康。
2.2 肝功能检查
7周末，模型组和对照组各8只，全自动生化分析仪进行肝功能检测，见表1。
2.3 HE染色结果
对照组大鼠肝小叶结构完整清晰，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，肝细胞无变性坏死，无纤维间隔形成，见图1。4周末模型组大鼠肝细胞部分区域早期假小叶形成或形成倾向，见少量纤维间隔，肝细胞无明显变性坏死，见图2。7周末模型组大鼠肝小叶结构破坏，被大量结节状增生的假小叶取代，小叶间纤维间隔形成明显伴慢性炎细胞浸润，部分肝细胞变性坏死，肝硬化模型建立，见图3。
2.4 造模成功率
模型组大鼠一共30只，有2只在4周末作肝组织检查，至第7周一共死亡7只，模型动物成活率为75%，按肝硬化标准达到要求的大鼠有17只，造模成功率为81%。
3.讨论
肝硬化模型的制作方法包括四氯化碳法、二甲基亚硝胺法、硫代乙酰胺法、胆总管结扎法和乙醇性肝硬化模型等，其中二甲基亚硝胺法造模时间较短，可以相对缩短实验时间，但由于二甲基亚硝胺管控严格，购买困难，所以实验改由四氯化碳法造模[4]。
在模型制备预试验时，初始按照40%四氯化碳3ml/kg的标准给药，发现大鼠出现体重迅速下降、活动少，并相继死去现象，所以把给药剂量下调为2ml/kg。造模给药方法原来采用灌胃法，在造模过程中发现该法操作复杂，剂量不能严格把握，而且动物耐受性差，且易污染环境和伤害实验人员，因此采用腹腔注射给药，该法操作简单、吸收快、肝药物浓度高，且能够缩短造模时间，动物容易耐受，动物死伤也少[5]。
大鼠肝功能结果显示，丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶显著增高，和对照组比较有显著性差异，说明四氯化碳可造成大鼠肝脏损害。但在整个造模期内，总蛋白、白蛋白和球蛋白水平无显著变化，而且白蛋白和球蛋白的比值并未出现倒置，证明在四氯化碳诱导大鼠肝硬化造模中，蛋白指标不宜作为是否成功的观察指标。
乙醇是肝硬化的重要致病因素，与四氯化碳联用造模能够提高成功率。乙醇经肝代谢后产生乙醛，乙醛与蛋白质结合会干扰正常代谢，对肝产生直接的毒性作用[4]。在造模实验中，原来采用10%乙醇溶液作为模型组大鼠饮用水，大鼠出现拒服现象，后用食用白酒替代后，大鼠饮水情况正常，在实验过程中，把含乙醇量逐步上升，由5%直至30%，大鼠饮用正常。
【参考文献】
[1]杨广栋，吕文良，陈兰羽，等.早期肝硬化的治疗进展[J].现代中西医结合杂志，2012，21（15):1699-1701.
[2]刘瑶，吴同玉.中医治疗乙肝肝硬化的研究近况[J].浙江中医药大学学报，2013（06):171-173.
[3]蒋健敏，陈民利，实用医学实验动物学[M].第1版，杭州:浙江人民出版社，2009:82-83.
[4]崔承虎，金世柱，韩明子.四氯化碳诱导肝硬化动物模型的相关影响因素[J].医学研究生学报，2015，28（09):910-914.
[5]于晓红，金博，邱慧彬等.四氯化碳皮下注射诱导兔肝硬化模型的建立[J].实验动物科学，2011，28（02):40-42.
基金项目：金华市科学技术研究计划项目（2014-3-035）
论文作者:陈菲1,王建美1,盛柳青1,裘颖儿2
论文发表刊物:《医药前沿》2017年1月第3期
论文发表时间:2017/2/20
标签：肝硬化论文; 大鼠论文; 模型论文; 腹腔论文; 对照组论文; 肝功能论文; 乙醇论文; 《医药前沿》2017年1月第3期论文;